ICS 65.020.20 B 05 DB14 山 西 省 地 方 标 准 DB 14/T 16082018 高粱种质资源低温库保存技术规程 2018-01-10发布 2018-03-10实施 山西省质量技术监督局 发 布 DB14/T 16082018 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 入库前处理.2 5 入库保存.5 6 监测与更新.5 7 信息管理.6 附录 A 入库保存种质资源的标准（资料性附录）.8 附录 B 种子含水量测定方法（规范性附录）.9 DB14/T 16082018 II 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由山西省农业科学院提出并归口。本标准起草单位：山西省农业科学院农作物品种资源研究所。本标准主要起草人：秦慧彬、穆志新、李萌、王燕利。DB14/T 16082018 1 高粱种质资源低温库保存技术规程 1 范围 本标准规定了高粱种质资源低温库保存的入库前处理、入库保存、监测与更新及信息管理。本标准适用于高粱种质资源的长期、中期保存和监测。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 3543.3 农作物种子检验规程 净度分析 GB/T 3543.4 农作物种子检验规程 发芽实验 GB/T 3543.6 农作物种子检验规程 水分测定 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 生活力 种子在适当条件下能发育成植株的一种能力，一般用发芽率和发芽势计量。3.2 干燥 采用不损害种子活力的脱水技术，把种子含水量降到适于贮藏水平的过程。3.3 监测 在种质库种子保存过程中，定期取出种子样品进行发芽率测定，检查种子生活力状况，同时测查贮存种子的数量，以确定种子是否应进行繁殖更新。4 入库前处理 4.1 接纳登记 DB14/T 16082018 2 对入库保存的种子进行接纳登记，即对其进行纯度、净度、健康状况和数量等指标的初步检查和基本信息的登记。具体参见附录A。4.2 查重、去重 检查接收的同一批种子之间是否有重复（也称自身查重），并将接收种子“全国统一编号”、“原保存编号”和“种质名称”等数据项输入计算机，与库存种子管理数据库核对是否有重复。对已保存的种子，不再重新入库。4.3 种子清选 剔除破碎种子、空粒、瘪粒、霉粒、受病虫侵害粒及其他混杂种子，以及灰尘等其他物质。4.4 生活力检测 4.4.1 发芽试验条件 高粱种子初始发芽力的检测按照GB/T 3543.4执行。高粱种子发芽条件为20 30，最适宜发芽温度为25。4.4.2 破除休眠 怀疑高粱种子休眠时，发芽试验前可采用冷冻方法进行处理。具体做法为：发芽试验前见所有发芽试验种子放在湿润的发芽床上，置于5 10 预冷处理3 d，然后在25 下发芽。4.4.3 准备试验条件与种子 从所需发芽测试的高粱种子中随机取数量相等的3份种子并分装于3个纸袋中，每个纸袋内需附上流水号标签。每份种子数量为100粒。调节发芽箱的光照、温度、湿度；备好各种器具、试剂与药品，发芽床要进行洗涤和消毒。4.4.4 发芽试验 用医用酒精对每个发芽皿进行消毒，然后将发芽床基质滤纸或吸水纸置于发芽皿中，并加入高压灭菌的蒸馏水至淹没高粱种子一半。将每袋种子倒入每个发芽皿（盒）中并均匀的摆放在湿润的发芽床上，粒与粒之间应保持一定的距离，然后盖上盖放入已调节好的发芽箱中。4.4.5 发芽试验持续时间 高粱种子的发芽试验初次计数天数为4 d，末次计数天数为10 d。如果在规定试验时间结束前，样品已达最高发芽率，则试验可提前结束。如有发霉的种子应取出冲洗，严重发霉的应更换发芽床。4.4.6 发芽鉴定及发芽数量记录 每份种子材料发育成的正常幼苗数为发芽数。在初次计数或其他中期计数时，应将正常幼苗（已达到全部主要构造能正确鉴定的幼苗）取出去，并记录数量。对可疑或损伤、畸形或有其他缺陷的幼苗保留到末次计数时再判别并记录数量。严重腐烂或发霉的种子应尽早从发芽床上除去并记数。4.4.7 发芽结果的计算与表示 发芽结果是用正常幼苗数占供试种子数的百分率表示。百分率按四舍五入法计算到整数位。DB14/T 16082018 3 4.5 保存数量和入库初始发芽率标准 高粱种子入长期库（-18）保存的发芽率应85%，保存量应200 g。高粱种子入中期库（4）保存的发芽率应75%，保存量应150 g。4.6 库编号编码 剔除发芽率低于最低限的高粱种子后，对符合入库标准的种子进行编号，每份种子给一个永久库编号。可根据保存作物种类和种子特点，制定库编号编码。