ICS 67.050 X 04 DB37 山东省 地 方 标 准 DB37/T 3991 2020 食品中溴 氰虫酰胺 残留量的 测定 液相色谱-质谱/质谱 法 Determination of cyantraniliprole residue in foods Liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2020-06-08 发布 2020-07-08 实施 山 东 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB37/T 39912020 I 前 言 本标准 按照GB/T 1.1 2009 给出 的规 则起 草。本标准 由青 岛海 关提 出、归口并 组织 实施。本标准 起草 单位：青 岛海 关技术 中心、黄 岛海 关。本标准 主要 起草 人：崔淑 华、郭 庆龙、张 谦、刘宏 玉、张 雪琰、刘 成帅、崔 伟佳、李洲、辛 文。DB37/T 39912020 1 食 品中溴 氰虫酰 胺 残留量 的测定 液相色 谱-质谱/质谱 法 1 范围 本标准 规定 了食 品中 溴氰 虫酰胺 残留 量的 液相 色谱-质谱/质谱 检测 方法。本标准 适用 于大 米、玉米、甘蓝、番 茄、洋葱、干 辣椒、苹果、猪 肉、鸡肝、牛奶、鸡 蛋中 溴 氰 虫酰胺残 留量 的测 定，其它 食品可 参照 执行。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 所注 日期的 版本 适用 于 本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB 2763 食品 安全 国家 标 准 食 品中 农药 最大 残留 限量 GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法 3 原理 试样经 乙腈 提取，分 散固 相萃取 净化（油 脂含 量高 的样品 须先 用乙 腈饱 和正 己烷去 脂和 冷冻 去 脂）后，用 液相 色谱-质谱/质 谱仪测 定，外标 法定 量。4 试剂和 材料 除另有 说明 外，所用 试剂 均为分 析纯，水 为符 合GB/T 6682 中规 定的 一级 水。4.1 试剂 4.1.1 乙腈（CH3CN，75-05-8）：色谱 纯。4.1.2 甲醇（CH3OH，67-56-1）：色谱 纯。4.1.3 正己烷（C6H14，110-54-3）：色 谱纯。4.1.4 乙酸铵（C2H7NO2，631-61-8）：色谱 纯。4.1.5 氯化钠（NaCl，7647-14-5）：用 前 在450 灼烧 4 h，冷 却后 密封 备用。4.1.6 无水硫 酸镁（MgSO4，7487-88-9）：用前 在650 灼烧4 h，贮藏 干燥 器中，冷却 后备 用。4.2 溶液配 制 4.2.1 乙腈饱 和正 己烷 溶液：取 适量乙 腈加 入正 己烷 中，剧烈振 摇，静置 至出 现明 显分层，弃 去乙 腈层备用。4.2.2 乙酸铵 溶液（5 mmol/L）：称 取0.385 g 乙酸 铵用 水溶解 并定 容 至 1 L。4.3 标准品 溴氰虫 酰胺（Cyantraniliprole，C19H14BrClN6O2，CAS 号：736994-63-1），纯 度 98.0%。DB37/T 39912020 2 4.4 标准溶 液配 制 4.4.1 标准储 备溶 液 准确称 取适 量的 标准 品（精确至0.1 mg），用 乙腈 溶解，配制 成浓 度为1 000 g/mL 的 标准 储备 溶液，该 储备 溶液-18 保 存，保 存期 为一 年。4.4.2 标准中 间溶 液 准确吸 取适 量标 准储 备溶 液，用甲 醇配 制成 浓度 为10 g/mL 的 标准 中间 溶液，该 溶液4 保存，保存期为 一个 月。4.4.3 基质标 准工 作溶 液 根据需 要准 确吸 取适 量标 准中间 溶液，用样 品空 白基 质溶液 配制 成0.002、0.005、0.01、0.02、0.05、0.1 mg/L 的 系列 标准 工作 溶液。该溶 液应 现用 现配。4.5 材料 4.5.1 N-丙基 乙二 胺（Primary secondary amine，PSA）：粒度 40 60 m。4.5.2 十八烷 基硅 烷键 合相（C18）：粒 度 40 60 m。4.5.3 有机滤 膜：0.22 m。5 仪器和 设备 5.1 液相色 谱-三重 四级 杆质 谱 仪：配 备电 喷雾 离子 源（ESI）。5.2 高速组 织捣 碎机。5.3 高速粉 碎机。5.4 匀浆机。5.5 天平：感 量0.01 mg 和0.01 g。5.6 振荡器。5.7 超声波 仪。5.8 离心机，转 速不 低 于 8 000 r/min。5.9 涡旋混 合器。5.10 具塞离 心管：50 mL，10 mL。6 试样制 备与 保存 6.1 大米、玉米、干 辣椒 取500 g 代表 性样品，用 高 速粉碎 机处理 至粉 状，均 分成两 份，分 别装 入洁净 容器作 为试样，密 封并做好 标识。