ICS 65.020.01 B 15 DB35 福建省地方标准 DB35/T 19112020 水稻品种稻瘟病（苗瘟）抗性 室内鉴定技术规范 Technical specification for greenhouse identification of rice resistance to rice blast 2020-06-29发布 2020-09-29实施福建省市场监督管理局 发布 DB35/T 19112020 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 术语和定义.1 3 鉴定方法.1 3.1 鉴定圃设置.1 3.2 育苗方法.1 3.3 接种体制备.2 3.4 苗瘟接种方法.2 3.5 调查方法.2 3.6 病情指数计算.3 3.7 抗菌株率计算.3 3.8 抗性等级划分.3 3.9 鉴定结果.4 4 材料和土壤处理.4 4.1 接种体.4 4.2 水稻植株.4 4.3 鉴定圃土壤.4 附录 A（规范性附录）水稻抗稻瘟病鉴定病情调查记载表.5 附录 B（规范性附录）水稻抗稻瘟病鉴定抗性等级记载表.6 DB35/T 19112020 II 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由福建省农业科学院提出。本标准由福建省农业农村厅归口。本标准起草单位：福建省农业科学院植物保护研究所。本标准主要起草人：石妞妞、杜宜新、阮宏椿、陈福如、杨秀娟、甘林、代玉立。DB35/T 19112020 1 水稻品种稻瘟病（苗瘟）抗性室内鉴定技术规范 1 范围 本标准规定了水稻品种抗稻瘟病（苗瘟）室内人工接种鉴定的术语和定义、鉴定方法、材料和土壤处理方法。本标准适用于水稻品种抗稻瘟病（苗瘟）的鉴定，用于评价水稻品种对稻瘟病的抗病性。2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。2.1 稻瘟病 rice blast 由稻瘟病菌Magnaporthe oryzae(Hebert)Barr.侵染引起的一种流行性真菌病害。2.2 苗瘟 seedling blast 水稻3叶期以后至移栽前秧苗叶片上发生的稻瘟病。2.3 人工接种鉴定 artificial inoculation identification 在适宜条件下，通过人工操作将接种体接种于水稻植株上，判别水稻品种的抗病性的接种鉴定方法。2.4 接种体 inoculum 用于人工接种鉴定的水稻稻瘟病菌分生孢子悬浮液。2.5 喷雾接种 spray inoculation 将水稻稻瘟病菌分生孢子悬浮液喷雾至水稻叶片上，使水稻在适宜条件下感染稻瘟病菌的接种方法。2.6 对照品种 control variety 在鉴定水稻品种抗病性时设置的感病品种。3 鉴定方法 3.1 鉴定圃设置 在可控温、控湿、控光的鉴定圃内设置20个以上的鉴定池。3.2 育苗方法 播种前60 d将鉴定池内土壤翻晒，播种前20 d施肥浸泡，鉴定池每平方米施复合肥（N-P2O3-K2O:15-15-15）0.16 kg。播种前1 d平整鉴定池泥浆，排除积水，将各鉴定池划分为长20 cm、DB35/T 19112020 2 宽10 cm的若干单元格。参鉴品种经浸种、催芽后按编号顺序播种于单元格，每一单元格内播种一个品种，每个品种播种3丛，每丛1015粒种子，随机插入对照品种，接种前3 d5 d酌施氮肥。3.3 接种体制备 3.3.1 培养基制备 淀粉培养基：将可溶性淀粉10 g、酵母浸膏2 g、碳酸钙3 g和琼脂18 g加入800 mL水中，加热至琼脂融化，加水定容至1 000 mL，调节pH至6.5，在121 下湿热灭菌25 min。米糠培养基：将米糠20 g、琼脂20 g加入800 mL水中，加热至琼脂融化，加水定容至1 000 mL，调节pH至6.5，在121 下湿热灭菌25 min。3.3.2 菌株选择 选择全省水稻主要种植区域内强致病力的稻瘟病菌菌株20株以上。3.3.3 稻瘟病菌培养 将选择的稻瘟病菌菌株置于可溶性淀粉培养基平板上28 恒温黑暗培养7 d，用灭菌的打孔器打取5 mm的菌丝块，备用。