4.7 种子干燥 4.7.1 干燥条件 高粱种子的干燥条件可以选择干燥箱加热干燥法和双“十五”干燥间低湿干燥法。加热干燥法的条件为温度38，湿度8%10%，时间2 d。双“十五”干燥间低湿干燥法的条件为温度15 2、湿度15%20%，时间715 d。4.7.2 预估或测定种子的初始含水量 把要预估的高粱种子置于环境中，当种子的重量不再变化时，种子就与环境中空气的水分达到了平衡。测出当时当地的大气相对湿度和平均温度，就可预估出种子含水量。平衡种子含水量大约需要710 d。可用通风湿度计测量存放种子地点的湿度。表1为高粱种子在25，不同相对湿度下的平衡含水量。表1 在25 时高粱种子的平衡含水量 种名 相对湿度 15 30 45 60 75 90 高粱 6.4 8.6 10.5 12.0 15.2 18.8 注：在实际测定种子初始含水量按附录A方法对高粱种子抽测12份。4.7.3 种子预干燥 当高粱种子的初始含水量超过17%时需进行预干燥。先在低温的干燥间（20 25，20%30%RH）进行干燥，最好能采用“双15（15，15%RH）”的干燥箱，使高粱种子水分降至13%左右，然后再加热干燥。预干燥时间长短可用减重量法计算。其方法如下：首先测定种子的初始含水量和初始重量，并确定干燥后要达到的含水量，然后用下面的公式计算出达到最后含水量时的种子重量。DB14/T 16082018 4 4.7.4 种子干燥 逐份核查库编号和种子份数，确保不缺不乱。核对完后，将种子装入透气的尼龙网袋中，然后放入干燥箱内。干燥过程中至少每隔4 h观察干燥箱和干燥间的温、湿度变化和设备的运行情况。4.7.5 种子含水量测定 当种子干燥到预定时间时，抽测12份种子的含水量。含水量测定按附录B方法进行。若含水量达到贮藏要求时，将种子从干燥箱中取出并进行包装，否则继续进行干燥。4.8 种子包装称重 准备高粱种子入库所需的铝箔袋，并贴好标签。核对装有种子的尼龙袋上标签与入库铝箔袋上标签一致，把种子倒入相应的袋中。尼龙袋内的原始标签也一同装入铝箔袋中，即时封口。包装间温度一般为20 25，相对湿度30%40%。包装速度要快，以防干燥的种子吸收空气中的水分。包装好的种子用电子称称重，以克为单位。5 入库保存 5.1 种子储藏条件 温湿度条件：长期库温度-18，相对湿度小于50；中期库温度-4 4，相对湿度小于65。储藏含水量：长期库57；中期库59。5.2 结果回执 种子入库保存后，管理人员应对每一供种者提供的每一批种质做一份入库结果报告，主要内容包括合格种子清单和不合格种子清单。对合格的种子，要向供种单位开具种质入库保存证明。不合格的种子要告知不合格原因并退回给提供者。6 监测与更新 6.1 生活力检测间期 种子储藏过程中两次生活力监测的间隔时间。长期库生活力监测间期如下：a)种子首次生活力监测间期为15 a。b)种子第二次及随后监测间期：当发芽率高于 85以上时，每 1015年监测一次。当发芽率低于 85时，每510 a监测一次。c)中期库生活力监测间期为5 a。6.2 监测前准备 DB14/T 16082018 5 将要监测的种子从冷库中取出后存放到缓冲间23 d后再放到干燥间，在干燥间放置35 h后打开种子袋并数出需进行监测的种子，随后应尽快密封好并放回冷库。6.3 发芽率测定 以20粒种子为一组，重复23组高粱种子进行序列发芽试验，试验步骤与种子生活力监测方法相同。依据试验结果，按照计算出的序列分析界限值（见表2）做出决定：A-继续保存；B-继续测定；C-更新。参数：P0=0.85；p1=0.75；=0.05，n=20。表2 发芽试验结果序列分析的界限值 试验种子 种子发芽数 20 粒为一组 继续保存 继续测定 更新 1 20 1220 011 2 40 3740 2836 027 3 60 5360 4452 043 4 80 6980 6068 059 5 100 85100 7684 075 6.4 监测结果处理 将监测结果输入计算机并建立监测数据库。若监测发芽率在更新标准范围内，则需安排种子进行繁殖更新。除此之外，当高粱种子在长期库贮存生活力或保存量出现下列情况之一时，也应当立即取出种子进行繁殖更新。中期库发芽率与保存量的更新标准参照长期库标准执行。高粱种子发芽率降至起始发芽率水平的 85时。活种子数目不足以进行4次繁殖所需的种子量时，即每份活种子数目低于 800 粒。当种子样品在中期库绝种时。同一批次发芽率降至更新临界值以下的份数占到该批次份数的 50时，该批次所有种子都应该进行更新。6.5 繁殖更新 依据监测结果，确定需要繁殖更新的高粱种子清单。将需繁殖更新的种子信息输入数据库，建立繁种更新数据库。