ICS 65.020.20 CCS B 05 DB3705 东营市地方标准 DB 3705/T 112023 野大豆耐 盐性鉴定 技术规程 Technical code of practice for identification of salt tolerance in wild soybean 2023-10-26 发布 2023-11-26 实施 东营市市 场监管 管 理局 发 布 DB 3705/T 11 2023 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规 范性 引用 文件.1 3 术 语和 定义.1.1 3.1 野 大豆.1 3.2 耐 盐性4 鉴 定准 备.1 培养 容器 的选 择.1 4.1 野大 豆种 子的 选择 与 处理.1 4.2 盐溶 液的 制备.2 4.3 5 萌 发期 处理.2 播种.2 5.1 培养.2 5.2 性状 调查.2 5.3 测定 值计 算.2 5.4 6 苗 期处 理.4 播种.4 6.1 培养.4 6.2 性状 调查.4 6.3 测定 值计 算.4 6.4 7 耐 盐性 鉴定.5 种子 萌发 期耐 盐性 鉴 定.5 7.1 苗期 耐盐 性鉴 定.5 7.2 附录A（资 料性）Hoagland 营 养液 组分 含量 表.7 DB 3705/T 11 2023 II 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标准 化工 作导则 第1 部分：标准化 文件 的结构 和起草 规则 的规 定起草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任。本文件 由东 营市 农业 农村 局提出、归 口并 组织 实施。本文件 起草单 位：黄河三 角洲农 业高新 技术 产业示 范区盐 碱地综 合利 用服务 中心、山东师 范大 学、山东师 范大 学东 营研 究院、东 营市 农业 科学 研究 院、中国农 业科 学院 烟草 研究 所、山东 盐碱 地现 代农 业有限责 任公 司、国家 盐碱 地综合 利用 技术 创新 中心。本文件 主要 起草 人：陈敏、徐化 凌、李义 强、王菊 英、宁 凯、王宝 山、徐宗 昌、陈 小芳、刘 青、袁芳、赵 婷婷、韩 国良、郭 建荣、范海、杨 玲、陈娟、张彩 霞、侯雪 婷、李春 鹏。DB 3705/T 11 2023 1 野 大豆耐 盐性鉴定 技术规 程 1 范围 本文件 描述 了野 大豆 萌发 期和苗 期耐 盐性 鉴定 的鉴 定前准 备、萌 发期 和苗 期 处理、测 定值 计算、规定了耐 盐性 的分 级标 准等。本文件 适用 于野 大豆 种质 资源萌 发期 和苗 期耐 盐性 鉴定。2 规范性 引用 文件 本文件 没有 规范 性引 用文 件。3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。3.1 野大豆 wild soybean 未经过 人类 选择 和栽 培的 豆科大 豆属 一年 生缠 绕草 本植物。注：学名为Glycine sonja Sieb.et Zucc.，抗 性 强，遗 传 品 质 好，是 我 国 重 要 的 种 质 资 源，被列 为 我 国 国 家 二 级重点保护野生植物，具有重要科学研究价值和利用价值。3.2 耐盐性 salt tolerance 植物在 盐胁 迫下 其生 长发 育和产 量形 成对 盐害 的耐 受能力。来源：NY/T3061-2016，3.3 4 鉴定准 备 培养容 器的 选择 4.1 4.1.1 萌发期 容器 的选 择 选用13 cm 13 cm 的无 菌培 养皿。