II C S 6 5.1 5 0C C S B 5 2DB4407江 门 市 地 方 标 准D B 4 4 0 7/T 6 5 2 0 2 0弯 口 吸 虫 病 防 治 技 术 规 程T e c h n i c a l r e g u l a t i o n f o r c o n t r o l l i n g o f c l i n o s t o m i a s i s2 0 2 0-0 9-0 7 发 布 2 0 2 0-1 0-0 7 实 施江 门 市 市 场 监 督 管 理 局发 布D B 4 4 0 7/T 6 5 2 0 2 01前 言本 文 件 按 照 G B/T 1.1-2 0 2 0 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分：标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规 定 起草。请 注 意 本 文 件 的 某 些 内 容 可 能 涉 及 专 利。本 文 件 的 发 布 机 构 不 承 担 识 别 这 些 专 利 的 责 任。本 文 件 由 江 门 市 市 场 监 督 管 理 局、江 门 市 农 业 农 村 局 归 口 管 理。本 文 件 起 草 单 位：江 门 市 畜 牧 兽 医 技 术 推 广 站、江 门 市 渔 业 技 术 推 广 站、蓬 江 区 丰 昇 野 生 动 物 驯 养繁 殖 实 验 场。本 文 件 主 要 起 草 人：冯 开 容、李 万 荣、陈 明 波、邓 乐 平、罗 嘉 轩、丘 倬 希、汪 海 涛、黄 晓 东、曹 建伟、陈 凤 团、李 劲 丰。D B 4 4 0 7/T 6 5 2 0 2 02弯 口 吸 虫 病 防 治 技 术 规 程1 范 围本 文 件 规 定 了 弯 口 吸 虫 病 防 治 技 术 的 术 语 和 定 义、弯 口 吸 虫 病 的 诊 断、防 控 措 施 以 及 病 害 动 物 和 病害 动 物 产 品 的 处 理。本 文 件 适 用 于 规 模 化 水 产 和 水 禽 养 殖 单 位 弯 口 吸 虫 病 的 监 测、诊 断 和 预 防 控 制。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款。其 中，注 日 期 的 引 用 文 件，仅 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文 件；不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本（包 括 所 有 的 修 改 单）适 用 于 本 文 件。G B 1 1 6 0 7 渔 业 水 质 标 准G B 1 3 0 7 8 饲 料 卫 生 标 准G B 1 6 5 4 8 病 害 动 物 和 病 害 动 物 产 品 生 物 安 全 处 理 规 程N Y/T 1 1 6 7 畜 禽 场 环 境 质 量 及 卫 生 控 制 规 范N Y 5 0 2 7 无 公 害 食 品 畜 禽 饮 用 水 水 质N Y/T 5 0 3 0 无 公 害 农 产 品 兽 药 使 用 准 则N Y/T 5 0 3 8 无 公 害 食 品 家 禽 养 殖 生 产 管 理 规 范N Y 5 0 5 1 无 公 害 食 品 淡 水 养 殖 用 水 水 质3 术 语 和 定 义3.1弯 口 吸 虫 病 c l i n o s t o m i a s i s弯 口 吸 虫 病 由 中 华 弯 口 吸 虫（C l i n o s t o m u m s i n e n s i s）或 扁 弯 口 吸 虫(C l i n o s t o m u m c o m p l a n a t u m)侵 入 机 体 引 起 的 禽 类 或 鱼 类 的 寄 生 虫 病。弯 口 吸 虫 还 可 侵 入 人、两 栖 和 爬 行 类 机 体，引 起 相 应 的 寄 生 虫病。3.2生 活 史 l i f e h i s t o r y生 活 史 是 指 弯 口 吸 虫 的 完 成 一 个 世 代 的 生 长、发 育 和 繁 殖 的 过 程。主 要 包 括 卵、毛 蚴、胞 蚴、雷 蚴、尾 蚴、囊 蚴、成 虫 阶 段。3.3临 床 诊 断 c l i n i c a l d i a g n o s i s临 床 诊 断 是 指 兽 医 工 作 者 对 疑 似 患 病 动 物 进 行 疾 病 检 查，并 对 病 因、发 病 机 理 作 出 鉴 别。D B 4 4 0 7/T 6 5 2 0 2 033.4剖 检 n e c r o p s y剖 检 是 动 物 解 剖 后，通 过 肉 眼 和 显 微 镜 观 察，检 查 其 组 织 或 器 官 病 变。