繁殖更新的操作按“农作物种质资源整理技术规程”进行。7 信息管理 7.1 基本信息 每一份入库保存种子鉴定和来源的信息，该信息不能改变。一般由提供者提供。包括：全国统一编号（如有需提供），原保存编号，种质名称，学名，提供者，原产地，来源地等。DB14/T 16082018 6 7.2 采集信息 在种质资源种植过程中的调查信息，主要由提供种子者提供。7.3 管理信息 每一份登记种质在入库处理过程中获得的一系列数据信息，以及供管理人员使用的有关数据信息。包括：入库初始信息、监测信息、更新信息、提取利用信息等。7.4 计算机管理 利用计算机建立种质库种质管理数据库，数据项由种质的基本信息、采集信息和管理信息组成。主要包括：库编号、全国统一编号（如有需记录）、库位号、作物名称、原产地、提供者、繁殖年份、入库保存日期、发芽率、发芽势、保存量、贮藏含水量、种子粒形、种子粒色、种子饱满度、种质整齐度等。7.5 纸质资料档案管理 将数据采集的原始记载表，分作物按库编号或入库时间顺序装订成册，建立原始记录资料档案管理。DB14/T 16082018 7 A A 附 录 A（资料性附录）入库保存种质资源标准 A.1 送交种子标准 a)种子应是当季繁殖的，发芽率一般要求85%以上；b)种子要清选干净，去除破碎粒、虫蚀粒、无胚粒、秕粒、瘦小粒、砸粒等，杂质不得超过2%；c)种子无明显病虫损害，未受损伤、未拌用农药或无包衣处理；d)种子收获后要及时进行晾干处理，送交时种子含水量应小于或等于13%；e)送交或邮寄种子时要妥善包装。每份材料袋内应有标签，标明作物名称、全国统一编号（如有需提供）、原保存编号，在袋的外部也应有对应的标识。包装要结实牢固、防漏、防潮、防混杂、放散包。A.2 种子基本信息 基本信息登记内容包括全国统一编号（如有需提供）、原保存编号、种质名称、学名、原产地、来源地、提供者，以及任何对贮存有帮助的有关生理学信息。A.3 接收种子处理 对符合入库要求的种子，给提供者开接纳收据，注明作物种类、接收份数、接收日期。对不符合入库标准的种子，应退回重新繁殖。对缺少基本信息的种子，应及时让提供者补充。对接纳后不能及时进行入库处理的种子，应暂时存放在种质库缓存间（10 2）中。DB14/T 16082018 8 B 附 录 B（规范性附录）种子含水量测定法 B.1 国际标准法 B.1.1 一般要求 样品在测定时，暴露在空气中的时间应减少至最低程度。B.1.2 试样处理 将种子充分混合，从中取出试样15 g25 g（种子量少可少取），除去杂质，依作物种类进行下述处理：a)磨碎磨碎的高粱种子至少50通过0.50 mm铜丝筛，而留在1.00 mm铜丝筛上不超过10；b)预先烘干当高粱种子含水量高于17应预先烘干。种质库收到种子一般不必预先烘干。若需处理，可在130 恒温箱内烘5 min10 min（因水分而异），然后再室温下摊凉2 h。B.1.3 称样品 将处理好的样品充分混匀，在感量1/1 000 g天平上称取4.5 g5 g，放在预先烘至恒重（130 烘1 h）的铝盒内（直径小于8 cm)，样品在铝盒内的分布，每平方厘米不超过0.3 g，摊平盖严并称重记录。二次重复。B.1.4 烘干方法 高粱种子适用于高恒温烘箱法，即样品在 130 133 烘箱内烘 2 h。测定时，检验室的空气相对湿度没有特别要求。B.1.5 烘干操作要求 采用 130 烘箱法时，先将烘箱预热至 140 左右才将样品盒放入。将样品盒盒盖打开放在距温度计 2 cm2.5 cm处,关闭箱门。5 min10 min后烘箱温度回升至 103 2 或 130 2 时开始计算时间，到时间后就打开箱门，盖好盒盖，放入盛有变色硅胶的干燥器内冷却至室温（约需 30 min45 min)后称重。称重时逐个地把铝盒从干燥器里取出，立即称重记录。称重期间不要敞开干燥器。B.1.6 结果计算 由烘后减少的重量计算水分，保留一位小数，计算公式如下：.(B.1)式中：DB14/T 16082018 9 M1样品盒和盖的重量（g）；M2样品盒和盖及样品的烘钱重量（g）；M3样品盒和盖及样品的烘后重量（g)。两次重复结果允许差距不超过 0.2，否则重做。B.1.7 资料信息处理 含水量测定过程中，应及时地把每项结果记录在表 B.1上，便于计算和资料保存。表B.1 种子含水量测定记录表 测定日期 作物 库编号 盒号 盒重（g)烘前盒重+样品重（g)烘后盒重+样品重（g)种子含水量（）平均含水量（）B.2 国家标准法（GB/T3543.6)国家标准法（GB/T3543.6)中高粱种子样品处理方法、烘干温度，计算方法与国际标准法相似，所不同的是样品烘干时间不同。国家标准法的高恒温烘箱法是样品在 130 133 烘干 1 h。_