杭白菊脱毒种苗生产技术规程DB33／T 2272-2020.pdf
ICS 65.020.20 B 05 DB33 浙江省地方标准 DB33/T 2272 2020 杭白菊脱 毒种苗生 产技术规 程 Technical regulations for virus-free plantlets of Chrysanthemum morifolium 2020-08-26 发布 2020-09-26 实施 浙 江 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB33/T 2272 2020 1 前 言 GB/T 1.1-2009 DB33/T 2272 2020 2 杭 白菊脱 毒种苗生 产技术 规程 1 范围 B Chrysanthemum virus B CVB Tomato aspermy virus TAV Tobacco mosaic virus TMV Cucumber mosaic virus CMV Y Potato virus Y PVY 2 规范性 引用 文件 GB/T 191 GB/T 18862 NY/T 401 NY 525 SN/T 2122-2015 3 术语和 定义 3.1 杭白菊(Chrysanthemum morifolium Ramat.)3.2 脱毒苗 3.2 脱毒组 培瓶 苗 3.3 DB33/T 2272 2020 3 脱毒原 种苗 3.4 脱毒生 产用 苗 3.5 脱毒率 4 生产技 术 4.1 脱毒组 培瓶 苗 4.1.1 外植体 选择 10 11 10:00 16:00 2 cm 3 cm 4.1.2 无菌苗 繁育 1 cm 2 cm 70%75%1 min Tween-20 8 min 10 min 5 8 0.3 mm 0.5 mm 4.1.3 脱毒苗 培育 1.5 cm 2.0 cm 0.3 mm 0.5 mm 3 cm 6 cm 4.1.4 脱毒苗 快繁 6 cm 8 cm 1 2 20 d 30 d 1 4 6 4.1.5 培养条 件 30 mol m-2 s-1 60 mol m-2 s-1 25 2 18 2 12 h 14 h 4.2 脱毒原 种苗 和脱 毒 生 产用 苗 4.2.1 脱毒原 种苗 生产 4.2.1.1 基质准 备:=3:1:1 DB33/T 2272 2020 4 4.2.1.2 定植方 式 1 d 2 d 1 50%75%90%4.2.2 脱毒 生 产用 苗繁殖 4.2.2.1 苗床准 备 667 m2 200 kg 300 kg NY 525 15 kg 1.2 m 1.5 m 30 cm 35 cm 25 cm 35 cm 4.2.2.2 繁殖方式 4.2.2.2.1 4.2.2.2.2 30 cm 3 5 8 cm 10 cm 50%75%90%4.2.2.2.3 40 cm 50 cm,20 cm 25 cm 4.2.2.2.4 3 4 5 分级 与 质量 要求 5.1 5.2 5.3 A 6 抽样与 检测 方法 6.1 抽样 NY/T 401 SN/T 2122-2015 5.2 6.2 检测方 法 B 7 包装、标志、运 输与 贮存 7.1 包装 7.2 标志 DB33/T 2272 2020 5 C GB/T 191 7.3 运输 15 25 60%90%7.4 贮存 7 d 10 d 3 d 8 标准化 生产 模式 图 D DB33/T 2272 2020 6 A A 附 录 A（资料 性附 录）脱毒组 培瓶 苗、脱毒 种苗 的质量 要求、检 验方 法、检验规 则 A.1 质量要 求 A.1.1 脱毒组 培瓶 苗 质 量等 级指 标 A.1 表A.1 脱毒 组培 瓶苗 质量 等级指 标 cm 6.0 10.0 4.0 6.0 mm 3.0 1.0 3.0%100 100 A.1.2 脱毒种 苗质 量等 级指 标 A.2 表A.2 脱 毒种 苗质 量等 级 指标%100 3 mm A.2 检验方 法 1 mm A.3 检验规 则 A.3.1 组批规 则 A.3.2 检验分 类 A.3.2.1 出厂（圃）检验 DB33/T 2272 2020 7 A.3.2.2 型式检 验 A.4 判定原 则 DB33/T 2272 2020 8 B B 附 录 B（资料 性附 录）杭白菊 脱毒 种苗 规定 检测 的病毒 种类 和检 测方 法 B.1 检测病 毒种 类 B Chrysanthemum virus B CVB Tomato aspermy virus TAV Tobacco mosaic virus TMV Cucumber mosaic virus CMV Y Potato virus Y PVY B.2 病毒检 测方 法(DAS-ELISA)(PCR)(PCR)B.2.1 双抗体 夹心 酶联 免疫 吸附(DAS-ELISA)检测 法 NY/T 401-2000 