ICS 65.0 20.20 B 05 DB45 广西壮族自治区地方标准 DB 45/T 16592017 何首乌组培苗生产技术规程 Technical r egulations f or tissue c ulture seeding o f Fallopia m ultiflor a 2017-12-30 发布 2018-01-30 实施广西壮族自治区质量技术监督局 发布 DB 45/T 1 65 9 20 17 I 前 言 本标准按照G B/T 1.12 0 09给出的规 则起草。本标准由广西壮族自治区农业科学院提出。本标准起草单位：广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室。本标准主要起草人：曾文丹、严华兵、陆柳英、谢向誉、肖亮、赖大欣。DB 45/T 1 65 9 20 17 1 何首乌组培苗生产技术规程 1 范围 本标准规定了何首乌组培苗生产的组织培养、组培苗移栽、苗期管理和出圃等技术内容。本标准 适用于广西境内何首乌组培苗生产。2 组织培养 2.1 培养基配制及灭菌 各阶段培养基配方参见附录 A。灭菌 温度为 12 1，灭菌时间为 22 mi n。2.2 外植体 2.2.1 母本圃种植 将优良种源种植在温室内，加强肥水管理，确保植株健壮。2.2.2 外植体的采集 宜选择 连续2 d以上 的晴天上午进行。从健康植株上选择生长健壮、无病虫害的优良单株幼嫩茎段，用消毒的枝剪去除叶片后剪成带一个芽的单芽茎段。2.2.3 外植体表面灭菌 2.2.3.1 预处理 将带芽茎段放入加有0.2 洗洁精的溶液中浸泡并振荡5 mi n 10 m in，用 软毛刷清洗表面污垢，在 流水中冲洗3 0 m in 60 mi n后备用。2.2.3.2 消毒处理 在超净工作台上，将已清洗干净的外植体转移至无菌培养瓶中，倒入7 5酒精使之 没过外植体，并 轻轻震荡15 s 30 s后将酒 精倒去，用无菌水冲洗3 5次。随后，用0.1升汞 溶液浸泡处理6 m in 8 min，并轻摇以除去外植体表面气泡，倒出升汞后用无菌水冲洗4 5次，用无菌滤纸吸干外植体表面水分后待 用。2.3 初代培养 在超净工作台上，将表面灭菌处理的单芽茎段接入初代培养基上进行培养。培养周期为45 d 55 d。培养条件：培养温度为2 3 2 5，光照强度为1 50 0 lx 2 00 0 lx，光 周期14 h1 6 h。2.4 增殖培养 在超净工 作 台上，将 初 代培养的 无 菌苗切成 单 芽茎段转 接 到增 殖 培养基上进行培养。培养周期 为 30 d3 5 d。培养条件同初代培养。DB 45/T 1 65 9 20 17 2 2.5 壮苗生根培养 在超净工作台上，将 继 代增 殖 培养的 不 定芽切成单芽茎段转入生 根 培养基进行生 根 培养。培养周期 为25 d3 0 d。培养条件 同 初代培养。3 组培苗移栽 3.1 炼苗 生 根 培养 25 d3 0 d后，将 株 高 3 c m 5 c m、生长 健壮、根系发达 的无污 染 瓶苗从培养室移入温室，炼 苗3 d 5 d，去除瓶 盖 后 再炼 苗1 d 2 d。3.2 清洗 用 镊子 将 小 苗 夹 出，用清水洗去生 根 苗 根部 的培养基，置 于 0.05 高 锰酸钾 溶液浸泡 1 m in 2 mi n 或 50 多 菌 灵可湿性粉剂 80 01 00 0 倍 溶液浸 泡 8 m in 10 mi n。3.3 移栽 3.3.1 时间 以 春季 34 月 为宜。3.3.2 基质 以 泥炭土：珍珠岩：黄土 体 积比 为2:2:1的基 质 为宜。组培苗移栽 前 24 h 48 h用 0.5 高锰酸 钾 溶 液 对 移栽基 质 进行消毒。3.3.3 移植 将清洗干净的组培苗移栽于 盛满 基 质 并消毒的1 5 c m 15 c m 塑料营 养 钵 中，每 一个 营 养 钵 种植1 株，种植后 浇透 定 根 水。4 苗期管理 组培苗移栽23周内宜用 薄膜小拱棚 保 湿，相对湿 度 控制 在8 09 0，光照 控制 在5 000 l x 10 00 0 l x。4周 后 逐渐打 开 薄膜，并增大光照强度。移栽15 d 20 d后，每隔 10 d1 5 d 淋湿或喷湿尿素，喷施浓 度以0.2 0.5 为宜。5 出圃 5.1 出圃苗要求 苗 高 15 c m 25 c m，叶片5 10片，根 长3 c m以上，苗 木完整，长 势好、叶 色深绿、无病害。5.2 苗木运输 运输 苗 木 时，用 塑料筐或 泡 沫箱 成 捆装箱，勿挤压。DB 45/T 1 65 9 20 17 3 A A 附 录 A（资料性附录）培养基配方 A.1 培养基配方 A.1.1 初代培养基配方 MS BA 0.0 2 mg/L NAA 0.02 m g/L蔗 糖30 g/L6.0 g/L琼脂，pH 5.8 6.0。A.1.2 继代增殖培养基配方 MS BA 2.0 0 mg/L NAA 0.02 m g/L蔗 糖30 g/L6.0 g/L琼脂，pH 5.8 6.0。A.1.3 生根培养基配方 1/2M SN A A 0.1 m g/L蔗 糖30 g/L6.0 g/L琼脂，pH 5.8 6.0。_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 中华人民共和国广西地方标准 何首乌组培苗生产技术规程 DB45/T 1659 2017 广西壮族自治区质量技术监督局统一印刷 版权专有 侵权必究