3.5实 验 室 诊 断 l a b o r a t o r y d i a g n o s i s通 过 物 理、化 学、生 物 等 实 验 室 检 测 方 法 对 动 物 样 本 进 行 检 验，检 验 结 果 作 为 确 诊 参 考 指 标。4 弯 口 吸 虫 病 的 诊 断4.1 流 行 特 点该 病 全 国 各 地 均 有 发 现，流 行 季 节 为（3 9）月 份。弯 口 吸 虫 胞 蚴、雷 蚴 阶 段 主 要 寄 生 于 淡 水 螺；囊 蚴 阶 段 主 要 寄 生 于 淡 水 鱼 类，也 可 寄 生 于 两 栖 类 和 爬 行 类；童 虫、成 虫 阶 段 阶 段 主 要 感 染 禽 类，国 外也 有 记 录 曾 感 染 人 类。弯 口 吸 虫 病 在 淡 水 鱼 类 中 流 行 广，传 播 快，感 染 率 高，养 殖 场 可 在 不 到 两 周 时 间，9 0 的 苗 种 池 均 感 染 此 病，发 病 的 主 要 是 规 格 较 小 的 鱼 种，尤 以 体 长（4 7）c m 的 淡 水 鱼 苗 种 感 染 率 最高，致 死 率 可 达 1 0 0%。4.2 临 床 症 状4.2.1 禽 类 主 要 表 现 精 神 不 振，食 欲 下 降,逐 渐 消 瘦,羽 毛 松 乱、光 泽 减 少，皮 肤 苍 白。口 腔 内 特 别 是咽 喉 表 皮 上、舌 基 部、下 颌 等 处，有 柚 子 肉 粒 样 小 虫 寄 生，并 引 起 继 发 或 并 发 症 状。4.2.2 鱼 类 早 期 症 状 不 明 显，后 期 可 出 现 狂 游、暗 浮、体 表 及 尾 鳍 尖 端 发 黑 等 症 状，生 长 发 育 受 阻。4.3 剖 检 变 化4.3.1 禽 类 一 般 可 见 咽 喉 表 皮 上、舌 基 部、下 颌、食 道 内 等 处 有 柚 子 肉 粒 样 小 虫 寄 生，可 见 局 部 创 伤、化 脓 病 灶 等 病 理 变 化。4.3.2 鱼 类 头 部 及 躯 干 部 可 见 橘 黄 色 胞 囊，腹 鳍、臀 鳍 的 浅 肌 层、体 侧 浅 层 肌 肉 中 或 可 见 胞 囊。4.4 实 验 室 诊 断4.4.1 成 虫 检 查成 虫 呈 米 黄 色，大 小 为 约 6 m m 2 m m；在 4 0 0 显 微 镜 下，虫 体 顶 端 有 1 个 口 吸 盘，下 为 肌 质 的 咽，无食 道，肠 的 二 盲 支 直 至 虫 体 后 端，伸 延 之 中 分 出 侧 支；腹 吸 盘 位 于 虫 体 1/4 处，大 于 口 吸 盘；睾 丸 1 对，纵 列、分 叶，两 睾 丸 之 间 有 1 卵 巢 原 基。4.4.2 囊 蚴 检 查胞 囊 呈 橘 黄 色，圆 形 或 长 圆 形，直 径 约 2.5 m m；胞 囊 中 的 囊 蚴 体 长 约 4 m m。初 期 似 尾 蚴，消 化 系 统 保持 从 口 经 管 状 通 道 到 达 囊 状 的 原 肠；后 期 身 体 珊 状 组 织 形 成 复 杂 网 状 构 造，并 充 满 黄 色 的 物 质，整 体 呈浅 黄 色。4.4.3 虫 卵 检 查4.4.3.1 检 查 对 象D B 4 4 0 7/T 6 5 2 0 2 04对 禽 类 口 腔 内 容 物 或 呕 吐 物 作 虫 卵 检 查。4.4.3.2 饱 和 硫 代 硫 酸 钠 溶 液 漂 浮 法操 作 过 程 如 下：a)将 口 腔 内 容 物 或 呕 吐 物 置 于 小 烧 杯 中,加 入(1 0 2 0)倍 体 积 饱 和 硫 代 硫 酸 钠 溶 液,充 分 混 匀；b)用 孔 径 0.4 5 0 m m 的 铜 纱 网 过 滤,将 滤 液 置 平 底 试 管 内，静 置 3 0 m i n 左 右，则 虫 卵 上 浮；c)用 直 径(0.5 1.0)c m 的 金 属 圈 平 着 接 触 滤 液 表 面,提 起 后 将 粘 于 金 属 圈 上 的 液 膜 抖 落 于 载 玻片 上，加 盖 玻 片 镜 检。4.4.3.3 蒸 馏 水 沉 淀 法操 作 过 程 如 下：a)水 洗 沉 淀 法 将 粪 样(1 0 2 0)倍 体 积 蒸 馏 水 充 分 搅 拌 成 混 悬 液；b)用 孔 径 0.4 5 0 m m 的 铜 纱 网 过 滤,于 锥 形 瓶,用 水 反 复 冲 洗，直 至 上 层 液 清 晰 透 明 为 止；c)取 沉 渣 涂 片 镜 检。4.4.4 分 子 生 物 学 检 查采 用 聚 合 酶 链 反 应(P o l y m e r a s e C h a i n R e a c t i o n,P C R)检 测 技 术 通 过 扩 增 方 法 检 测 弯 口 吸 虫 基 因 组中 特 异 性 的 D N A。4.4.5 水 体 尾 蚴 检 查4.4.5.1 用 3 8 m 孔 径 的 尼 龙 过 滤 网 制 成 直 径 1 4 c m,高 2 5 c m 的 圆 椎 形 袋，在 待 检 水 体 中 打 捞 1 0 次，然 后 将 过 滤 袋 卷 起 插 入 盛 有 浓 度 为 1 0%甲 醛 溶 液 试 管 中,浸 泡(2 0 3 0)m i n。