ICS 65.020.20 B 05 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1940 2020 西部沙樱 组织培养 技术规程 Technical Regulation for Tissue Culture of Prunus pumila 2020-07-30 发布 2020-08-30 实施 内 蒙 古 自 治 区 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB15/T 1940 2020 I 前 言 GB/T1.1-2020 DB15/T 1940 2020 1 西 部沙樱 组织培养 技术规 程 1 范围 2 规范性 引用 文件 LY/T 1882 DB15/T 1588 3 术语和 定义 LY/T 1882 DB15/T 1588 4 环境器 具消 毒灭 菌 4.1 洗涤室 和接 种室 消毒 1 h 4.2 培养室 消毒 灭菌 10 d 2 h(HCHO 10 mL/m)(KMnO4 5 g/m)20 min 30 min 4.3 超净工 作台 消毒 灭菌 30 min 70%75%4.4 器具灭 菌 4.4.1 接种器 具灭 菌 1 20 s DB15/T 1940 2020 2 4.4.2 培养容 器消 毒灭 菌 5 培养基 5.1 基本培 养基 MS 1/2 MS 5.2 母液和 激素 配制 与保 存 5.2.1 配制 A 1.0 mg/mL 5.2.2 保存 4 3 5.3 基本培 养基 配制 5.3.1 琼脂融 化 1 L(,700 mL 5.5 g 6 g 5.3.2 糖溶解 30 g 5.3.3 加母液 A 5.3.4 培养基 定容 1 L 5.3.5 基本培 养 基pH 值调 节 pH 5.95 6.0 5.3.6 基本培 养基 分装 240 mL 50 mL 350 mL 65 mL 5.3.7 培养瓶 封口 DB15/T 1940 2020 3 5.3.8 培养基 灭菌 102.9 kPa 1.05 kg/cm2 121 15 min 20 min 5.3.9 培养基 冷却 5.3.10 培养基 贮存 4 6 外植体 6.1 枝条采 集 7 9 9:00 11:00 15:00 18:00 6.2 外植体 灭菌 6.2.1 表面清 洗 30 min 1 2 6.2.2 茎段灭菌 70%75%30 s 3 4 0.1%15 min 5 6.3 外植体 制备 3 mm 5 mm 7 初代培 养 7.1 培养基 MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+GA3 0.5 mg/L 7.2 接种 3 5 1 mm 7.3 培养 23 2 2000 Lx 3000 Lx 12 h/d 14 h/d 20 d DB15/T 1940 2020 4 8 继代增 殖培 养 8.1 培养基 制备 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+GA3 0.5 mg/L 8.2 接种 1 2 3 1 mm 2 s 8.3 培养 23 2 2000 Lx 3000 Lx 12 h/d 14 h/d 30 d 50 d 9 生根培 养 9.1 培养基 1/2 MS+NAA 0.2 mg/L+IBA 0.8 mg/L 9.2 接种 20 mm 30 mm 3 mm 5 mm 8 10 2 s 9.3 培养 23 2 2000 Lx 3000 Lx 12 h/d 14 h/d 10 d 10 炼苗 10.1 瓶苗炼 苗 3 5 50 mm 60 mm 25 2 80%1500 Lx 2000 Lx 1 d 2 d 1 d 2 d 3 d 5 d 12%3 4 10.2 穴盘炼 苗 10.2.1 基质=3 2 1 800 24 h DB15/T 1940 2020 5 10.2.2 穴盘 8 cm 8 cm 10.2.3 瓶苗移 栽 1 10.2.4 温湿度 管理 80 90 20 25 1 70%1 10.2.5 病害防 治 5 d 7 d 800 400 700 700 1500 11 温室 移 植培 养 11.1 移植 18 cm 20 cm 11.2 培养 11.2.1 育苗环 境 20 22 70%80%11.2.2 水肥管 理 1 2 4 d 5 d 20 d 1 11.2.3 病害预 防 7 d 10 d 1 3 4 DB15/T 1940 2020 6 A A 附 录 A（规范 性附 录）MS 培 养基 母液 配制 表A.1 MS 培 养基 母液 配制 表 mg/L mg mL mL/L A NH4NO3 1650 25 41250 1000 40 KNO3 1900 47500 CaCl2 2H2O 440 11000 MgSO4 7H2O 370 9250 KH2PO4 170 4250 B FeSO4 7H2O 27.8 100 2780 1000 10 Na2EDTA 2H2O 37.3 3730 C MnSO4 4H2O 22.3 100 2230 500 5 ZnSO4 7H2O 8.6 100 860 H3BO3 6.2 100 620 KI 0.83 100 83 Na2MoO4 2H2O 0.25 100 25 CuSO4 5H2O 0.025 100 2.5 CoCl2 6H2O 0.025 100 2.5 D 2 200 400 1000 5 B1 0.1 200 20 B6 0.5 200 100 0.5 200 100 E 100 50 5000 500 10 _