将灭菌米糠培养基倒入直径9 cm灭菌培养皿，每皿倒入30 mL40 mL米糠培养基，制成米糠培养基平板，将菌丝块接种至米糠培养基平板上，28 恒温黑暗培养10 d，用无菌毛笔刷除表面菌丝体，将培养皿置于黑光灯下28 保湿（相对湿度大于90%）培养72 h，每天光照时间为12 h（7:00至19:00）。3.3.4 接种体 在光学显微镜下观察稻瘟病菌产孢情况，将稻瘟病菌分生孢子用无菌水洗下，用血球计数板将孢子浓度调节至约1105个mL-1，作为接种体。3.4 苗瘟接种方法 水稻苗34叶期时，接种体中加入吐温80，使其在接种体中的浓度为0.1%（V/V），傍晚时采用空压机（0.7 MPa）进行喷雾接种，鉴定池每平方米喷施接种体80 mL，每鉴定池喷施单个稻瘟病菌的接种体，接种后覆盖黑色薄膜，25 28 保湿培育（相对湿度大于95%）48 h后，打开薄膜两端通风，接种72 h后移去薄膜，25 28 保湿（相对湿度大于95%）培育。3.5 调查方法 3.5.1 调查时间 接种后7 d10 d，对照品种的发病程度达到7级及以上时开始调查。3.5.2 调查方法 调查各参鉴品种所有植株的水稻叶片，以发病最严重叶片的病级作为该植株的发病级别，所有参鉴品种在当天内调查完成，病情分级应符合表1的规定。DB35/T 19112020 3 表1 水稻苗瘟病情分级表 病情级别 症状 0级 无病斑。1级 针尖大小的褐点病斑。3级 小圆形病斑，病斑直径1 mm2 mm，病斑面积小于叶片面积的2%。5级 典型纺锤形病斑，长2 mm以上，病斑面积占叶片面积的2.1%10.0%，或出现叶枕瘟。7级 典型病斑，病斑面积占叶片面积的10.1%35.0%。9级 典型病斑，病斑面积占叶片面积的35%以上，或出现叶片枯萎。3.5.3 病情记载 按照附录A记录参鉴品种稻瘟病病情。3.6 病情指数计算 病情指数按公式（1）计算：1009Nn sD）（.(1)式中：D病情指数（DI）；s 各病级代表数值；n 各病级植株数，单位为株；N调查总植株数，单位为株。3.7 抗菌株率计算 抗菌株率按公式（2）计算：1003 2 1 Nn n nR）（.(2)式中：R 抗菌株率（RF）；n1水稻品种对单个稻瘟病菌的抗性等级表现为0级的菌株数，单位为株；n2水稻品种对单个稻瘟病菌的抗性等级表现为1级的菌株数，单位为株；n3水稻品种对单个稻瘟病菌的抗性等级表现为2级的菌株数，单位为株；N 调查菌株数，单位为株。3.8 抗性等级划分 按照表2的规定划分水稻品种对单个稻瘟病菌的抗性等级，按照表3的规定划分参鉴水稻品种对稻瘟病的抗性等级。DB35/T 19112020 4 表2 水稻品种抗稻瘟病单菌株的抗性等级划分 病情指数（DI）抗性等级 0 0 11.1 1 11.233.3 2 33.455.6 3 55.777.8 4 77.9 5 表3 水稻品种抗稻瘟病综合抗性等级划分 抗菌株率（RF）抗性等级 100 0 8099.9 1 6079.9 2 4059.9 3 2039.9 4 19.9 5 3.9 鉴定结果 按照附录B记载参鉴水稻品种对稻瘟病的抗性等级。4 材料和土壤处理 4.1 接种体 将接种后剩余的接种体121 湿热灭菌25 min。4.2 水稻植株 将鉴定后的水稻植株集中处理。4.3 鉴定圃土壤 清除抗病鉴定圃的水稻病残组织，深耕并暴晒土壤。DB35/T 19112020 5 附 录 A（规范性附录）水稻抗稻瘟病鉴定病情调查记载表 表A.1给出了水稻抗稻瘟病鉴定病情调查记载表的格式和内容。表A.1 水稻抗稻瘟病鉴定病情调查记载表 病情等级 品种序号 品种/品系 名称/编码 重复 0级 1级 3级 5级 7级 9级 病情指数 1 平均 平均 DB35/T 19112020 6 附 录 B（规范性附录）水稻抗稻瘟病鉴定抗性等级记载表 表B.1给出了水稻抗稻瘟病鉴定抗性等级记载表的格式和内容。表B.1 水稻抗稻瘟病鉴定抗性等级记载表 品种序号 品种/品系 名称/编码 委托单位 菌株 编号 抗性 等级 抗菌 株率 综合抗性等级 1 2 1 1 2 2 1 2 调查人：记载人：技术负责人（签字）：鉴定时间：_