4.4.5.2 取 出 过 滤 袋,取 下 回 形 针，把 过 滤 袋 放 入 装 有(6 0 0 8 0 0)m l 无 氯 的 自 来 水 的 量 杯 中 荡 洗,翻过 袋 面 再 荡 洗,沉 淀(5 0 6 0)m i n。4.4.5.3 弃 去 2/3 上 清 液 体,剩 余 液 体 通 过 滤 板 上 放 有 快 速 定 量 滤 纸 的 平 底 漏 斗 自 然 过 滤。4.4.5.4 用 酸 性 品 红 溶 液 染 色,盐 酸 溶 液 脱 色，取 出 滤 纸,用 铝 制 的 等 距 离 样 板 划 线,用 1 5 解 剖 镜在 白 色 背 景 下 观 察,尾 蚴 呈 红 色,再 用(2 5 4 0)的 解 剖 镜 确 认。4.5 结 果 判 定4.5.1 怀 疑 病 例符 合 指 标 4.2。4.5.2 疑 似 病 例怀 疑 病 例 符 合 指 标 4.3、4.4.1、4.4.2、4.4.3 之 一。4.5.3 确 诊 病 例疑 似 病 例 符 合 指 标 4.4.4。5 防 控 措 施5.1 环 境 控 制5.1.1 禽 舍 保 持 干 燥,温 度 适 宜,并 适 度 通 风,提 供 良 好 的 生 活 环 境。按 N Y/T 1 1 6 7 操 作 并 符 合 其 要 求。D B 4 4 0 7/T 6 5 2 0 2 055.1.2 池 塘 投 苗 前，应 彻 底 消 灭 淡 水 螺 类。进 水 时 使 用 筛 孔（0.1 8 0 0.2 5 0）m m 的 过 滤 网 过 滤。每（1 0 2 0）d 换 水 一 次。溶 解 氧 保 持（5 8）m g/L。5.1.3 使 用 防 鸟 网 隔 离 野 鸟。5.2 避 免 交 叉 传 播带 水 上 运 动 场 的 禽 舍,避 免 与 其 他 水 体 交 叉 传 播。5.3 饲 养 密 度 控 制5.3.1 禽 类 饲 养 密 度 应 符 合 N Y/T 5 0 3 8 的 要 求。5.3.2 鱼 类 应 按 不 同 品 种 和 规 格，科 学 投 放。5.4 饲 料 质 量 控 制应 饲 喂 符 合 G B 1 3 0 7 8 要 求 的 全 价 饲 料,禁 止 使 用 冰 鲜 杂 鱼。5.5 饮 水 质 量 控 制禽 类 饮 用 水 应 符 合 N Y 5 0 2 7-2 0 0 8 的 要 求。养 鱼 水 源 水 质 应 符 合 G B 1 1 6 0 7 的 规 定。养 殖 池 塘 水 质 应符 合 N Y 5 0 5 1 的 规 定。5.6 消 毒 控 制。5.6.1 鱼 苗、鱼 种 应 用(3%5%)食 盐 水 浸 泡 消 毒 5 1 0 m i n 投 放。半 月 后，每 m 水 体 使 用（1 2）g漂 白 粉（2 8%有 效 氯）泼 洒 一 次；每（1 5 3 0）d 用（1.0 1.5）m g/L 漂 白 粉 全 池 泼 洒，进 行 池 塘 消 毒。病 鱼 池 中 使 用 过 的 鱼 具 须 用 聚 维 酮 碘 浸 泡（1 2）h 进 行 消 毒，药 物 浓 度 为 1 0%聚 维 酮 碘 稀 释 5 0 0 倍。病 鱼 池 水 未 经 消 毒 不 得 排 放。聚 维 酮 碘 对 金 属 制 品 有 腐 蚀 性，对 金 属 器 械 不 宜 长 期 浸 泡 消 毒。5.6.2 禽 场 应 定 期 消 毒。禽 场 内 应 设 置 净 道 和 污 道,禽 场 和 禽 舍 门 口 应 设 立 消 毒 池,消 毒 池 放 0.5%百毒 杀 溶 液。对 场 内 道 路 的 地 面 和 明 沟 表 面 可 用 生 右 灰 消 毒 药 进 行 消 毒，平 时 预 防 消 毒 建 议 每 月 两 次,发病 时 消 毒 可 1 次/d。控 制 人 员 出 入,定 期 更 换 消 毒 药 水。5.7 尾 蚴 控 制全 池 泼 洒 精 制 敌 百 虫，每 隔 2 4 h 泼 1 次，连 续 用 2 次，用 药 2 4 h 后 换 水,根 据 池 水 体 P H 值 决 定 用 药 浓 度，P H 值（6.5 7）时 用 0.4 p p m，而 P H 值（8 9）时 用 0.3 p p m。休 药 期 5 0 0 度 日。5.8 淡 水 螺 控 制池 中 如 发 现 淡 水 螺，可 在 傍 晚 将 草 扎 成 数 小 捆 放 入 池 中 诱 捕，于 翌 日 清 晨 把 草 捆 捞 出，将 其 消 灭，连 续 7 d。也 可 用 烟 酸 苯 胺 杀 灭 淡 水 螺，浓 度 为 0.4 g/m 水 体，休 药 期 5 0 0 度 日。本 品 对 皮 肤 有 强 烈 刺 激，使 用 时 要 避 免 与 裸 露 皮 肤 接 触。5.9 定 期 监 测在 流 行 期 应 加 强 定 期 监 测，具 体 按 4.2、4.3 和 4.4 操 作。