4.1.2 苗期容 器的 选择 选用直 径19 cm、高13 cm 的塑料 培养 盆（盆底 有直 径为1 cm 的孔3个，用 之前 盆底铺 好纱 网），将用蒸馏 水洗 净、烘箱 烘干 的河沙1250 g 装 入培 养盆 作为培 养床。野大豆 种子 的选 择与 处理 4.2 4.2.1 种子选 择 选择纯 度高，发芽 率整齐 的当年 野大豆 种子。每份 待测样 品选取 成熟 饱满的 种子600 粒，置于 干 燥器中。4.2.2 种子处 理 DB 3705/T 11 2023 2 1 g 种 子用10 mL 98%的浓 硫酸浸 泡15 min，并用去离 子水冲 洗3 遍。播 种前 用1.0 g/mL 的氯化汞溶 液消毒10 min，无菌水 清洗4 次，无 菌滤 纸吸 干表 面水 分。盐溶液 的制 备 4.3 配制浓 度为0 mmol/L 和200 mmol/L 的NaCl 溶液：分别 称量0.00 g 和11.70 g NaCl（纯度 9 9.50%），用1/5 Hoagland 营 养液（萌 发期）或者Hoagland 营养 液（苗 期）定容 至1000 mL（Hoagland 营养 液配 方见附录A），搅 拌待 充分 溶 解，溶 液的pH 值用1.0 mol/L 的NaOH 或者HCl 调 整到6.0 0.5。5 萌发期 处理 播种 5.1 在无菌培养皿中铺2层 滤纸，用4.3 的溶液5 mL 浸湿滤纸，将经过4.2 处理 的种子50粒均匀摆放在 培养皿中，封 口膜 封口。对 照为0 mmol/L NaCl，处理 和对照 均设3个 重复。培养 5.2 5.2.1 在光照 培养 箱 中28 暗 培养2 d，萌发 后，转移 至温室。5.2.2 温度 为28/23、相对 湿度 80%、光源 为白 光，光照强 度 750 lx1250 lx，每天 光照 时 数 16（光）/8 h（暗）。5.2.3 每2 d 定时 观察 及更 换同 浓度溶 液浸 泡的 滤纸。性状调 查 5.3 培养第2 d 开始，每天 统计 全部发 芽粒 数（胚根 突破 种皮 1.5 mm2 mm），用于计算 发芽 率、发 芽势、发 芽指 数；萌发 培养 第7 d 测量 胚根 长（种子 下 部到根 顶端 的长 度）。测定值 计算 5.4 5.4.1 发芽率(G)计算 按式（1）计算。式中：G 发 芽率，单 位为 百分 号（%）；N7 第7 d 全部 发芽 种子 数，单位 为粒；Ns 供 检种 子数，单 位为 粒。5.4.2 发芽势（GF）计算 按式（2）计算。式中：GF 发 芽势，单 位为 百分 号（%）；(1)(2)DB 3705/T 11 2023 3 S4 第4 d 全部 发芽 种子 数，单位 为粒；Ns 供 检种 子数，单 位为 粒。5.4.3 发芽指 数（GI）计算 按式（3）计算。式中：GI 发 芽指 数；Gt 处 理后 第t 天的 绝对 发 芽数，单位 为粒；Dt 相 应的 发芽 天数，从 培养的 第2 d 开 始统 计，至 第7 d，单 位为 天（d）。5.4.4 相对发 芽率(RG)计算 按式（4）计算。式中：RG 相 对发 芽率；Gt 盐 处理 发芽 率，单位 为百分 号（%）；Gck 对 照发 芽率，单 位为 百分号（%）。5.4.5 相对发 芽势（RGF）计算 按式（5）计算。式中：RGF 相对 发芽 势；GFt 盐处 理发 芽势，单 位 为百分 号（%）；GFck 对照 发芽 势，单位 为 百分号（%）。5.4.6 相对发 芽指 数（RGI）计 算 按式（6）计算。式中：RGI 相对 发芽 指数；GIt 盐处 理发 芽指 数；GIck 对照 发芽 指数。5.4.7 相对胚 根长（RRL）计算 按式（7）计算。