ICS 67.040 C 53 DB37 山东省 地 方 标 准 DB 37/T 3818 2019 动物源性 食品中喹 烯酮药物 及代谢物1-DQCT、BDQCT、MQCA 残留量的测定 液相色谱-串联 质谱法 Determination of quinocetone and its metabolites 1-DQCT,BDQCT and MQCA residues in animal-derived foods Liquid chromatography tandem mass spectrometry 2019-12-24 发布 2020-01-24 实施 山 东 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB37/T 3818 2019 I 前 言 本标准 按照GB/T 1.1 2009 给出 的规 则起 草。本标准 由山 东省 畜牧 兽医 局提出 并 组 织实 施。本标准 由山 东省 畜牧 业标 准化技 术委 员会 归口。本标准 起草 单位：青 岛农 业大学。本标准 主要 起草 人：郝智 慧、曲 少奇、黄 亭亭、曲 丽华、孙京 新。DB37/T 3818 2019 1 动 物源性 食品中喹 烯酮药 物及代谢 物 1-DQCT、BDQCT、MQCA 残留量的 测定 液相色谱-串 联质谱 法 1 范围 本标准 规定了 动物 源性食 品中喹 烯酮药 物及 代谢物1-DQCT、BDQCT、MQCA 残 留 量测定 的液相 色谱 串联质 谱法。本标准 适用于 猪肝、猪肉、猪心 和鸡蛋 中的 喹烯酮 药物及 代谢物1-DQCT、BDQCT、MQCA 残留 量的 测定。本方法 的检 出限 均为1.25 g/kg，定 量限 均为2.5 g/kg。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 所注 日期的 版本 适用 于 本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法 3 原理 采用乙 酸乙 酯溶 液提 取样 品中喹 烯酮 及代 谢物1-DQCT、BDQCT、MQCA，提 取液 经 固相萃 取小 柱净 化，滤膜过 滤后 用液 相色 谱-串 联质谱 法进 行测 定，外标 法定量。4 试剂或 材料 除非另 有规 定，在分 析中 仅使用 确认 为分 析纯 的试 剂。4.1 水：GB/T 6682，一 级。4.2 乙酸乙 酯。4.3 乙腈：色谱 纯。4.4 甲醇：色谱 纯。4.5 二甲基 亚砜：色 谱纯。4.6 甲酸：色谱 纯。4.7 0.1%甲酸 水溶 液：准确 吸 取 0.5 mL 甲酸（4.6），加水（4.1）稀 释至500 mL，混 匀。4.8 0.1%甲酸 乙腈 溶液：准 确 吸取 0.5 mL 甲 酸（4.6），加乙 腈（4.3）稀 释至500 mL，混 匀。4.9 20%甲 醇溶 液：准确 量 取200 mL 甲 醇（4.4），加 水（4.1）稀释 至1 000 mL，混 匀。4.10 洗脱液：准 确吸 取20 mL 0.1%甲 酸水 溶液（4.7），加乙腈（4.3）稀释 至 1 000 mL，混 匀。4.11 0.1%甲酸 乙腈 溶液：0.1%甲酸 水溶 液（4.7）+0.1%甲酸 乙腈 溶液（4.8）=7+3。4.12 喹烯酮（QCT）对照 品：纯 度98.0%。4.13 3-甲基 喹噁 啉-2-羧 酸（MQCA）对 照品：纯 度98.0%。4.14 N1-脱 氧喹 烯酮（1-DQCT）对照品：纯 度98.0%。DB37/T 3818 2019 2 4.15 脱二氧 喹烯 酮（BDQCT）对 照品：纯度 98.0%。