ICS 65.020.30 B 44 DB12 天津市 地 方 标 准 DB12/T 862 2019 水产微生 态制剂 乳 酸菌生产 技术规程 Aquatic probiotics-Technical regulation for production of lactic acid bacteria 2019-01-14 发布 2019-02-15 实施 天 津 市 市 场 监 督 管 理 委 员 会 发布 DB12/T 862 2019 I 前 言 本标准 依 据GB/T 1.1 2009 标 准化 工作 导则 第1 部 分：标 准的 结构 和编 写 的要求 起草。本标准 由天 津市 农业 科学 院 提出 并 归 口。本标准 起草 单位：天 津市 农业生 物技 术研 究中 心。本标准 主要 起草 人：谢凤 行、张 峰峰、周 可、赵琼、赵玉 洁、孙海 波、高宝 山。DB12/T 862 2019 1 水 产微生 态制剂 乳 酸菌生 产技术规 程 1 范围 本标准 规定 了 乳 酸菌 生产 中所涉 及的 术语 和定 义、生产环 境 和 设备 要求、生 产技术 流程、质量 检测和储运。本标准 适用 于 水 产微 生态 制剂 乳 酸菌 的生 产。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 所注 日期 的 版本 适用 于 本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB 3095 环境 空气 质量 标 准 GB 3838 地表 水环 境质 量 标准 GB 20287 农用 微生 物菌 剂 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 标准。3.1 乳酸菌 lactic acid bacteria 能 利用 碳水 化合 物产 生 乳 酸的一 类无 芽孢、革 兰氏 染色阳 性细 菌的 总称，在 水产养 殖中 可作 为 饲 料添加剂 和水 质净 化剂。注：本 标 准 中 涉 及 的 乳 酸 菌 主 要 包 括 植 物 乳 杆 菌(lactobacillus plantarum)、嗜 酸 乳 杆 菌(lactobacillus acidophilus)、戊 糖 乳 杆 菌(lactobacillus pentosus)、德 氏 乳 杆 菌(lactobacillus leichmannii)和 粪 肠 球菌(enterococcus faecalis)。3.2 原菌种 the original strain 由单菌 落分 离纯 化，并在 试管上 穿刺 繁殖 保存 的菌 种。3.3 一级菌 种 first class strain 原菌种 在培 养皿 上活 化，挑取单 菌落 接种 至玻 璃瓶 中，并 厌氧 培养 的菌 种。3.4 二级菌 种 second class strain 玻 璃瓶 中的 菌种 接种 至种 子罐中，在 种子 罐中 厌氧 放大培 养的 菌种。4 生产环 境和 设备 要求 4.1 生产环 境 DB12/T 862 2019 2 4.1.1 厂区空 气质 量应 符合 大气 环境质 量标 准 GB 3095 中 类要 求。4.1.2 发酵用 水应 符合 地表 水环 境质量 标 准 GB 3838 中 类水质 要求，冷 却水 及其 他用水 符合 该标 准中类 水质 要求。4.1.3 生产车 间配 备消 毒灭 菌设 施，菌 种储 藏室 和无 菌操 作间与 生产 车间 分开。4.2 生产设 备 生产设 备需 为不 锈钢 发酵 罐，体 积根 据生 产规 模自 定。5 生产技 术流 程 5.1 生产流 程 见附录A。5.2 菌种质 量 5.2.1 用于发 酵的 菌种 应有 菌种 鉴定报 告或 菌株 来源 相关 信息。