ICS 65.020.01 CCS B 01 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 3256 2023 胡萝卜抗 根 腐病水 平室内鉴 定技术规 程 Code for laboratory identification of carrot root rot disease 2023-12-15 发布 2024-01-15 实施 内蒙古自 治区市 场 监督管理 局 发 布 DB15/T 3256 2023 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分：标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定起草。本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。本文件由内蒙古自治区果蔬标准化技术委员会（SAM/TC 25）归口。本文件起 草 单位：内 蒙古 自治区 农牧 业科 学院、内 蒙古农 业大 学。本文件 主要 起草 人：韩凤 英、张 艳萍、王 永、扈顺、高婧、付 崇毅、孙 平平。DB15/T 3256 2023 1 胡萝卜抗 根腐病 水平室内 鉴定技 术规程 1 范围 本文件 规定 了室 内条 件下 胡萝卜 抗根 腐病 鉴定 材料 的选择 与鉴 定方 法。本文件 适用 于胡 萝卜 品种（系）在室 内条 件下 对根 腐病抗 性水 平的 鉴定。2 规范性 引用 文件 本文件 没有 规范 性引 用文 件。3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。胡萝卜 根腐 病 carrot root rot disease 由茄病 镰刀 菌(Fusarium solani)或尖 孢镰 刀菌（Fusarium oxysporum）侵 染引 起 胡萝卜 根部 腐烂。抗性评 价 evaluation of resistance levels 通过事 宜技 术方 法判 别植 物对特 定病 害的 反应 程度 和抵抗 水平。人工接 种 artificial inoculation 在事宜 条件 下，通过 人工 操作将 接种 体置 于植 物体 适当部 位并 使之 发病 的过 程。4 鉴定材 料准 备 对照选 择 选用中 抗以 上抗 病材 料。选用高 感材 料。病原菌 病原菌 为 茄 病镰 刀菌(Fusarium solani)或 尖孢 镰刀 菌（Fusarium oxysporum）。培养基 选用PDA 培 养基。DB15/T 3256 2023 2 5 鉴定方 法 PDA 培 养基 制备 将马铃 薯去 皮切 成2 cm 3 cm 的小 块，取200 g加入1000 mL 水，在锅 内煮20 min 30 min，至马 铃薯软而 不烂 时，用2 层纱 布 过滤，滤液 加入 琼脂 粉15 g 18 g，加 热搅 拌至 融化，再加 葡萄 糖20 g搅拌溶解，然后 用蒸 馏水 定容 至1000 mL，分装 到三 角瓶 内，121 高压 湿热 灭菌20 min，在无 菌操 作台 上分别倒 入培 养皿 中，冷却 至室温 备用。病原菌 活化 将保存 的胡 萝卜 根腐 病菌 菌丝体 接种 在PDA 平 板上，置于25 培养 箱中 培养。待菌落 形成 后在 菌落边缘打 取直 径为4 mm 菌丝 块接于 新的PDA 培养 基中 央 进行活 化培 养。待 菌落 长 到培养 皿直 径的80%时，用打孔器 在菌 落边 缘打 取菌 丝块（直径4 mm），用于 接种。人工接 菌方 法 选取健 康的 胡萝 卜肉 质根,先用流 水冲 洗干 净，再 用75%的酒 精进 行表 面消 毒10 min，然 后用 无菌 蒸馏水冲 洗3 遍，晾干。无 菌 的盒中 放入 灭菌 滤纸，每 个盒中 铺有2层 滤纸，将 胡 萝卜肉 质根 放入 盒中，然后喷适 量的无 菌蒸 馏水保 湿。把 在PDA 上培养 的菌 落 边缘切 取的菌 丝块 分别倒 置于胡 萝卜肉 质根 上，每个接种1个 菌丝 块，同 时以 接种PDA 培 养基 圆片 为空 白 对照，每 个品 种（系）3次 重 复。然后 将其 置于25 恒温培 养箱 中黑 暗培 养，每天观 察其 发病 情况 和症 状，并 拍照 记录。调查和 抗性 评价 接种的 胡萝 卜肉 质根 培养48 h 后，用十 字交 叉法 测量 病斑直 径（同 一病 斑选择3 个不同 角度 测量3次，取平均 数），根 据表1评 价 胡萝卜 品种（系）的 抗病 性。表1 胡萝卜 对根 腐病 抗性 分级 标准 抗病型 病斑直径 mm 免疫 I 0 高抗 HR 0 5 中抗 MR 5 10 中感 MS 1020 高感 HS 20 鉴定记 载 胡萝卜 抗根 腐病 鉴定 结果 记载表 格见 表2。DB15/T 3256 2023 3 表2 胡萝卜 根腐 病室 内抗 性鉴 定结果 记载 内容 编号 胡萝卜品种（系）来源 抗性评价 备注 1.采集时间：2.接种时间：3.调查日期：鉴定技 术负 责人（签 字）：