4.16 标准储 备溶 液：分 别称 取 喹烯酮 对照 品（4.12）、MQCA 对 照品（4.13）、1-DQCT 对照 品（4.14）、BDQCT 对照 品（4.15）10 mg，置 10 mL 棕 色容 量瓶 中，加 入 1 mL 的二 甲 基 亚 砜（4.5）溶解 后，用乙腈（4.3）定 容至 刻度，配 制成浓 度均 为 1 mg/mL 的 标准储 备溶 液，-20 冰 箱保存，有效 期为3 个月。4.17 混合标 准中 间溶 液：准确 吸取喹 烯酮 及 1-DQCT、BDQCT、MQCA 标准 储备 溶液（4.16）各 1 mL 置于10 mL 容 量瓶 中，加乙 腈（4.3）稀释 至10 mL，配制成 浓度 为 100 g/mL 的混合 标准 工作 溶液。4.18 基质混 合标 准工 作溶 液系 列：准 确称 取 5 份空 白试 样（2.0 g，精 确至0.001 g）于 50 mL 聚丙烯离心 管中，根 据需 要分 别加入 相应 体积 的混 合标 准中间 溶液（4.17），配 制成2.5 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL 的 基质 混合 标准 工 作溶液 系列，然 后 按7.1 和 7.2 操作，供 液相 色谱串联 质谱 仪分 析。4.19 C18 固相萃 取柱：250 mg/3 mL，或 其它 性能 类似 的小 柱。4.20 微孔滤 膜：0.22 m 有 机 系过滤 膜。5 仪器设 备 5.1 液相色 谱 串联 质谱 仪（HPLC-MS-MS）：配有 电喷 雾 离子源（ESI）。5.2 分析天 平：感 量0.001 g 和0.01 mg 各一 台。5.3 均质器：转 速不 低 于 20 000 r/min。5.4 氮气吹 干仪。5.5 色谱柱：C18，2.1 100 mm，1.8 m，或 其它 性能 类 似的柱 子。5.6 离心机：转 速不 低 于 10 000 r/min。5.7 旋涡混 合器。5.8 旋转蒸 发仪。6 样品 6.1 试样的 制备 取均质 后的 供试 样品，作 为供试 试样。取均质 后的 空白 样品，作 为空白 试样。取均质 后的 空白 样品，添 加适宜 浓度 的标 准溶 液，作为空 白添 加试 样。6.2 试样的 保存-18 以下 保存。7 试验步 骤 7.1 提取 平行做 两份实 验，称取试 样2 g（精确 至0.001 g），置于50 mL 聚丙烯 离心 管 中，准 确加入 乙酸 乙酯（4.2）10 mL，均 质提 取1 min 后，于10 000 r/min 离心10 min，取上 清液，置另 一干 净的50 mL 聚丙烯离心 管中。残 渣准 确加 入10 mL 乙 酸乙 酯（4.2）重 复提取 一次，离 心后 合并 上清液，将 上清 液于 旋转蒸发仪 中50 水浴，蒸 发 至近干。准 确加 入2 mL 20%甲醇 溶液（4.9）溶 解，涡旋混 合30 s，待净 化。DB37/T 3818 2019 3 7.2 净化 C18 固相 萃取 柱（4.19）依 次用3 mL 甲醇（4.4）、3 mL 水（4.1）预洗 活化。将 提取液 转移 至已 活 化好的C18 固相 萃取 柱（4.19）上，保 持流 速为1滴/s，加入3 mL水（4.1）淋洗，3 mL 洗 脱液（4.10）洗脱，收集洗 脱液于5.0 mL 离心 管中，40 氮气吹 干。残 渣用1.00 mL 含0.1%甲 酸 乙腈溶 液（4.11）溶解，用微孔 滤膜（4.20）过滤，取滤 液作 为HPLC-MS-MS 供试品 溶液，采 用外 标法 计算药 物含 量。7.3 测定 7.3.1 液相色 谱参 考条 件：a)色谱柱：C18，2.1 100 mm，1.8 m,或 其它 性能 类 似的柱 子；b)流动相：0.1%甲酸 水溶 液（4.7，A 相），乙 腈（4.3，B 相）；c)流速：0.3 mL/min；d)进样量：5 L；e)柱温：30；f)流动相 及梯 度洗 脱条 件见 表 1。