I C S 6 5.0 2 0.2 0B 3 8黑 龙 江 省 地 方 标 准D B 2 3/T 2 7 3 5-2 0 2 0水 稻 穗 颈 瘟 人 工 接 种 鉴 定 技 术 规 程2 0 2 0-1 2-0 3 发 布2 0 2 1-0 1-0 2 实 施黑 龙 江 省 市 场 监 督 管 理 局发 布DB23D B 2 3/T 2 7 3 5-2 0 2 0I前 言本 标 准 依 据 G B/T 1.1-2 0 0 9 的 编 写 规 则 起 草。本 标 准 由 黑 龙 江 省 农 业 农 村 厅 提 出。本 标 准 起 草 单 位：黑 龙 江 省 农 业 科 学 院 生 物 技 术 研 究 所。本 标 准 主 要 起 草 人：张 国 民、马 军 韬、邓 凌 韦、赵 文 生、宋 显 东、张 丽 艳、王 春 荣、胡 亚 军、王 永力、张 齐 凤、高 洪 儒、张 君、王 南 博、任 洋。D B 2 3/T 2 7 3 5-2 0 2 01水 稻 穗 颈 瘟 人 工 接 种 鉴 定 技 术 规 程1 范 围本 标 准 规 定 了 水 稻 穗 颈 瘟 人 工 接 种 鉴 定 技 术 的 术 语 与 定 义、环 境 条 件、技 术 流 程、评 价 标 准 和 技 术档 案。本 标 准 适 用 于 水 稻 资 源、品 种（系）等 材 料 对 穗 颈 瘟 抗 性 的 人 工 鉴 定。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的。凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件，仅 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文 件。凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本（包 括 所 有 的 修 改 单）适 用 于 本 文 件。G B 3 0 9 5 环 境 空 气 质 量 标 准G B 5 0 8 4 农 田 灌 溉 水 质 标 准G B 1 5 6 1 8 土 壤 环 境 质 量 农 用 地 土 壤 污 染 风 险 管 控 标 准（试 行）G B/T 1 5 9 7 0 稻 瘟 病 测 报 调 查 规 范N Y/T 3 2 5 7-2 0 1 8 稻 水 稻 稻 瘟 病 抗 性 室 内 离 体 叶 片 鉴 定 技 术 规 程3 术 语 与 定 义下 列 术 语 与 定 义 适 用 于 本 文 件。3.1穗 颈 瘟 和 枝 梗 瘟穗 颈 瘟 是 稻 瘟 病 的 一 种 形 式，发 生 在 穗 颈、穗 轴 和 枝 梗 上，初 期 为 暗 褐 色 小 斑 点，后 逐 步 呈 环 状 或上 下 扩 展，因 品 种 不 同，病 部 分 别 呈 现 黄 褐 色、褐 色 或 黑 褐 色。早 期 发 病 大 多 形 成 全 白 穗 或 局 部 白 穗，晚 期 发 病 则 谷 粒 不 饱 满，千 粒 重 下 降。3.2谷 粒 瘟谷 粒 瘟 是 稻 瘟 病 的 一 种 形 式，发 生 在 谷 壳 和 护 颖 上，早 期 发 病，病 斑 呈 椭 圆 形，较 大，中 央 灰 白 色，以 后 可 逐 渐 扩 展 至 整 个 谷 粒，造 成 灰 白 色 至 暗 灰 色 瘪 粒。后 期 发 病，多 形 成 椭 圆 形 或 近 圆 形 斑 点，褐 色至 红 褐 色，严 重 时 谷 粒 不 饱 满，米 粒 变 黑。3.3人 工 接 种在 适 宜 条 件 下，通 过 人 工 操 作 将 接 种 体 置 于 水 稻 植 株 适 当 的 部 位 并 使 之 发 病 的 过 程。3.4接 种 体能 够 侵 染 水 稻 植 株 并 引 起 病 害 的 病 原 体。3.5注 射 接 种D B 2 3/T 2 7 3 5-2 0 2 02用 医 用 注 射 器 将 一 定 量 的 接 种 体 注 射 进 水 稻 植 株 体 内 的 接 种 方 法。3.6对 照 品 种在 人 工 接 种 鉴 定 时 以 全 感 水 稻 品 种 为 对 照。