ICS 67 X 04 DB13 河北省地方标准 DB 13/T 5189.6 2020 天然植物 提取物中 危害成分 的检测 第6 部分：万寿菊 提取物中 乙氧基喹 啉的 测定 2020-06-28 发布 2020-07-28 实施 河 北 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB13/T 5189.6 2020 I 前 言 本标准 按照GB/T 1.1-2009 给出的 规则 起草。DB13/T 5189 天然 植物 提 取物中 危害 成分 的测 定 共分12 个部 分：第1 部 分：亚硝 酸盐 的测 定；第2 部 分：二氧 化硫 的测 定；第3 部 分：正己 烷、丙酮、乙酸 乙酯、甲 醇和 乙 醇5 种有 机溶 剂残 留的 测定；第4 部 分：辣椒 提取 物中 砷、铅、镉、铬、汞 的测 定；第5 部 分：万寿 菊提 取物 中对氧 基苯 胺的 测定；第6 部 分：万寿 菊提 取物 中乙氧 基喹 啉的 测定；第7 部 分：天然 番茄 红中 苯并 芘 的测 定；第8 部 分：辣椒 提取 物中 苏丹红 的测 定；第9 部 分：辣椒 提取 物中 叔丁基 对苯 二酚 的测 定；第10 部分：辣 椒红 中赭 曲 霉毒 素 A 的 测定；第11 部分：叶 黄素 中苯 的 测定；第12 部分：甜 菊糖 苷中 邻 苯二甲 酸酯 的测 定。本部分 为DB13/T 5189的 第6部分。本标 准 由河 北省 市场 监督 管理局 提出。本标准 起草 单位：河 北省 食品检 验研 究院、晨 光生 物科技 集团 股份 有限 公司、石家 庄海 关技 术 中心、清 河县 食品 药品 检验 检测中 心。本标准 主要 起草 人：贾振 国、冯 浩彬、刘 登帅、张 强、王 红、张海 超、张凤 霞。DB13/T 5189.6 2020 1 天 然植物 提取物中 危害成 分的检测 第 6 部分：万寿菊 提取物 中乙氧基 喹啉的 测定 1 范围 本部分 规定 了 万 寿菊 提取 物 中乙 氧基 喹啉 的测 定方 法。本部分 适用 于 万 寿菊 提取 物 中乙 氧基 喹啉 的测 定。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 注日 期的版 本适 用于 本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB/T 6682 分析 实验 室用 水规格 和试 验方 法 3 原理 万 寿 菊提 取 物的 乙氧 基喹啉 经 乙腈 超 声提 取，取上清 液 过膜，液 相 色谱-串联质 谱 仪检 测，外标法定量。4 试剂或 材料 除另有 规定 外，水为GB/T 6682 规 定的 一级 水，试剂 均为色谱 纯。4.1 试剂 4.1.1 丙酮（C3H6O）：色 谱纯。4.1.2 乙腈（C2H3N）：色 谱纯。4.2 标准品 4.2.1 乙氧基 喹啉 标准 品（C14H19NO，CAS 号：91-53-2）：纯度大 于99.0%，-18 冷 冻储藏。4.3 标准溶 液配 制 4.3.1 标准储 备液：准 确称 取乙 氧基喹 啉标 准 品50 mg（精 确至0.1 mg），用 乙腈 定 容至 50 mL，配制成 1 mg/mL 的 储备 液，于-18 冰 箱中 冷冻 保存。4.3.2 标准中 间液：准 确移 取适量 标准 储备 液，用乙 腈配 制成 100 ng/mL 的标 准中 间液。4.3.3 标准使 用液：准 确吸 取标 准中间 液 0mL、0.5mL、1mL、2mL、5mL、10 mL 于6 个100 mL 容 量瓶中，用 空白 样品 提取 液 定 容，此 标准 系列 的浓 度 为0 ng/mL、0.5 ng/mL、1 ng/mL、2 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL。DB13/T 5189.6 2020 2 5 仪器与 设备 5.1 液相色 谱-串联 质谱 仪：配 电喷雾 离子 源。