ICS 65.020.20 B 61 DB32 江苏省 地 方 标 准 DB 32/T 3889 2020 河滩冬青 组织培养 技术规程 Technical regulation for tissue culture of Ilex metabaptista 2020-10-13 发布 2020-11-13 实施 江 苏 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB32/T 3889 2020 I 前 言 本标准 按照GB/T 1.1 2009 给出 的规 则起 草。本标准 由江 苏省 林业 局提 出 并归 口。本标准 由江 苏省 林业 科学 研究院 起草。本标准 主要 起草 人：张敏、陈庆 生、周鹏、黄婧、郝明灼、李 飞。DB32/T 3899 2020 1 河 滩冬青 组织培养 技术规 程 1 范围 本标准 规定 了河 滩冬 青组 织培养 的母 株选 择、外植 体选择 与处 理、初代 培养、继代 增殖、瓶 外 生 根培养、增殖 苗扦 插、插后 管理 和 记录。本标准 适用 于河 滩冬 青 的 组培快 繁。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的条 款通 过本 标准的 引用 而成 为本 标准 的条款。凡 是注 日期 的引 用文件，其 随后 所 有 的修改单（不 包括 勘误 的内 容）或 修订 版均 不适 用于 本标准。凡 是不 注日 期的 引用文 件，其最 新 版 本 适 用于本标 准。LY/T 1882 2010 林 木组 织培养 育苗 技术 规程 3 母株选 择 选择河 滩冬 青优 树株 系或 无性系 分株。4 外植体 选择 与处 理 4.1 选择 在 4 月6 月，选择 连续 3 d 以上 的晴 天，从母 株上 剪取生 长健 壮无 病虫 害的 当年生 萌芽 条作 为 外植体，截取 部位 以萌 芽条 的中、下部 为宜，规 格以 长度 10 cm 15 cm、直 径 3 mm 左右为宜。4.2 灭菌 用中性 洗洁 精 洗 净外 植体，并用 自来 水冲 洗 10 min 15 min。在 超净 工作 台 上，用 75%乙 醇溶 液 消毒外植 体 30 s，无菌 水冲洗 2 次；再 用 10%次 氯酸 钠溶液 浸泡 外植 体 8 min 10 min，无菌水 漂洗 2 次，每次 5 min，随 后置 于灭 菌 处理过 的 滤 纸上 吸去 表面 水分。5 初代培 养 5.1 培养基 诱导培 养基：MS+0.2 mg/L ZT+2.0 mg/L 6-BA+0.5 g/L 活性 炭，pH5.7。培 养基制 备按 照LY/T 18822010 的规 定进 行。5.2 诱导培 养 将经灭菌 处 理的 外植 体剪 去接触 灭菌 液的 伤口 部位，切成 约 1.0 cm 带芽茎 段，接种 在含 有诱 导 培DB32/T 3899 2020 2 养基的 培养 瓶中，培 养温 度为 24 26，光照 强 度为 1500 lx 3000 lx，光 照时间 为 12 h15 h。培 养30 d，长成 6 cm 8 cm 高 的无菌 试管 苗。6 继代增 殖 6.1 培养基 继代培 养基：MS+4.0 mg/L ZT+0.2mg/L IBA+活性碳0.5 g/L，pH5.7。培 养基制 备按照LY/T 18822010 的规 定进 行。6.2 继代培 养 将诱导 培养 的试 管苗 剪成 1 cm 2 cm 带芽茎 段垂直接种于 继代 培养 基。培养 温度 为 24 26，光照强 度 为 1500 lx 3000 lx，光 照时 间为 12h15h。每隔 50 d 继代 1 次。7 瓶外生 根培 养 7.1 设施 宜在温 室进 行培 养。7.2 容器 宜采用 塑料 穴盘，穴 孔呈 倒锥形，口 径约4.5 cm，高约5 cm。旧穴盘 需清洗 消毒后 才可 使用。7.3 基质 基质选 用 pH 6.2 pH 6.8 的草炭。7.4 基质的 消毒 处理 用0.2%高锰 酸钾 和0.2%多 菌灵交 替喷 洒扦 插基 质至 完全湿 润，用 薄膜 覆盖 堆 捂，待使 用前2 d 3 d揭膜晾 晒，装入 容器 后即 可扦插。8 增殖苗 扦插 8.1 插条处 理 选择生 长健 壮的 增殖 苗，剪去芽 苗根 部膨 大部 分，清水清 洗根 部，按单 株剪 下，每 株剪 成3 cm4 cm带芽茎 段 作 为插 条。8.2 扦插 插条基 部采 用500 mg/L IBA 浸泡30 min，处理 后用 镊 子将组 培苗 基部 插入 基质，深度 为0.8 cm 1.0 cm。8.3 覆膜 扦插后 浇透 水，在穴 盘上 覆盖保 鲜膜，保 温保 湿。DB32/T 3899 2020 3 9 插后管 理 9.1 环境控 制 置于温 度20 30、光照 2 000 lx 2 500 lx、光周 期 16 h/d、湿度80%的环 境条件 下培 养，2 周 3周后 揭膜。9.2 水肥管 理 每隔 3 d 浇一 次水，每 两 周喷一 次叶 面肥，喷 施浓 度为0.1%0.3%的 尿素 溶液。9.3 病 害防 治 每月喷 一次 杀菌 剂，宜采 用0.1%的多 菌灵 和百 菌清 混合药 剂。9.4 出苗 苗高10 cm15 cm，根 系发 达，无 病虫 害，即可 出苗。10 记录 根据 组 织培 养 技 术规 程内 容进行 记录，按 时填 写，做到准 确无 误，记录 保存2 年以上。_