3.7抗 病 性植 物 体 所 具 有 的 能 够 减 轻 或 克 服 病 原 物 致 病 作 用 的 可 遗 传 性 状。3.8病 情 指 数一 种 评 价 植 物 病 害 发 生 程 度 的 综 合 性 指 标，包 括 植 物 病 害 的 发 病 率 与 严 重 度。其 中，发 病 率 是 指 感病 样 本 数 占 调 查 总 样 本 数 的 百 分 率，表 示 发 病 的 普 遍 程 度；严 重 度 用 分 级 法 表 示，即 将 发 病 的 严 重 程 度由 轻 到 重 划 分 出 若 干 个 级 别，分 别 用 各 级 的 代 表 值 或 百 分 率 表 示。3.9水 稻 品 种水 稻 品 种 包 括 对 照 品 种 和 待 测 水 稻 材 料。3.1 0产 量 损 失 率一 种 评 价 植 物 受 逆 性 条 件 影 响 后 产 量 损 失 程 度 的 指 标，包 括 未 发 病 植 株 产 量 和 发 病 植 株 产 量。以 穗为 单 位，产 量 损 失 率 计 算 公 式 为：%1 0 0/)(B C B A.（1）式 中：A 产 量 损 失 率；B 同 一 小 区 内 未 发 病 穗 产 量，k g；C 同 一 小 区 内 接 种 发 病 穗 产 量，k g。4 环 境 条 件鉴 定 时 的 环 境 条 件，环 境 空 气 质 量 应 符 合 G B 3 0 9 5 规 定；土 壤 环 境 质 量 应 符 合 G B 1 5 6 1 8 规 定；农田 灌 溉 用 水 质 量 应 符 合 G B 5 0 8 4 规 定。5 技 术 流 程5.1 鉴 定 圃 的 建 立 与 小 区 设 计选 择 易 发 病 环 境 条 件 的 较 为 中 间 的 整 块 田 块，有 独 立 的 进 水 口 和 排 水 口。在 鉴 定 圃 内 种 植 对 照 和 待测 材 料。依 据 水 稻 材 料 的 数 量，在 鉴 定 圃 内 布 局 若 干 个 小 区，小 区 内 种 植 待 测 水 稻 材 料，小 区 设 置 为 2行 区，行 距 为 3 0 c m，株 距 为 1 2 c m，每 行 1 5 蔸，单 本 插 秧。根 据 试 验 目 的，设 置 重 复。5.2 田 间 管 理水 稻 种 植 全 过 程 在 常 规 管 理 的 基 础 上，创 造 有 利 于 稻 瘟 病 发 病 的 条 件。不 带 药 移 栽，偏 重 施 用 氮 肥（一 般 情 况 下 比 生 产 用 氮 肥 增 加 3 0%左 右），生 长 过 程 中 可 防 虫、除 草，但 不 能 施 用 任 何 杀 菌 剂。在 水稻 生 长 的 中 后 期，若 发 生 倒 伏，需 及 时 地 搭 建 竹 架。D B 2 3/T 2 7 3 5-2 0 2 035.3 接 种 鉴 定5.3.1 接 种 体 制 备将 稻 瘟 病 菌 接 种 在 燕 麦 片 番 茄 汁 琼 脂 培 养 基 上，于 2 5-2 7 条 件 下 培 养 5 d-7 d，用 无 菌 水 轻 轻 洗下 菌 丝（菌 丝 团 要 小）和 分 生 孢 子，将 其 悬 浮 液 均 匀 涂 于 另 一 新 的 平 板 培 养 基 上（培 养 基 要 适 当 硬 一 些），每 皿 约 4 0 0 l，超 净 工 作 台 中 吹 干。置 于 2 5 培 养 箱 中 培 养 约 3 5-4 0 h 至 培 养 基 表 面 长 出 一 层 稀 疏 的 气生 菌 丝 体。向 菌 落 上 加 少 量 无 菌 水，用 棉 签 轻 轻 擦 去 表 面 的 气 生 菌 丝，并 用 水 将 培 养 基 表 面 的 菌 丝 和 分生 孢 子 清 洗 干 净，待 培 养 基 表 面 晾 干 后 罩 上 2 层 纱 布，用 皮 筋 绑 好，于 2 5 光 照 条 件 下 培 养 至 有 大 量分 生 孢 子 产 生。从 培 养 基 上 洗 下 分 生 孢 子，离 心（3 0 0 0 转/m i n），弃 上 清，沉 淀 下 的 分 生 孢 子 用 0.0 2 5%吐 温 2 0 水 溶 液 悬 浮，血 球 计 数 板 计 数，孢 子 悬 浮 液 浓 度 调 至 2 1 05个 孢 子/m L，可 用 混 合 菌 株 或 单 个菌 株，供 接 种 使 用。