5.2 电子天 平：感 量 0.001 g、0.0001 g。5.3 漩涡混 匀器。5.4 冷冻离 心机：转 速不 低 于10000 r/min。5.5 超声波 清洗 机 6 试验步骤 6.1 试样制 备 准确称 取 万 寿菊 提取 物样 品0.5 g（精确 至0.001 g）于50 mL 试管 中，加入5 mL丙 酮，超声 使试样溶解，加 入20 mL 乙腈，超声提 取20 min，10000 r/min 4 冷冻 离心3 min。取上 清液 至25 mL 容量瓶中，用乙 腈定 容至 刻度。过0.22 m滤 膜，待测。6.2 色谱质 谱参 考条 件 液 相色 谱条 件和 质谱 条件。6.2.1 液相色 谱条 件 a)色谱柱：C18 色 谱柱（2.1 mm100 mm，2.5 m），或 性能 相当 者；b)流动相：乙 腈：0.1%甲酸 水=70:30；c)流速：0.4 mL/min；d)柱温：40；e)进样量：2 L。6.2.2 质谱条 件 a)离子源：电 喷雾 离子 源；b)扫描方 式：正离 子扫 描；c)检测方 式：多级 反应 监测（MRM）；d)电喷雾 电压：5500 V；e)离子源 温度：550；f)雾化气、气 帘气、辅 助加 热气、碰撞 气均 为高 纯氮 气或根 据仪 器选 择其 他合 适气体；g)定性离 子对、定 量离 子对、去簇 电压 及碰 撞能 量见 表 1。DB13/T 5189.6 2020 3 表1 乙氧 基喹 啉的 质谱 参 数 目标物质名称 定量离子对(m/z)定性离子对(m/z)去簇电压/V 碰撞能量/V 乙氧基喹啉 218.3/148.3 218.3/148.3 70 30 218.3/174.4 70 35 6.3 液相色 谱-串联 质谱 测定 6.3.1 定性测 定 按照上 述条 件测 定样 品和 建立标 准工 作曲 线，如果 样品中 化合 物质 量色 谱峰 的保留 时间（参 见 附录A）与 标准 溶液 的保 留时 间相比 在允 许偏 差2.5%之内；定性 离子 对的 相对 丰度与 浓度 相当 的标 准 溶液相比，相 对丰 度偏 差不 超过表2的 规定，则 可判 断 样品中 存在 相应 的目 标化 合 物。表2 定性 确证 时相 对离 子 丰度的 最大 允许 偏差 相对离子丰度/%20 20 50 1020 10 允许的相对偏差/%20 25 30 50 6.3.2 定量测 定 在仪器 最佳 工作 条件 下，对基质 标准 工作 溶液 进样，以标 准溶 液中 被测 组分 峰面积 为纵 坐标，标准溶液 中被 测组 分浓 度为 横坐标 绘制 标准 工作 曲线，用标 准工 作曲 线对 样品 进行定 量。6.4 空白试 验 空白试 验，除不 加试 样外，均按 上述 测定 步骤 进行。7 试验结 果 万寿菊 提取 物 中 乙氧 基喹 啉含量X 按 式（1）计算。mV c cX)(0(1)式中：X 万 寿菊 提取 物乙 氧基 喹啉的 含量，单 位为 微克 每千克（g/kg）；c 从 标准 工作 曲线 查出 的试样 溶液 中乙 氧基 喹啉 的浓度，单 位为 纳克每 毫 升（ng/mL）；c0 从 标准 工作 曲线 查出 的空白 试验 中乙 氧基 喹啉 的浓度，单 位为 纳克每 毫 升（ng/mL）；V 试 样最 终稀 释体 积，单位为 毫升（mL）；m 试 样质 量，单位 为克（g）。计算结 果保 留至 小数 点后 一位。8 精密度 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的绝 对差 值不得 超过 算术 平均 值的10%。DB13/T 5189.6 2020 4 9 检出限 和定 量限 检出限 为8 g/kg，定量 限 为25 g/kg。DB13/T 5189.6 2020 5 A A 附 录 A（资料 性附 录）乙氧基 喹啉 的多 反应 监测（MRM）色 谱图 A.1 乙氧基 喹啉 的多 反应 监测（MRM）色 谱图，见 图A.1。图A.1 乙 氧基 喹啉 的多 反 应监测（MRM）色谱 图 _