禽 类 感 染 监 测 每 半 个 月 一 次，水 体 尾 蚴 监测 每 半 个 月 一 次，鱼 类 感 染 监 测 每 2 个 月 一 次。5.1 0 药 物 防 治 措 施D B 4 4 0 7/T 6 5 2 0 2 065.1 0.1 患 禽 按 体 重 内 服 阿 苯 达 唑（1 0 2 0）m g/k g，1 次/d，连 用 2 次。休 药 期 3 0 d。对 发 病 池 塘 全 池泼 洒 精 制 敌 百 虫 溶 液，具 体 操 作 参 考 5.7。5.1 0.2 上 述 方 法 治 疗 后 经 过 1 4 d，参 考 4.5 结 果 判 定，阴 性 为 治 愈，阳 性 为 未 治 愈。5.1 0.3 用 药 符 合 N Y/T 5 0 3 0 无 公 害 农 产 品 兽 药 使 用 准 则。6 病 害 动 物 和 病 害 动 物 产 品 处 理病 害 动 物 和 病 害 动 物 产 品 应 按 照 G B 1 6 5 4 8 病 害 动 物 和 病 害 动 物 产 品 生 物 安 全 处 理 规 程 进 行 处 理。D B 4 4 0 7/T 6 5 2 0 2 07A A附 录 A（资 料 性 附 录）引 物 序 列P r i m e r p a i r s f o r I T S:F 5-G T A A C A A G G T T T C C G T A G G T G A A-3,R 5-C C T G G T T A G T T T C T T T T C C T C C G C-3 I T S s e q u e n c e s i n G e n B a n k(M K 7 9 6 8 2 6 2 8)1 t t g t g t g c t a a t t g c a t g c a t a t g a a t t t a t a t a a a t g c g c c a c c g c c c t g g c g t a a t a c6 1 a t a t c c g t g a a t a c g g a a a t a t t t a a a t a c a c t t t t g t g t a t g g a a t t g a c g g a a t c t g g1 2 1 c c g t a c c t a t g g t g c g g t a c a g c c t a c c c g t a t c t g t t g c t c a t a t g g g c t t c g g t t c a t1 8 1 t t g t a g c a c a g t a c t a a g t a g g c t t a a t t g a c c g g g g a a c c t c a c t g t c a g a t g c t c t g a2 4 1 t g g t a t t c t t t t g a t t t t c g a a t c a t t t g t t t t g c c a g g a g c g a c a g a a a g t g c a t a g c t3 0 1 c t a g g g t t a t g t g c a a g g t t c a a t g a a g g g t g c a g a t t a t t a t c t g c a t t c t c c c c c c g g3 6 1 g c t g t t t c a c c c c g g t a g t a t t a t t c t g c c a t t t t t a c a t t g t t c a a g c a a t c t g a g t c a4 2 1 g t t a t t c t g g t t c g g a a a g c t g c c a t a a c a t g c a c c t g g t t g t t g a t c a a c t g g a c t g c a4 8 1 t g a a c g t t c g c c t g g c g g t g c t c t a t c c t g g g c t a g a a c g g t a a c c c t a g t t t c t g t g c a5 4 1 t t c g g g t a a c c g g g t g t a t a g a a c a t a c a a c t c t g a g c g g t g g a t c a c t c g g c t c g t g t g6 0 1 t c g a t g a a g a g t g c a g c c a a c t g t g t g a a t t a a t g t g a c c t g c a t a c t g c t t t g a a c a t c6 6 1 g a