表1 流动相 及梯 度洗 脱条 件 时间（min）A 相（%）B 相（%）0.0 95 5 2.0 60 40 3.0 60 40 4.0 0 100 7.0 0 100 8.0 95 5 9.0 95 5 7.3.2 质谱参 考条 件：a)离子源 及扫 描方 式：电喷 雾正离 子扫 描（ESI+）；b)毛细管 电压：3 kV；c)离子源 温度：110；d)脱溶剂 气（N2）温度：320；e)脱溶剂 气（N2）流速：550 L/h；f)监测方 式：多反 应监 测（MRM）；g)喹烯酮 药物 及代 谢 物 1-DQCT、BDQCT、MQCA 的 特征 离子对、碰 撞能 量和 锥孔 电压见 表 2。表2 特征离 子对、碰 撞能 量和 锥孔电 压 序号 化合物 母离子 子离子 碰撞能量/eV 锥孔电压/V 1 喹烯酮 307 273 15 24 2 1-DQCT 189 143 10 15 3 BDQCT 291 159 10 20 4 MQCA 275 143 10 20 7.3.3 定性测 定。通过 试样 色谱 图的保 留时 间与 相应 标准 品的保 留时 间、各色 谱峰 的特征 离子 与相 应浓度标 准溶 液各 色谱 峰的 特征离 子相 对照 定性。试 样与标 准品 保留 时间 的相 对偏差 在2.5%之 内；试DB37/T 3818 2019 4 样特征 离子 的相 对丰 度与 浓度相 当标 准溶 液的 相对 丰度一 致，相对 丰度 偏差 不超过 表 3 的规 定，则 可 判断试样 中 存 在相 应的 目标 化合物。表3 定性测 定时 相对 离子 丰度 的最大 允许 偏差 相对离子丰度，%50 20 至 50 10 至 20 10 允许相对偏差，%20 25 30 50 7.3.4 定量测 定。对基 质标 准工 作溶液 进样，以 峰面 积为 纵坐标、基 质标 准工 作溶 液浓度 为横 坐标 绘制标准 工作 曲线，用 标准 工作曲 线对 样品 采用 外标 法进行 定量，样 品溶 液中 喹烯酮 药物 及代 谢物1-DQCT、BDQCT、MQCA 的响 应值应 在仪 器测 定的 线性 范围内。喹 烯酮 药物 及代 谢物 1-DQCT、BDQCT、MQCA溶液的 多反 应监 测（MRM）色谱图 参见 附 录 A。8 试验数 据处 理 供试试 样中 喹烯 酮及1-DQCT、BDQCT、MQCA 残留 量以 质量分 数，单 位以 纳克 每千克 表示（ng/g），按式(1)计 算：12=mA C VA.(1)式中：A1 试样 溶液 中喹 烯酮 及1-DQCT、BDQCT、MQCA 峰 面积；A2 标准 溶液 中喹 烯酮 及1-DQCT、BDQCT、MQCA 峰 面积；C 标准 溶液 中喹 烯酮 及1-DQCT、BDQCT、MQCA 浓 度，单 位为 纳克 每毫 升（ng/mL）；V 溶解 残渣 的 液 体体 积，单 位为 毫升（mL）；m 试样 质量，单 位为 克（g）。注：测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9 精密度 在重复 性条 件下，两 次独 立测定 结果 与其 算术 平均 值的绝 对差 值，不大 于该 平均值 的15%。DB37/T 3818 2019 5 A A 附 录 A（资料 性附 录）喹烯酮 药物 及代 谢 物 1-DQCT、BDQCT、MQCA 混 合标 准工作 液 的MRM 色谱 图 喹烯酮 药物 及代 谢物1-DQCT、BDQCT、MQCA 混合 标准 工作液 的MRM 色 谱图 见图A.1。图A.1 混合标 准溶 液色 谱图（20 g/L）的 多反 映监 测（MRM）色谱 图 _