ICS 11.020 C 62 DB32 江苏省 地 方 标 准 DB 32/T 3762.5 2020 新型冠状 病毒检测 技术规范 第5 部分：血清IgM 和 IgG 抗体酶联 免疫 吸附检测 程序 Technical specifications for SARS-CoV-2 detection Part 5:Serum IgM and IgG antibodies test procedure by ELISA 2020-03-02 发布 2020-03-03 实施 江 苏 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB32/T 3762.5 2020 I 目 次 前 言.II 1 范围.1 2 规 范性 引用 文件.1 3 术 语和 定义.1 4 环 境与 设施.1 5 设 备与 耗材.1 6 试 剂与 材料.1 7 样 本采 集.2 8 样 本运 输.2 9 酶 联免 疫吸 附检 测步 骤.2 DB32/T 3762.5 2020 II 前 言 DB32/T 3762 新 型冠 状病 毒检测 技术 规范 目 前分 为以下 部分：第1部 分：生物 样本 采 集、运 输和 保存；第2部 分：病毒 分离 与 鉴定；第3部 分：核酸 荧光PCR 检测 程序；第4部 分：重组 酶介 导 等温扩 增程 序；第5部 分：血清IgM 和IgG 抗体 酶联 免疫 吸附检 测 程序；第6部 分：血清IgM 和IgG 抗体 胶体 金免 疫层析 检 测程序；第7部 分：空气 样本 检 测与评 估；第8部 分：物体 表面 检 测与评 估；第9部 分：医务 人员 职 业暴露 检测 与评 估。本部分 为DB32/T 3762 的第5部 分。本部分 按照GB/T 1.1-2009 给出的 规则 起草。本部分 由江 苏省 卫生 健康 委员会 提出。本部分 由江 苏省 卫生 标准 化技术 委员 会归 口。本 部分 主要 起草 单位：江 苏省疾 病预 防控 制中 心、南京医 科大 学、苏州 第五 人民医 院、苏州 大 学 附二院、昆山 市疾 病预 防控 制中心。本 部分 主要 起草 人：曾晓 燕、朱 宝立、焦 永军、郭 喜玲、迟莹、吴 斌、程军 平、徐 佳南、钱 志 远、罗晓明、沈 欢喜。DB32/T 3762.5 2020 1 新型冠状 病毒检 测 技术规范 第 5 部分：血清 IgM 和 IgG 抗体酶联 免疫吸附 检测程 序 1 范围 本 部分 规定 了新 型冠 状病 毒 者血 清 中 IgM 和 IgG 抗体 酶联 免疫 吸附 检测 的环 境与设 施、设备 与 耗材、试 剂与 材料、血 清样本 采集、酶 联免 疫吸 附实 验操作。本 部分 适用 于新 型冠 状病 毒 感染 确诊 病例、疑 似病 例以及 确诊 病例 的密 切接 触者血 清学 检查。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日 期的引 用文 件，仅 注 日期 的 版本适 用于 本文 件。凡是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有 的修改 单）适用 于本 文件。Doc9284-AN/905 危 险品 航空安 全运 输技 术细 则 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件 3.1 IgM 和 IgG 抗体 IgM and IgG antibodies SARS-CoV-2感染人 体后，除了对 靶器 官产 生致 病过 程外，病 毒基 因组 编码 的 结构蛋 白、非 结构 蛋白还刺 激机 体 免 疫系 统，产生特 异性 免疫 应答，分 泌病原 体特 异性IgM 和IgG 抗体至 血液 循环 中。4 环境与 设施 在BSL-2级实验室 内进 行实 验。5 设备与 耗材 5.1 设备：生物 安全 柜、洗 板 机、酶 标仪（含有 450nm 波长滤 光片）、高 压锅、生物安 全运 输箱、水浴锅。5.2 耗材：个人 防护 装备：N95 及以 上防 护口 罩、护目 镜、一 次性 防护 面罩、医 用无纺 布帽、连 体防护服、一次 性手 术衣、乳 胶手套、防水 靴套、真 空 釆 血管、无 菌螺 旋口 塑料 管。6 试剂与 材料 新型冠 状病 毒人IgM抗体ELISA 检测试 剂盒、新型 冠 状病毒 人IgG抗体ELISA 检测试剂 盒。7 样本采集 DB32/T 3762.5 2020 2 用 真 空负 压 采血 管采 集血液 样 本5mL，室温静置30分钟，1500rpm 2000rpm离心10分 钟，收 集血清于无 菌螺 口塑 料管 中。8 样本运输 同 本标 准 第1部分6.1 和6.2。9 酶联免 疫吸 附 检 测步 骤 9.1 酶联免 疫吸 附实 验-IgM(间接法)9.1.1 根据样本 数 量取 出一 定量 的预包 被抗 原的 酶标 板并 平衡至 室温，每 次实 验设 阴、阳 和空 白复 孔对照；9.1.2 向板中 加 入 100L/管样本 稀释液，然后 向其 中加入 1L 的待测血清（根 据需 要 添加阳 性、阴 性参考对 照），将 酶标 板用 封板膜 封闭，置 37 孵 箱 中孵 育 30 分钟；9.1.3 取出酶 标板 置于 洗板 机上 用洗液 洗涤（或 者用 洗瓶 手工洗 涤）5 次 后，甩干 孔内残 留液 或倒 扣酶标反 应板 在吸 水纸 上拍 去孔内 残留 液；9.1.4 于各孔 中加 入 HRP 标 记的 抗人 IgM 工 作液 1 00L/孔，置 37 孵箱 中孵 育 30 分钟；9.1.5 重复 8.1.3 步骤；9.1.6 将显色 液 A、B 液按 1:1 混 合后取 混合 显色 液每 孔 加 100L，轻拍酶 标反 应板，混匀后 置室 温 5分钟；9.1.7 于各孔 中加 入终 止 液 50L/孔，轻 拍混 匀；9.1.8 将酶标 板置 于酶 标 仪 450nm 波长下，测定 各孔光 吸 收 OD 值；9.1.9 根据检 测试 剂设 计者 的要 求判断 结果。9.2 酶联免 疫吸 附实 验-IgG(间接法)9.2.1 根据样本 数 量取 出一 定量 的预包 被抗 原的 酶标 板并 平衡至 室温，每 次实 验设 阴、阳 和空 白复 孔对照；9.2.2 向板中 加 入 100L/管样本 稀释液，然后 向其 中加 入 1L 的待测血清（根 据需 要 添加阳 性、阴 性参考对 照），亦可 把血 清 在 1:100 稀释 的基 础上 再 进行倍 比稀 释。将酶 标板 用封板 膜封 闭，置 37 孵箱中孵 育 30 分钟；9.2.3 取出酶 标板 置于 洗板 机上 用洗液 洗涤（或 者用 洗瓶 手工洗 涤）5 次 后，甩干 孔内残 留液 或倒 扣酶标反 应板 在吸 水纸 上拍 去孔内 残留 液；9.2.4 于各孔 中加 入 HRP 标 记的 抗人 IgG 工作 液 100 L/孔，置 37 孵箱 中孵 育 30 分钟；9.2.5 重复 8.2.3 步骤；9.2.6 将显色 液 A、B 液按 1:1 混 合后取 混合 显色 液每 孔 加 100L，轻拍酶 标反 应板，混匀后 置室 温 5分钟；9.2.7 于各孔 中加 入终 止 液 50L/孔，轻 拍混 匀；9.2.8 将酶标 板置 于酶 标 仪 450nm 波长下，测定 各孔光 吸 收 OD 值;9.2.9 根据检 测试 剂设 计者 的要 求判断 结果。_