ICS 65.020.20 B 61 DB32 江 苏 省 地 方 标 准 DB32/T 3901 2020 脱毒矮化 自根砧苹 果苗木繁 育技术规 程 Technical regulation for propagation apple seedings with virus-free dwarf rootstocks 2020-10-13 发布 2020-11-13 实施 江 苏 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB32/T 3901 2020 I 前 言 本 标准 按照GB/T 1.1 2009 给出 的规 则起 草。本标准 由 南 京农 业大 学提出。本标准 由江 苏省 园艺 标准 化委员 会 归 口。本标准 起草 单位：南京 农 业大学、江苏 徐淮 地区 徐 州农业 科学 研究 所、江 苏 省大沙 河现 代农 业综 合开发集 团有 限公 司。本标准 主要 起草 人：渠慎 春、赵 林、张忠 伟、侯应 军、陈 卫平、王 磊彬、高 志红。DB32/T 3901 2020 1 脱 毒矮化 自根砧苹 果苗木 繁育 技术 规程 1 范围 本标准 规定 了 采 穗圃 营建、矮化 砧木 的选 择、砧木 苗培育、嫁 接及 定植、嫁 接苗管 理、嫁接 苗 出 圃等矮化 自根 砧苹 果苗 木繁 育技术。本标准 适用 于脱 毒苹 果矮 化自根 砧苗 木的 繁育。2 规 范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日 期的引 用文 件，仅注 日 期 的 版本适 用于 本文 件。凡是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有 的修改 单）适用 于本 文件。GB 8370 苹果 苗木 产地检 疫规程 GB 9847 苹果 苗木 GB/T 12943 2007 苹 果 无病毒 母本 树和 苗木 检疫 规程 NY/T 1085 2006 苹 果苗 木繁育 技术 规程 3 采 穗圃 营建 按 NY/T 1085 2006 规 定 执行。4 矮 化砧 木的 选择 矮化砧 木可 以选 择M9T337、M9、B9 等。5 脱毒 砧 木苗 及苹 果品 种 苗 获取 见附录A。6 砧 木 苗 培育 6.1 砧 木组 培苗 移栽 经过病 毒检 测的 脱 毒 组培 苗进行 炼苗 并移 栽到 营养 钵中，然后 在设 施大 棚内 驯化 培 育到30 cm 高，根颈部 位粗 在0.5 cm 左右。按株 距30 cm、行距150 cm，把以上驯 化苗 木移 栽 到 田间 培育。6.2 第 一年 管理 6.2.1 水 肥管 理 DB32/T 3901 2020 2 生长季 根据 天气 情况 灌水，保 持土 壤相 对含 水量75%左右。施 肥23次（最后一 次时间 为压 条后），每次施肥量为复合 肥20 kg/亩30 kg/亩，根据长势 追加适量尿素，同 时补充 叶面肥(顶绿螯合铁6000倍+优聪 素700 倍)。6.2.2 除草 杂草高 于5 cm 时，应 进行 人工除 草。期 间可 以适 当 增加 短 截促 进分 枝的 处理，以保证 后面 压条 的 枝条数量。6.2.3 病 虫害 防治 按 NY/T 1085 2006 规定 执行。6.2.4 压条 6.2.4.1 时间 10 月中 下旬（新 梢停 长后）。6.2.4.2 方法 6.2.4.2.1 修剪 压条 前剪 去梢 部不 充实 部分，同 时剪 去长 势弱、生 长方向 与压 条方 向相 反的 侧枝（剪到离侧 枝的 基部3 cm 5 cm 处）。6.2.4.2.2 开沟 沿 砧木 行 两侧 开宽50 cm 左右（宽 度须足 够容 纳全 部压 条）、深约10 cm 的浅 沟。6.2.4.2.3 压条 采 用顺 行编织，辅 以竹 签别 枝的 办法将 所有 大枝 错落 压实，必须 将全 部枝 条 平 卧 在 浅沟底部。6.2.4.2.4 覆土 压 条后 用细土 将裸 露在 外的 枝条 覆盖。6.3 第二 年管 理 6.3.1 水 肥管 理 在苗木 高 度10 cm 15 cm 和 覆锯 末之 前分 两次 进行 追肥，每次 施复 合肥20 kg/亩30 kg/亩。覆 完锯末以 后，适时 灌水，自 根砧压 条繁 殖，水分 是生 根的关 键，始终 保持 土壤 相对含 水量75%左右。6.3.2 覆 锯末 6.3.2.1 第 一次 覆腐熟 锯末 子 砧苗 高度30 cm 左右 时开始 第一 次覆 锯末，厚 度5 cm 10 cm。6.3.2.2 第 二次 覆腐熟 锯末 子砧 苗 高度40 cm 45 cm 时开始第二 次覆 锯末，厚度5 cm 10 cm。以后多次覆 盖，直至 锯末 厚度 达到50 cm。6.3.2.3 覆土 每次 覆锯 末后，持 续灌 水，待锯 末湿 度达到 手握 成团 时开 始覆 土，覆土 高度3 cm 5 cm。6.3 出圃 秋季落 叶后 即可 出圃，可 采用机 械出 苗，按GB 9847 分 级并 贮藏。