A B.2.2 聚合酶 链反应(PCR)检测 法 B.2.2.1 菊花B 病毒 B ssRNA RNA T oligo-dT RNA cDNA B 5-ACCGAATTCTTAGTCACAATGCCTCCC-3 5-TCCGAGCTCATAGAGACGGCATACCTT-3 Polymerase chain reaction,PCR PCR 94 5 min 94 30 s 52 30 s 72 1 min 35 72 10 min 650 bp T4 DNA pGEM-T CVB B.2.2.2 番茄 不孕 病毒 ssRNA RNA T oligo-dT RNA cDNA 5-CCATCCCTTCAACATCCGAC-3 5-GTTGAAGCGGAAGGAATACG-3 PCR PCR 94 5 min 94 30 s 52 30 s 72 1 min 35 72 10 min 494 bp T4 DNA pGEM-T TAV B.2.2.3 烟草 花叶 病毒 ssRNA RNA T oligo-dT RNA cDNA-ACTCCATCTCAGTTCGTGTTCTTG-GAGCTCTCGAAAGAGCTCCGATTA-PCR DB33/T 2272 2020 9 PCR 94 5 min 94 40 s 50 35 s 72 40 s 30 72 10 min 425 bp T4 DNA pGEM-T TAV B.2.2.4 黄瓜花 叶病 毒 ssRNA RNA T oligo-dT RNA cDNA-GCCACCAAAAATAGACCG-ATCTGCTGGCGTGGATTTCT-PCR PCR 94 5 min 94 45 s 54 1 min 72 45 s 35 72 10 min 593 bp T4 DNA pGEM-T CMV B.2.2.5 马铃薯 Y 病毒 Y ssRNA RNA T oligo-dT RNA cDNA,Y-ACGTCCAAAATGAGAATGCC-TGG TGTTCGTGATGTGACCT-PCR PCR 94 5 min 94 45 s 57 45 s 72 30 s 35 72 10 min 480 bp T4 DNA pGEM-T PVY B.3 电镜检 测法 B.3.1 检测程 序 B Y 1%pH 6.8 1 mm2 2 mm2 2.5%2%Epon 812 2%B.3.2 病毒颗 粒特 征 B.3.2.1 菊花 B 病毒 Betaflexiviridae(Carlavirus)12 nm 15 nm 610 nm 700 nm B.3.2.2 番茄不 孕病 毒 DB33/T 2272 2020 10 Bromoviridae Cucumovirus 29 nm 12 nm B.3.2.3 烟草花 叶病 毒 Virgaviridae Tobamovirus 18 nm 300 nm 310 nm B.3.2.4 黄瓜花 叶病 毒 Bromoviridae Cucumovirus 29 nm 12 nm B.3.2.5 马铃薯Y病毒 Y Potyviridae Y Potyvirus 11 nm 13 nm 680 nm 900 nm DB33/T 2272 2020 11 C C 附 录 C（资料 性附 录）杭白菊 脱毒 苗出 厂（圃）合格证、杭 白菊 脱毒 苗病 毒检验 报告 C.1 杭白菊 脱毒 苗出 厂（圃）合格证 C.1 表C.1 菊 花脱 毒苗 出厂（圃）合 格证 C.2 杭白菊 脱毒 苗病 毒检 测报 告 C.2 表C.2 杭 白菊 脱毒 苗病 毒 检验报 告 B(CVB)(TAV)(TMV)(CMV)Y(PVY)D E F G H I J K L M N O P Q R S T U V W X Y Z AA BB CC DD EE FF GG HH II JJ DB33/T 2272 2020 12 附 录 D（资料 性附 录）杭白菊 脱毒 种苗 标准 化 生 产模式 图 D.1 图D.1 杭 白菊 脱毒 种苗 生 产模式 图 脱毒组 培瓶 苗 脱毒原 种苗 脱毒生 产用 苗 外植体 采样 无菌苗 繁育 脱毒苗 培育 脱毒苗 快繁 10 11 10:00 16:00 2 cm 3 cm 1 cm 2 cm 70%75%1 min Tween-20 8 min 10 min 5 8 0.3 mm 0.5 mm 1.5 cm 2.0 cm 0.3 mm 0.5 mm 3 cm 6 cm 6 cm 8 cm 1 2 20 d 30 d 1 4 6:=3:1:1 1 d 2 d 1 50%75%90%667 m2 2 00 kg 3 00 kg NY 525 15 kg 1.2 m 1.5 m 30 cm 35 cm 25 cm 35 cm 30 cm 3 5 8 cm 10 cm 50%75%90%40 cm 50 cm,20 cm 25 cm 3 4