c c t c t t g a a c g c a t a t t g c g g c c g c a g g a t a t c c t g t g g c c a c g c c t g g c c g a g g g t c7 2 1 g g c t t a t a a t c t a t c a c g a c g c a c a a t a a g t c g t g g c t t g g a t g t g t g c c a g c t g g c g t g7 8 1 a t t t c c c g c t t a c t t a a a g t g g g g t g c c g g a t c t a t g g c t c c t t c c t a a t g t g t c c a g c t8 4 1 a c a c t c a a g t c c a a a g a t g a t a t t t g a t g g a c a g g g t t g t g g t g g t g g a g a a t g c t c g g g9 0 1 t c g t g g c t t a a t g a g a a t g t g a t a a a c g t t c a c g c c t g a t g t c a t t g t c t a t c a t t g c a c9 6 1 c c a t g t t c g g g c t t g t t c t g t a a c t g a t g a t t a t a t a t a a t aP r i m e r p a i r s f o r C O I:F 5-A T T C G(R)T T A A A T(Y)T K T G T G A-3,R 5-C C A A A C Y A A C A C M G A C A T-3 C O 1 s e q u e n c e s i n G e n B a n k(M K 8 0 1 7 1 1 1 7)1 t a t t a g g t g t g t g a g g c g g g t t c t t a g g t t t a t c t t t a a g t t t a c t t a t t c g a t t a a a t t6 1 t g t g t g a t c c g t a t t a t a a a t t g a t t t c t a c a g a g g t t t a t a a a t t t g t t a t t a c t a a t c1 2 1 a t g g t a t t g c t a t g a t a t t c t t t t t t t t a a t g c c a g t c t t a a t a g g c g g g t t t g g t a a t t1 8 1 a t t t a c t t c c t t t a c t t t t g g g t t t a g t t g a t t t g a a t t t a c c t c g g t t g a a a g c t t t a a2 4 1 g t g c a t g a t t a a t g t t g c c t t c t a t t g t c t g t t t a a g a t t g a g a a t g t a t c a t g g t g c c g3 0 1 g g a t a g g t t g a a c t t t t t a t c c c c c c t t a t c t g g t t t t g g t t a t t c g g g g g t a g g t a c t g3 6 1 a t t t t t t a a t g t t t g c t t t a c a t t t a g c a g g t g t t t c t a g g t t g t t a g g t t c a a t a a a t t4 2 1 t t a t t t g t a c t a t a a t g g g t c g t a t g g a t c a g t g g t t t a g a a t g c g t a t g t c g g t g a t a g4 8 1 t t t g g g c t t a t t t g t t t a c t t c t a t a t t a t t g g t a t t g t c t t t g c c t g t t t t a g c t g c t g5 4 1 c t a t a a c a a t g t t a t t a t t t g a t c g t a a a t t t a g a g c t_