ICS 65.02 0 B 61 DB45 广西壮族自治区地方标准 DB 45/T 17832018 石斛兰组培快繁技术规程 Technical regulation for culture of Dendrobium 2018-06-01 发布 2018-07-01 实施广西壮族自治区质量技术监督局 发布 DB 45/T 1 78 3 20 18 I 前 言 本标准按照G B/T 1.12 0 09给出的规 则起草。本标准由广西壮族自治区林业厅提出。本标准起草单位：广西壮族自治区林业科学研究院。本标准主要起草人：龚建英、王华新、龙定建、唐庆、陈宝玲、陈尔、唐遒冥、吴玉华、杨舒婷、李进华、林茂、孙利娜、苏莉花。DB 45/T 1 78 3 20 18 1 石斛兰组培快繁技术规程 1 范围 本标准规定了石斛兰（Den dr ob iu m sw）组培快繁的术语和定义、外植体的选取和处理、诱导培养、增殖培养、分化培养、生根培养、瓶苗炼苗、瓶苗移栽、穴盘苗管理、种苗出圃、档案管理等技术和 管 理要求。本标准适应于广西境内石斛兰组培苗生产。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 8 32 1（所有部分）农药合理使 用准则 NY/T 2 30 6 花卉种苗组培快繁技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 优株 su pe r io r pl an t 观赏性、抗逆性、繁殖力等综合性状显著优于其它植株的单株。3.2 拟原球茎 pro to co rm-l i ke b od y 兰科植物在组培过程中诱导形成的类似于原球茎的球状物。4 外植体的选取和处理 4.1 选取 选择优株的叶芽或花芽作为外植体。4.2 处理 4.2.1 采集前处理 用50多菌 灵可湿性粉剂50 01 00 0 倍药液喷洒待采植株，每天一次，连续喷一周。DB 45/T 1 78 3 20 18 2 4.2.2 采集 用剪刀从最基部剪切叶芽或花芽，除去叶片和花蕾，保留长度4 c m5 cm。4.2.3 表面清洗 自来水连续 冲洗1 5 min 2 0 m i n，用7 5 酒精 擦洗 外植体 表面，将叶 鞘和 紧贴假 鳞茎 的 黄 褐色膜剥 除。4.2.4 外植体消毒 在 超净工 作 台上，用7 5 酒精 浸泡 外植体15 s 3 0 s，无 菌水冲洗35 遍后，置 于0.1 氯 化 汞溶 液 中 浸泡 1.5 m i n3 mi n，用 无 菌水冲洗4 6 遍，用 消毒 过的 滤纸吸干 水，备 用。5 诱导培养 5.1 诱导培养基 见附录A.1。5.2 外植体接种 将 消毒后 的叶芽或花芽外植体 两端 组 织 剪除，保留 带 芽茎 段 2 c m3 cm，或 挑 取茎 尖 0.5 mm 2.0 mm直插 或 平放 于培养基 上。5.3 培养周期 培养30 d 4 5 d，形成单芽、丛 芽或 拟 原球茎。5.4 培养条件 培养 室 的 温 度 宜 为24 1，光 照 强 度2 00 0 Lx 3 00 0 Lx，光 照 时间 每天10 h 1 2 h。6 增殖培养 6.1 增殖培养基 见附录A.2。6.2 增殖转接 将诱导培养形成的单芽、丛 芽或 拟 原球茎 转接到 增殖培养基 上。6.3 接种数量 用25 0 m L 培养 瓶每瓶 接 种6:0 08:00，丛 芽每 个点以 35 个小 芽为 宜，拟 原球茎 以 每 个点直径 0.5 cm为 宜。6.4 增殖周期 培养45 d 6 0 d，增殖倍 数 38倍。DB 45/T 1 78 3 20 18 3 6.5 培养条件 同5.4。7 分化培养 7.1 分化培养基 见附录A.3。7.2 分化转接 将增殖培养形成的拟原球茎转接到分化培养基上。7.3 接种数量 同6.3。7.4 培养周期 培养45 d6 0 d，拟原球茎 分化形成丛芽。7.5 培养条件 同5.4。8 生根培养 8.1 生根培养基 见附录A.4。8.2 生根转接 将增殖培养、分化培养获得的单芽或丛生芽转接到生根培养基上。8.3 接种数量 用80 0 m L培养 瓶每瓶接种2 5株。8.4 培养周期 培养45 d6 0 d，根长4 cm 6 c m，株高 5 c m7 cm。8.5 培养条件 同5.4。9 瓶苗炼苗 9.1 炼苗时间 春夏季7 d10 d，秋冬季 15 d2 0 d。DB 45/T 1 78 3 20 18 4 9.2 炼苗条件 光 照 强 度3 000 Lx 6 00 0 Lx，温 度2 0 30，避 免强光 和 高温灼伤 芽苗。9.3 污染苗处理 炼苗过程中的 污染 苗 废弃。9.4 出瓶要求 苗 高 5 c m7 cm，茎 粗 0.4 cm，根 数 5 条，根长 4 c m。茎叶 无变异，叶 色正常，无污染。10 瓶苗移栽 10.1 移栽时间 45 月 或9 1 0 月。