(3)(4)(4)(5)(6)(7)DB 3705/T 11 2023 4 式中：RRL 相对 胚根 长；RLt 盐处 理胚 根长，单 位 为厘米（cm）；RLck 对照 胚根 长，单位 为 厘米（cm）。6 苗期处 理 播种 6.1 将经过4.2 处理 的种 子30 粒 均匀摆 放盛 有干 净河 沙的 培养盆，上 层均 匀地 覆上1 cm 厚的河沙，浇250 mL 去离子水。处 理和 对照 均设3 个重 复。培养 6.2 培养盆 放至 温室，温 室条 件按5.2.2 规 定执 行。每天 每盆浇 去离 子水250 mL，发芽后（约4 d）每 天浇Hoagland 营养 液250 mL 继续生 长直 到 第 一片 三出 复叶完 全展 开（约15 d），此时进 行盐 处理，处理 组每天每 盆浇NaCl溶液250mL，对照组每 天每盆 浇Hoagland 营 养液250 mL。性状调 查 6.3 处理第7 d测 定主根 长（种 子下部 到根顶 端的 长度）、主茎 长（种 子基 部到幼 苗顶端 的长度），称量地上 干生 物量（河 沙表 面以上 幼苗 所有 部分 的干 重）。测定值 计算 6.4 6.4.1 相对主 茎长（RMSL）计算 按式（8）计算。式中：RMSL 相对 主茎 长；MSLt 盐处 理主 茎长，单 位为厘 米（cm）；MSLck 对照 主茎 长，单位 为厘米（cm）。6.4.2 相对主 根长（RMRL）计算 按式（9）计算。式中：RMRL 相对 主根 长；MRLt 盐处 理主 根长，单 位为厘 米（cm）；MRLck 对照 主根 长，单位 为厘米（cm）。6.4.3 相对地 上干 重（RSDW）计 算 按式（10）计算。(8)(9)DB 3705/T 11 2023 5 式中：RSDW 相对 地上 干重；SDWt 盐处 理地 上干 重，单位为 克（g）；SDWck 对照 地上 干重，单 位为克（g）。7 耐盐性 鉴定 种子萌 发期 耐盐 性鉴 定 7.1 耐盐指 数按 式（11）进行 计算：式中：STIg 种子 萌发 期耐 盐指 数；RG 相 对发 芽率；RGI 相对 发芽 指数；RGF 相对 发芽 势；RRL 相对 胚根 长。根据萌 发期 耐盐 指数 对野 大豆种 质进 行耐 盐性 分级，见表 1。表1 野大豆 萌发 期耐 盐性 鉴定 标准 耐盐级别，级 萌发期耐盐指数（STIg）耐盐性 1 0.80STIg 高耐盐 2 0.60STIg0.8 0 中耐盐 3 0.40STIg0.6 0 低耐盐 4 0.20STIg0.4 0 敏感 5 STIg0.2 0 高敏感 苗期耐 盐性 鉴定 7.2 耐盐指 数按 式（12）进行 计算：式中：STIs 苗期 耐盐 指数；RMSL 相对 主茎 长；RMRL 相对 主根 长；RSDW 相对 地上 干重。根据苗 期耐 盐指 数对 野大 豆种质 进行 耐盐 性分 级，见表2。(10)(11)(12)DB 3705/T 11 2023 6 表2 野大豆 萌发 期耐 盐性 鉴定 标准 耐盐级别，级 苗期耐盐指数（STIs）耐盐性 1 0.80STIs 高耐盐 2 0.60STIs0.8 0 中耐盐 3 0.40STIs0.6 0 低耐盐 4 0.20STIs0.4 0 敏感 5 STIs0.2 0 高敏感 A A DB 3705/T 11 2023 7 附录A（资料 性）Hoagland 营养 液组 分含 量 表 组分 工作液浓度（mg/L）KNO3 506 NH4NO3 80 KH2PO4 136 MgSO4 241 C10H12N2NaFe 73.4 KI 1.66 H3BO3 12.4 MnSO4 44.6 ZnSO4 17.2 Na2MoO4 0.5 CuSO4 0.05 CoCl2 0.05 Ca(NO3)2 945