ICS 65.020.20 B 05 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1939 2020 文冠果组 织培养育 苗技术规 程 Technical Regulation for Tissue Culture of Xanthoceras sorbifolia 2020-07-30 发布 2020-08-30 实施 内 蒙 古 自 治 区 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB15/T 1939 2020 I 前 言 GB/T 1.1-2020 DB15/T 1939 2020 1 文冠果组 织培养 育苗技术 规程 1 范围 2 规范性 引用 文件 LY/T 1882 DB15/T 1588 3 LY/T 1882 DB15/1588 3.1 嫩茎 Tender stem 3.2 壮苗 Strong seedling 4 环境及 器具 消毒 灭菌 4.1 准备 室 消毒 84 4.2 接种室 消毒 灭菌 30 min 40 min 20 min 4.3 培养室 消毒 1 70%-75%DB15/T 1939 2020 2 4.4 超净工 作台 灭菌 30 min-40 min 40min 70%-75%4.5 器具灭 菌 4.5.1 接种工 具灭 菌 20 s 4.5.2 污染瓶（皿）灭菌、清洗 4.6 操作人 员入 室要 求 70%-75%5 培养基 配制 5.1 基本 培 养基 的选 择 WPM MS 5.2 母液的 配制 和保 存 5.2.1 母液的 配制 MS 1000 100 40 100 0.2 mg/mL MS A B 5.2.2 母液的 保存 4 3 5.3 基本 培 养基 的配 制 5.3.1 准备 pH 5.3.2 琼脂融 化 1L 700 mL 5.8 g DB15/T 1939 2020 3 5.3.3 糖溶解 30 g 5.3.4 加母液 和激 素 GA3 IBA IAA ABA 5.3.5 定容 1 L 5.3.6 pH 值 测定 和调 节 pH pH 1 mol/L HCl 1 mol/L NaOH pH 5.8 6.0 5.3.7 分装 1.5 cm 2.0 cm 5.3.8 封口 5.3.9 灭菌 1.1 kg/cm2 121 20 min 30 min 5.3.10 冷却 5.3.11 贮存 6 6.1 外植体 采集 6-8 10 16 6.2 外植体 的灭 菌 10 min 8 10 cm 1 60 min 90 min 70%30 s 3 0.1%5 min 5 8 DB15/T 1939 2020 4 6.3 外植体 切段 2 cm 1 7 7.1 初代培 养基 WPM+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1mg/L+TDZ 0.05 mg/L+0.25 g/L+0.2 g/L 7.2 外植体 的接 种 1 7.3 培养方 法 15 d-20 d 25 40 60 1500 lx 3000 lx 13 h/d 8 增殖继 代培 养 8.1 继代 培 养基 MS+6-BA 0.3 mg/L+IBA 0.8 mg/L+GA3 1.0 mg/L+AC 0.1 mg/L+Ca(NO3)2 1.0 g/L+6.0 g/L+30.0 g/L 8.2 培养方 法 3 cm 5 cm 2 cm 1 1 20 d 30 d 1 7.3 9 壮苗培 养 9.1 壮苗培 养基 MS+6-BA 0.1 mg/L+IBA 0.3 mg/L+AC 0.1 mg/L 9.2 培养方 法 2 cm 20 d 30 d 7.3 DB15/T 1939 2020 5 10 生根培 养 10.1 生根培 养基 1/2MS+IBA 0.5 mg/L 10.2 培养方 法 2.0 cm 5.0 cm 1 5 mm 8mm 20 d 45 d 7.3 11 组培 瓶 苗温室 炼 苗移 栽 11.1 炼苗 2 3 1 cm 3 5 5 cm 6 cm 25 80%90%1500 lx 2000 lx 3 d 4 d 11.2 移植 11.2.1 基质处理 1:1:1 800 11.2.2 移栽 9 cm 12 cm 11.2.3 移栽后 管理 80 90 21 29 18 21 1 11.2.4 有害生 物防 治 1 7 d 1 12 大田育 苗 12.1 容器苗 炼苗 80%1 1 12.2 大田培 育 DB15/T 1939 2020 6 12.2.1 整地 12.2.2 栽植 30 cm 40cm 50 cm DB15/T 1939 2020 7 A A 附 录 A（资料 性附 录）MS 培 养基 混合 母液 配制 表A.1 MS 培 养基 混合 母液 配制 表 mg/L mg mL mL/L A NH4NO3 1650 40 66000 1000 25 KNO3 1900 40 76000 MgSO4 7H2O 370 40 14800 B CaCl2 2H2O 440 100 44000 1000 10 C KH2PO4 170 100 17000 1000 10 D FeSO4 7H2O 27.8 100 2780 1000 10 Na2EDTA 2H2O 37.2 100 3720 E MnSO4 4H2O 22.3 100 2230 1000 10 ZnSO4 7H2O 8.6 100 860 H3BO3 6.2 100 620 F KI 0.83 100 83 1000 10 Na2MoO4 2H2O 0.25 100 25 CuSO4 5H2O 0.025 100 2.5 CoCl2 6H2O 0.025 100 2.5 G 2 100 200 1000 1 B1 0.1 100 10 B6 0.5 100 50 0.5 100 50 H 100 100 5000 500 10 DB15/T 1939 2020 8 B B 附 录 B（资料 性附 录）常见植 物生 长调 节物 质母 液配制 表B.1 常见植 物生 长调 节物 质母 液配制 表 mg/L 6-BA 0.1mol/L(HCl)0.1-0.2 KT 0.05-2.0 ZT 0.05-2.0 TDZ 0.01-0.05 IAA 0.1-1.0 IBA 0.05-1.0 NAA 0.01-0.5 2 4-D 0.01-2.0 GA3 0.01-0.5 _