5.2.2 发酵前 应先 检测 菌种 的纯 度和性 能，如不 纯或 退化，应先 进行 提纯 复壮。5.2.3 菌种在 上罐 生产 之前 需检 测种子 罐中 菌体 的纯 度和 浓度，不能 有杂 菌污 染，浓度达 到每 毫升 亿级以上，发 酵菌 液 pH 4.0。5.3 培养基 5.3.1 原菌种 和一 级菌 种的 培养 基应保 证菌 种生 长的 延滞 期短，生长 旺盛，碳、氮 源营养 丰富。5.3.2 二级菌 种培 养基 原则 上为 发酵培 养基 或接 近发 酵培 养基。5.3.3 发酵培 养基 在保 证菌 体生 长旺盛 的前 提下，尽 量利 用来源 充足、价 格低 廉的 原料。5.4 灭菌 5.4.1 液体发 酵，发酵 罐的 装液 量 60%70%，液 体培 养基、发酵 设备、管道、补料 罐等采 用高 压蒸 汽灭菌，灭菌 条件 为115 121，0.1 MPa 0.15 MPa，灭菌20 min 30 min。5.4.2 固体物 料含 水率 为50%5%，灭 菌条 件为115 121，0.1 MPa 0.15 MPa，灭 菌1.0 h 1.5 h。5.4.3 灭菌后 无菌 操作 取灭 菌后 的培养 基，制片，染 色，镜检，无微 生物 说明 灭菌 彻底，若有，需 重复5.3 的工 作。5.5 接种 一级 种 子到 二级 种子 接种 量为3%5%，二 级种 子 到 发酵罐 接种 量 为5%7%。接种 时 需要 无菌 操 作，调节进、排 气阀（通 入的 气体为 氮气 或 其 它惰 性气 体），使 接 种口 有气 体排 出。5.6 发酵 5.6.1 乳酸菌 的发 酵温 度控 制 在25 35。5.6.2 发酵过 程中 不通 气，或通 入氮气，搅 拌转 数 50 r/min 100 r/min。5.6.3 当有效 活菌 数达 到每 毫升 十亿级，并 pH 降低 到 4.0 以下，结束 发酵。5.6.4 发酵周 期 为24 h 48 h。5.7 发酵后 处理 DB12/T 862 2019 3 发酵后 的液 体菌 剂、固体 菌剂密 封包 装，包装 容器 经过灭菌 处 理。6 质量检 测 6.1 检测指 标 每个批 次的 产品 抽样 检测 包括感 官、水分、pH、有效 活菌 数和 杂菌 率 等 指标，检验 合格 方 可 出 厂。6.2 感官检 测 6.2.1 取菌液 250 mL（或 固体 菌 剂 250 g）于无 色玻 璃杯 中，采 用目 测、鼻嗅 的方 法进行 检验。6.2.2 菌液为 浅棕 至深 棕色 的悬 浊液，有特 殊 的 酸香 味。固体菌 剂因 培养 基原 料不 同呈现 不同 颜色，有特殊 的酸 香味。6.3 pH 测定 按GB 20287 执行。6.4 有效活 菌数 检测 乳酸菌 有效 活菌 数的 测定 按GB 20287 规定 检测。6.5 杂菌率 的测 定（好氧 或兼 性厌氧 杂菌）从 用 来测 定有 效活 菌数 且已 经 过10 倍系 列稀 释的 样品 中，选 取3 个 稀释 度（10-5、10-6、10-7）进行杂菌率 测定。平 板 计 数法，按GB 20287 操 作。6.6 固体菌 剂水 分含 量测 定 按GB 20287 执行。7 储运 7.1 应贮存 在通 风、干燥、清 洁的仓 库，仓库 内无 有害 气体、易燃 易爆 物品 及腐 蚀性化 学物 品，远离热源。7.2 长途运 输 时，防 止日 晒、雨淋，避免 长期 受压 和机 械损伤，产 品不 应和 易燃、易爆、易 腐蚀 的物品同车（或 其他 运输 工具）装运。DB12/T 862 2019 4 A A 附 录 A（规范 性附 录）乳酸菌 生产 技术 流程 图 图A.1 乳酸菌 生产 技术 流程 图 _ 原菌种 一级菌 种 二级菌 种 配置培 养基 接种 发酵 合格 灭菌 质量检 测 合格 不合格 按规定 处理 出厂 发酵物 检测 不合格 按规定 处理 发酵后 处理 纯度和 性能 检查