7 嫁 接及 定植 7.1 接穗 准备 落叶后 剪取 脱毒 优良 苹果 品种芽 体饱 满的 一年 生中 庸枝条 为接 穗，沙藏 或保 湿冷藏。DB32/T 3901 2020 3 7.2 嫁接 时期 和方 法 嫁接时 期为 春季，方 法为 枝接。采用 坐地 嫁接 或室 内嫁接；砧 木粗 度要 求0.8 cm 1.0 cm。7.3 嫁接 苗定 植 将嫁接 好的 苗木 栽植 到苗 圃中，栽植 密度 为株 距30 cm、行距80 cm。8 嫁 接苗 管理 8.1 成活 率检 查 嫁接 后10天检 查 成活 率，及时补 接。8.2 嫁接 苗修 剪 秋季 落叶后嫁接 苗剪除分枝，第二年当 植 株长至120 cm 时定 干，同时连 续施用整 枝灵2 次，间隔1周，促进 分枝，并 立支 架绑 缚。第一 次整 枝灵 亩用12 ml，兑水20 kg 喷雾，第二 次亩用13 ml，兑水20kg 25kg喷雾，要喷 在枝 条的 嫩尖和 顶芽 上。8.3 肥水 管理 同6.1.1。8.4 病虫 害防 治 同6.1.3。9 嫁 接苗 出圃 嫁 接苗 在苗 圃中 生长2年，当苗木 分枝 达到5个 以上，嫁接口 上10 cm 处苗 木直 径 达到1.5 cm 以上可以出圃。按GB 8370 进行苹 果苗木 产地 检疫，检 疫合 格可以 出圃。10 记录 对生产 全过 程进 行记 录，生产档 案保 存2 年。DB32/T 3901 2020 4 附 录 A（规范 性附 录）脱毒苹果 砧 木苗 及苹 果品 种苗的 获得 A.1 苹果 品种 和砧 木初 代 组培苗 获得 A.1.1 培 养基 的配 制 采用1/2MS 培养 基，培养 基 成分为：1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1g/L PVP+30g/L 蔗糖+7g/L 琼脂。A.1.2 植 物材 料准 备和 灭 菌接种 剪取幼 苗顶 部1 cm 2 cm（含生 长点）茎段 作为 外 植体进 行初 代培 养。用75%酒精 处理45 s，然 后再用10%过 氧化 氢消 毒20 min 后接种。A.2 组培 苗继 代增 殖扩 繁 继代增 殖扩 繁培 养基 为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA+30 g/L 蔗糖+7 g/L 琼脂，pH=5.8。A.3 苹果 茎尖 超低 温脱 毒 处理 A.3.1 茎 尖预 培养 取组培 苗 约2 mm 左右的茎 尖，接种 于MS+6.0 g/L 琼脂粉+0.75 mol/L 蔗糖的培 养基中，25 暗培 养3 d。A.3.2 装载 取预培 养过 的茎 尖，放 入 装载溶 液中，装载 溶液 为MS+2 mol/L 甘油+0.75 mol/L 蔗糖，pH=5.8。处理温度 为25，处 理时 间 为60 min。A.3.3 超 低温 处理 将装载 过的 茎尖 转移 到pH5.8 的PVS-2溶液中，处理 温度为0，处 理时 间为2 h。然 后转 入10 mL冻存管 中，直 接投 入液 氮中 处理1 h。PVS-2 溶液 为：MS+30%(W/V)甘油+15%(W/V)聚乙 二醇+15%(W/V)DMSO(二 甲基 亚砜)+0.4 mol/L 蔗糖。A.3.4 解冻 从液氮 中取 出冻 存管，快 速转移 到40 的 水浴 锅中，处理2 min。然后取 出茎 尖放入MS+1.2 mol/L的蔗糖 溶液 中20 min，直到茎尖 漂 浮 在液 体表 面。A.3.5 茎 尖再 生培 养 将处理 过的茎 尖转 入 增殖 培养基 中，暗 培养1 周后 进 行光照 培养。一个 月后将 再生株 系进行 继代 扩繁，增 殖扩 繁培 养基 为：MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA+30 g/L 蔗糖+6 g/L 琼脂，pH5.8。DB32/T 3901 2020 5 A.4 再生 植株 的病 毒检 测 按GB/T 12943 2007 进 行 苹 果 无 病 毒 母 本 树 和 苗 木 检 测，根据GenBank 登录的ACLSV、ASGV、ASPV、APMV、ASSVD 等5种病 毒外壳蛋 白序列设计 引物，结 合苹果内 参基因TUB 特 异性片段 分别进行PCR 扩增 验证，从 而检 测再生 植株 是否 含有 病毒。A.5 扩繁、炼 苗和 移栽 经过病 毒检 测的 无病 毒组 培苗进 行扩 繁、炼苗 和移 栽。A.6 脱毒 原种 的保 存 脱毒原 种的 保存 的方 式有 田间原 种保 存圃 保存 和室 内组培 保存。A.6.1 田间 原种 保存 圃保 存 无病毒 原种树 定植 于有防 虫保护 网设备 的网 室内或 专门的 温室里，并 远离有 病毒潜 伏来源 的 果 园2 km 以上。A.6.2 组培 保存 由组织 培养 方法 获得 的无 病毒原 种可 以保 留在 瓶内 继代培 养。如 果需 用接 穗，可以扩 繁几 代，移至田间。A.6.3 病毒 检测 无病毒 原种 树 每5年 应进 行1次病 毒检 测，发现 问题 即 剔除。_