于-18 以 下保存。6.2 甘蓝、番茄、洋 葱、苹果 取500 g 代表 性样品，用 匀 浆机制 成匀浆，均 分成两 份，分 别装入 洁净 容器作 为试样，密封 并做 好标识。于-18 以下 保存。6.3 猪肉、鸡肝 DB37/T 39912020 3 取500 g 代表 性样品，用 高 速组织 捣碎机 制成 糊状，均分成 两份，分别 装入洁 净容器 作为试 样，密封并做 好标 识。于-18 以下保 存。6.4 牛奶、鸡蛋 取500 g 代表 性样品，充 分 混匀，均分成 两份，分别 装入洁 净容器 作为 试样，密封并 做好标 识。于-18 以下 保存。7 分析步 骤 7.1 提取 7.1.1 大米、玉米 称取4 g 试 样（精确 至0.01 g）于50 mL 具 塞离 心管 中，加5 mL 水 混匀，放 置30 min。准确 加入20.0 mL乙腈 振荡 提取20 min，超 声提取5 min 后 加入3 g 无 水 硫酸镁 和2 g 氯 化钠，涡 旋 振荡1 min，8 000 r/min离心5 min 后，待净 化。7.1.2 甘蓝、番茄、洋 葱 称取10 g 试 样（精确 至0.01 g）于50 mL 具 塞离 心管 中。准 确加 入20.0 mL 乙 腈 振荡提 取20 min，超声提取5 min 后 加入3 g 无 水硫酸 镁和2 g 氯化 钠，涡 旋振荡1 min，8 000 r/min 离心5 min 后，待净 化。7.1.3 干辣椒 称取4 g 试 样（精确 至0.01g）于50 mL 具塞 离心 管中，加15 mL 水混 匀，放置30 min。准确 加入20.0 mL乙腈 振荡 提取20 min，超 声提取5 min 后 加入3 g 无 水 硫酸镁 和2 g 氯 化钠，涡 旋 振荡1 min，8 000 r/min离心5 min 后，待净 化。7.1.4 猪肉、鸡肝、牛 奶、鸡蛋 称取4 g 试样（精确 至0.01g）于50 mL 具 塞离 心管中，加5 mL 水混 匀（检测牛 奶时，不需加 水），放置30 min。准 确加 入20.0 mL 乙 腈振 荡提 取20 min，超声提 取5 min 后加 入3 g 无 水硫酸 镁和2 g 氯化 钠，涡旋振 荡1 min，8 000 r/min 离心5 min 后，待净化。将10 mL 上 清液转 移至50 mL 具塞 离心 管中，加入10 mL乙 腈饱 和正己 烷，涡 旋振荡2 min，静置 分层，弃去正 己烷层，再 加入10 mL 乙腈 饱和正 己烷 重复操作一 次，然后 将离 心管 置于-18 冷冻30 min，迅速取 出2 mL 提 取液，待 净化。7.2 净化 称取 0.15 g 无水 硫酸 镁，0.10 g PSA 和0.10 g C18 置于10 mL 离心 管，将2 mL 上 述提取 液至 此离 心管中，涡旋1 min，5 000 r/min 离心5 min。取上 清 液过0.22 m 有机 微孔滤 膜后，供液相 色谱-质谱/质谱测 定。7.3 测定 7.3.1 液相色 谱参 考条 件 条件如 下：a)色谱柱：C18 柱，柱 长 150 mm，内 径2.1 mm，粒径 3 m，或等 效柱；b)流速：0.25 mL/min；DB37/T 39912020 4 c)进样量：5 L；d)柱温：30；e)流动相 及梯 度洗 脱条 件见 表 1。表1 流动相 及梯 度洗 脱条 件 时间 min 甲醇%乙酸铵溶液%0 25 75 0.5 25 75 2.5 90 10 6.0 90 10 6.1 25 75 10 25 75 7.3.2 质谱参 考条 件 条件如 下：a)电离方 式：电喷 雾电 离（ESI）；b)毛细管 电压：4.0 kV；c)干燥气 温度：350；d)辅助气（鞘 气）温度：350；e)雾化气、干 燥气、辅 助气（鞘气）均 为高 纯氮 气，使用前 应调 节各 气体 流量 以使质 谱灵 敏 度 达到检测 要求；f)扫描方 式：正离 子扫 描；g)检测方 式：多反 应监 测，参数见 表 2。表2 多反应 监测 条件 中文名称 英文名称 母离子 m/z 子离子 m/z 驻留时间 s 裂解电压 V 碰撞能量 eV 溴氰虫酰胺 Cyantraniliprole 475.0 285.8a 0.2 110 10 443.9 0.2 110 15 a 为定量子离子 7.3.3 标准曲 线 的 制作 按浓度 由小 到大 的顺 序，依次分 析基 质标 准溶 液，得到相 应的 峰面 积。以 基 质标准 溶液 的浓 度为 横坐标，以相 应的 峰面 积为 纵坐标，绘 制标 准曲 线。7.3.4 试样溶 液的 测定 将试样 溶液注 入液 相色谱-质谱仪 中，得 到相 应的峰 面积，由标准 曲线 得到试 样溶液 中溴氰 虫酰 胺的浓度。如果 试样 溶液 浓 度超过 标准 曲线 的上 限，须用乙 腈稀 释试 样溶 液至 线性范 围后 再进 行测 定。在上述仪 器条 件下，溴氰虫 酰胺的 参考 保留 时间 为4.4 min。标准 品的MRM 总离 子 流图和 选择 离子 流图 参见附录A 中图A.1、图A.2。7.3.5 定性 DB37/T 39912020 5 如果样 品的 质量 色谱 峰保 留时间 与基 质标 准溶 液一 致，定 性离 子对 的相 对丰 度 与浓度 相当 的基 质 标准溶液 的相 对丰 度一 致，相对丰 度偏 差不 超过 表3 的 规定，则可 判断 样品 中存 在相应 的被 测物。表3 定性测 定时 相对 离子 丰度 的最大 允许 偏差 相对离子丰度 50%20%50%10%20%1 0%允许的相对偏差 2 0%2 5%3 0%5 0%7.4 空白试 验 除不称 取试 样外，均 按上 述步骤 进行。8 结果计 算和 表述 试样中 溴氰 虫酰 胺的 含量 按式（1）计算：10001000mVX.(1)式中：X 试样 中溴 氰虫 酰胺 的含量，单 位为 毫克 每千 克（mg/kg）；从 基质 标准 曲线 得 到的试 样测 定液 中溴 氰虫 酰胺的 浓度，单 位为 微克 每毫升（g/mL）；V 试样 测定 液的 最终 定容体 积，单位 为毫 升（mL）；m 最终 样液 所代 表的 试样质 量，单位 为克（g）。计算结 果应 扣除 空白 值，保留两 位有 效数 字。9 精密度 9.1 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的绝 对差 值与其 算术 平均 值的 比值（百分 率），应 符合附录C 的要 求。9.2 在再现 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的绝 对差 值与其 算术 平均 值的 比值（百分 率），应 符合附录D 的要 求。10 定量限 和回 收率 10.1 定量限 大米、玉米、干 辣椒、猪 肉、鸡 肝、牛奶、鸡 蛋中 溴氰虫 酰胺 定量 限为0.01 mg/kg，甘 蓝、番茄、洋葱、苹果 中溴 氰虫 酰胺 定量限 为0.004 mg/kg。10.2 回收率 不同样 品中 溴氰 虫酰 胺添 加水平 及回 收率 参见 附录B。DB37/T 39912020 6 A A 附 录 A（资料 性附 录）溴氰虫 酰胺 标准 品谱 图 溴氰虫 酰胺 标准 品MRM 总 离 子流图 见图A.1，选 择离 子 流图见 图A.2。图A.1 溴氰虫 酰胺 标准 品 MRM 总 离子流 图 图A.2 溴氰虫 酰胺 标准 品 MRM 选 择离子 流图 DB37/T 39912020 7 B B 附 录 B（资料 性附 录）样品的 添加 浓度 及回 收率 的实验 数据 样 品的 添加 浓度 及回 收率 的实验 数据 见表B.1。表B.1 样品的 添加 浓度 及回 收率 的实验 数据 样品名称 添加浓度/（mg/kg）回收率范围/%大米 0.01 86.5 101.9 0.2 83.2 102.5 0.4 90.4 98.6 玉米 0.01 79.6 95.4 0.02 81.5 105.3 0.05 85.2 102.1 甘蓝 0.004 86.1 108.7 0.5 83.9 105.2 1 90.5 109.0 番茄 0.004 92.6 104.5 0.2 94.9 106.7 0.4 90.6 98.2 洋葱 0.004 79.9 94.3 0.05 83.8 97.5 1 80.2 91.9 苹果 0.004 90.9 100.7 0.8 88.3 98.4 1.6 91.6 104.2 干辣椒 0.01 88.4 95.2 5 82.8 100.7 10 78.3 90.7 猪肉 0.01 83.2 113.8 0.2 85.1 104.2 0.4 80.5 98.3 DB37/T 39912020 8 表 B.1 样 品的 添加 浓度 及回收 率的 实验 数据（续）样品名称 添加浓度/（mg/kg）回收率范围/%鸡肝 0.01 88.6 108.4 0.15 86.0 99.9 0.3 83.5 105.3 牛奶 0.01 84.4 115.3 0.6 86.1 103.2 1.2 79.2 99.2 鸡蛋 0.01 82.5 112.4 0.15 86.9 104.9 0.3 78.0 97.6 DB37/T 39912020 9 C C 附 录 C（规范 性附 录）实验室 内重 复性 要求 实验室 内重 复性 要求 见表C.1。表C.1 实验室 内重 复性 要求 被测组分 含量 mg/kg 精密度%0.0 0 1 36 0.0 0 1 0.0 1 32 0.0 1 0.1 22 0.1 1 18 1 14 DB37/T 39912020 10 D D 附 录 D（规范 性附 录）实验室 间再 现性 要求 实验室 间再 现性 要求 见表D.1。表D.1 实验室 间再 现性 要求 被测组分含量 mg/kg 精密度%0.0 0 1 54 0.0 0 1 0.0 1 46 0.0 1 0.1 34 0.1 1 25 1 19 _