10.2 瓶苗清洗 清 水将瓶苗根部培养基洗 净后，用8 0多菌灵可 湿性粉剂1 0 0 0倍液 浸泡 植 株10 mi n1 5 mi n，将 小 苗 捞 出，沥干 水分，直至 根部 发白即 可移栽。10.3 移栽基质 选取水 苔 为基 质，移栽 前 用80多 菌灵可湿性粉剂80 0倍液 消毒，沥干 水 备 用。10.4 移栽容器 用32 孔 或5 0 孔 穴盘，长 宽 规 格 54 cm 28 cm，孔径 5 c m7 cm，高 度5 cm 6 cm。10.5 移栽方法 每 丛 35株，用水 苔 包 裹 根部，置 于穴盘 孔 中，轻压 根部。11 穴盘苗管理 11.1 温度 20 3 0。11.2 湿度 相 对湿度70 80。11.3 光照 保 持 50 7 5 遮光 度，防止强光直射。11.4 施肥 小 苗长出新芽 后，每 隔 7 d 1 0 d 叶面 喷 施 水 溶 性 复 合 肥（N:P:K比例 30:10:1 0或2 0:20:20）1次，浓 度为0.05 0.1,连续 施肥 10次。DB 45/T 1 78 3 20 18 5 11.5 浇水 移 栽2周 后浇 透 水，一个月后视天气情况浇水，干燥天气 2 d3 d浇 水1次，阴天5 d7 d浇 水1次，雨天不浇水。11.6 病虫害防治 11.6.1 主要病虫害 主要病害有软腐病、炭疽病、煤烟病等。主要虫害有蚜虫、蜗牛、地老虎、介壳虫、红蜘蛛等。11.6.2 防治方法 移栽3 d后，用7 5甲 基 托布津可湿 性粉剂8 00 倍 液喷淋 叶面1 次。长出新 芽后，根据 病虫害情况 针对性防治。农药防治应符合GB/T 83 21（所有部 分）规定,主要 病虫害农药防治方法见附录B。12 种苗出圃 12.1 质量要求 苗高6 c m8 cm，茎粗 0.4 cm，根数 5条，生长 健壮、无病虫害的种苗。12.2 包装运输 种苗出圃前 2 d停止浇水，将小 苗从托 盘中取出，置 于 纸箱中，分 层排放，每层 用 纸 分 开并用 胶带固定。纸箱以胶带密封，宜在阴天运输，路途时间不宜超过5 d。13 档案管理 建立石斛兰组培育苗技术档案，参照NY/T 2 306 的规定 执行。DB 45/T 1 78 3 20 18 6 A A 附 录 A（资料性附录）培养基配方 A.1 诱导培养基配方 1/2 M S白糖 25 g/L琼脂 4.7 g/L蛋白胨 1 g/L椰汁 100 m L/L 6-B A 2.0 m g/L 4.0 m g/LN AA 0.05 m g/L 0.5 m g/L，pH 5.45.6。A.2 增殖培养基配方 M S白糖 30 g/L琼脂 4.7 g/L活 性 炭 0.5 g/L蛋白胨 1 g/L 6-B A 0.05 m g/L 3.0 m g/L N AA 0.05 m g/L 2.0 m g/L K T 0.05 m g/L 0.5 m g/L，pH 5.45.6。A.3 分化培养基配方 M S白糖 30 g/L琼脂 4.7 g/L活 性 炭 0.5 g/L蛋白胨 1 g/L 6-B A 0.05 m g/L 0.5 m g/LN AA 0.05 m g/L 0.5 m g/L，pH 5.45.6。A.4 生根培养基配方 1/2 MS 白 糖 30 g/L琼脂 5.0 g/L活 性 炭 1.0 g/L蛋白胨 2 g/L香蕉汁 40 g/L马铃薯 20 g/L 6-B A 0.05 m g/L 0.5 m g/L N AA 0.0 5 m g/L 0.5 m g/L，pH 5.4 5.6。DB 45/T 1 78 3 20 18 7 B B 附 录 B（资料性附录）主要病虫害农药防治方法 表B.1给出了 主要 病虫害农药防治方法。表B.1 主要病虫害农药防治方法 病虫害种类 防治方法 软腐病 用50氯溴异氰尿酸可溶粉剂8001 000倍 液，或2春雷霉素可湿性粉剂300600倍液喷施。炭疽病 用450 g/L咪鲜 胺水乳剂1 000 2 000倍液，或75百菌清可湿性粉剂600800倍液喷施。煤烟病 及时防治蚜虫、介壳虫。在煤烟病发病初期，用7 5百菌清可湿性粉剂6 0 08 0 0倍液喷施。同时改善通风条件。蚜虫 用10吡虫啉可湿性粉剂2 00 04 000倍液，或25 g/L溴氰菊 酯乳油1 2502 500倍液喷施。蜗牛 每667 m 2 用6 四聚乙醛颗粒剂400 g600 g 撒施。也可在栽培场地和周围撒生石灰。地老虎 用5氯氟氰菊酯乳油5 0006 666倍液喷施，或每667 m 2 用3 辛硫磷颗粒6 000 g8 000 g 沟施。介壳虫 用25噻嗪酮可湿性粉剂1 00 01 500倍液，或200 g/L双甲 脒乳油1 0001 500倍液喷施。红蜘蛛 用73炔螨特乳油2 0003 0 00倍液，或15哒螨灵乳油2 2503 000倍液喷施。_ _ _ _ _ _ _ _ _ 中华人民共和国广西地方标准 石斛兰组培快繁技术规程 DB45/T 1783 2018 广西壮族自治区质量技术监督局统一印刷 版权专有 侵权必究