5.3.2 接 种 方 法在 水 稻 始 穗 期（稻 穗 抽 出 1/3 左 右）用 医 用 注 射 器 将 合 格 的 孢 子 悬 浮 液 注 入 水 稻 穗 苞 中 下 部，接 种量 为 1 m L/穗，依 据 试 验 所 需，每 个 处 理 接 种 1 0 0 穗 以 上。接 种 后，如 中 午 日 照 强 烈，建 议 应 用 单 层 遮阴 网 进 行 遮 挡，以 创 造 利 于 穗 颈 瘟 发 病 的 田 间 小 气 候。5.4 病 情 调 查5.4.1 调 查 时 间水 稻 乳 熟 期 进 行 调 查，调 查 2 次，间 隔 7 d-1 0 d。5.4.2 调 查 方 法每 个 材 料 接 种 处 理 的 1 0 0 穗 全 部 调 查，记 录 每 穗 水 稻 穗 颈 瘟 的 病 级，结 果 记 入 表 A.1。5.4.3 穗 颈 瘟 病 情 分 级 指 标穗 颈 瘟 病 情 按 以 下 标 准 分 级：0 级：整 穗 无 穗 颈 瘟、枝 梗 瘟 和 谷 粒 瘟；1 级：仅 有 谷 粒 瘟，发 病 子 粒 比 例 2%；2 级：仅 有 谷 粒 瘟，2%发 病 子 粒 比 例 5%；3 级：有 谷 粒 瘟 和 枝 梗 瘟，产 量 损 失 率 1 0%；4 级：有 谷 粒 瘟 和 枝 梗 瘟，1 0%产 量 损 失 率 2 0%；5 级：有 谷 粒 瘟 和 枝 梗 瘟，2 0%产 量 损 失 率 3 0%；6 级：有 谷 粒 瘟 和 枝 梗 瘟，或 穗 颈 瘟，3 0%产 量 损 失 率 5 0%；7 级：有 谷 粒 瘟 和 枝 梗 瘟，或 穗 颈 瘟，5 0%产 量 损 失 率 6 0%；8 级：仅 有 穗 颈 瘟，6 0%产 量 损 失 率 7 0%；9 级：仅 有 穗 颈 瘟，产 量 损 失 率 7 0%。6 评 价 标 准6.1 调 查 数 据 登 记 与 计 算将 水 稻 穗 颈 瘟 的 田 间 调 查 数 据，鉴 定 圃 中 水 稻 农 事 操 作 及 相 关 情 况 进 行 电 子 数 据 登 记。计 算 每 个 水稻 材 料 年 度 间 的 最 高 穗 颈 瘟 病 情 指 数，登 记 到 表 A.2 中。D B 2 3/T 2 7 3 5-2 0 2 046.2 病 情 指 数 计 算 公 式以 穗 为 单 位，当 严 重 度 用 分 级 指 标 表 示 时，病 情 指 数 计 算 公 式 为：)/()(100 DM P Di Pi R.（2）式 中：R 病 情 指 数；Pi 各 级 病 穗 数，个；Di 各 级 代 表 值；P 调 查 总 穗 数，个；DM 最 高 级 代 表 值。6.3 抗 瘟 性 评 价 标 准依 据 水 稻 材 料 的 病 情 指 数 评 价 其 抗 穗 颈 瘟 性，评 价 标 准 见 表 A.3。7 技 术 档 案建 立 水 稻 穗 颈 瘟 人 工 接 种 鉴 定 技 术 档 案，内 容 包 括 环 境 条 件、技 术 流 程、评 价 标 准 及 试 验 数 据 等。D B 2 3/T 2 7 3 5-2 0 2 05附 录 A资 料 性 附 录水 稻 穗 颈 瘟 田 间 调 查A.1 水 稻 穗 颈 瘟 田 间 调 查 见 表 A.1、A.2 和 A.3。表 A.1 水 稻 穗 颈 瘟 田 间 调 查 记 录 表调 查 时 间：水 稻 品 种 名 称：生 育 期：穗数 0 1 2 3 4 5 6 7 8 91234567-表 A.2 水 稻 品 种 病 情 指 数 数 据 表水稻品种编号 水稻品种名称 穗颈瘟病情指数表 A.3 水 稻 穗 颈 瘟 抗 性 评 价 标 准抗性评价 评价标准抗病 R e s i s t a n t（R）病情指数5中抗 M o d e r a t e l y r e s i s t a n t（M R）5 病情指数1 5中感 M o d e r a t e l y S u s c e p t i b l e（M S）1 5 病情指数3 0感病 S u s c e p t i b l e（S）病情指数3 0_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _