ICS 67 X 04 DB13 河北省地方标准 DB 13/T 5189.10 2020 天然植物 提取物中 危害成分 检测 第10 部分：辣椒红 中赭曲霉 毒素 A 的测定 2020-06-28 发布 2020-07-28 实施 河 北 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB13/T 5189.10 2020 I 前 言 本标准 按照GB/T 1.1-2009 给出的 规则 起草。DB13/T 5189 天然 植物 提 取物中 危害 成分 的测 定 共分12 个部 分：第1 部 分：亚硝 酸盐 的测 定；第2 部 分：二氧 化硫 的测 定；第3 部 分：正己 烷、丙酮、乙酸 乙酯、甲 醇和 乙 醇5 种有 机溶 剂残 留的 测定；第4 部 分：辣椒 提取 物中 砷、铅、镉、铬、汞 的测 定；第5 部 分：万寿 菊提 取物 中对氧 基苯 胺的 测定；第6 部 分：万寿 菊提 取物 中乙氧 基喹 啉的 测定；第7 部 分：天然 番茄 红中 苯并 芘 的测 定；第8 部 分：辣椒 提取 物中 苏丹红 的测 定；第9 部 分：辣椒 提取 物中 叔丁基 对苯 二酚 的测 定；第10 部分：辣 椒红 中赭 曲 霉毒 素 A 的 测定；第11 部分：叶 黄素 中苯 的 测定；第12 部分：甜 菊糖 苷中 邻 苯二甲 酸酯 的测 定。本部分 为DB13/T 5189的 第10部分。本标准 由河 北省 市场 监督 管理局 提出 并归 口。本部分 起草 单位：晨 光生 物科技 集团 股份 有限 公司、河北 省食 品检 验研 究院、石家 庄海 关技 术 中心、清 河食 品药 品检 验所。本部分 主要 起草 人：高伟、张玉 芬、张岩、刘 登帅、韩艳 超、艾连 峰、栾乐 华。DB13/T 5189.10 2020 1 天 然植物 提取物中 危害成 分检测 第 10 部分：辣椒红 中赭曲 霉毒 素 A 的 测定 1 范围 本部分 规定 了辣 椒红 中赭 曲霉毒 素A 的高 效液 相色 谱-荧光 检测 器测 定方 法。本部分 适用 于辣 椒红 中赭 曲霉毒 素A 的测 定。2 规范性 引用 文件 下列文 件 对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 注日 期的版 本 适 用于 本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有修 改单）适 用于 本文件。GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法。3 原理 试样经 提取 液提 取、离心、过滤 后，用反 相高 效液 相色谱 分离，荧 光检 测器 检测，根据 色谱 峰 的保留时 间定 性，采用 单点 校正，外标 法定 量。4 试剂或 材料 警告：赭曲霉毒素 A 是一 种已知的强致癌物质，测 定时应特别注意安全 防护。除非另 有说 明，本方 法所 用试剂 均为 分析 纯，水为GB/T 6682 规 定的 一级 水。4.1 试剂 4.1.1 乙腈（C2H3N）：色谱 纯。4.1.2 甲醇（CH4O）：色谱 纯。4.1.3 冰醋酸（C2H4O2）。4.1.4 氯化钠（NaCl）。4.1.5 磷酸氢 二钾（K2HPO4）。4.1.6 磷酸二 氢钾（KH2PO4）。4.1.7 氯化钾（KCl）。4.1.8 浓盐酸（HCl）。4.2 试剂配 制 DB13/T 5189.10 2020 2 PBS 缓 冲溶 液：称 取7.9 g 氯化钠，1.8 g 磷酸 氢二 钾，0.24 g 磷酸 二氢 钾，0.2 g 氯 化钾，900 mL水溶解，然 后用 浓盐 酸调 节pH值至7.0，最后 用水 稀 释至1000 mL，保存 于4 备用，可使 用7 天。4.3 标准物 质 赭曲霉 毒素A：（C20H18ClNO6，CAS:303-47-9）：纯 度99%，或 具有 标准 物质 证书。4.4 标准溶 液配 制 4.4.1 赭曲霉 毒 素A 标 准储 备溶 液（1 mg/L）：取赭 曲霉 毒素 A 标准 物质 适量，用 甲醇 乙腈：1+1（体积 比）稀释 至浓 度 1 mg/L，摇匀，保 存于-20 备用，可 以保 存3 个月。4.4.2 赭曲霉 毒 素A 标 准工 作溶 液：根据 使用 需要，准确 吸 取一定 量的 赭曲 霉毒 素 A 储备液，用流 动相乙腈 水 冰 乙酸：495+495+10（体 积比）稀释，配成 10 g/L 的标 准工 作 液，4 保 存，可 使用7 天。5 仪器和 设备 5.1 高效液 相色 谱仪：配 有荧 光检测 器。5.2 高速均 质机。5.3 分析天 平：感量 为 0.1 mg 和0.01 mg。5.4 涡旋混 匀器。5.5 超声波 清洗 器。5.6 离心机。5.7 精密 pH 酸 度计。6 试验步 骤 6.1 样品液 制备 称取试 样1 g（精确 至0.1 mg）于50 mL 离 心管 中，加 入甲醇10 mL，超声10 min，涡旋2 min，离心5 min，转速5 000 r/min。取 上清 液5 mL置于50 mL 容量 瓶中，用PBS 溶 液定 容，混 匀，用玻 璃纤 维滤纸过 滤，滤液 过0.22 m 有机滤 膜，供液 相色 谱检 测。6.2 测定 6.2.1 色谱参 考条 件 色谱参 考条 件如 下：a)色谱柱：C18，250 mm4.6 mm，5 m，或 性能 相当 者；b)流动相：乙 腈 水 冰乙 酸：495+495+10（体 积比）等度 洗脱；c)柱温：40；d)激发波 长：333 nm；发射 波长：477 nm；e)流速：1.0 mL/min；DB13/T 5189.10 2020 3 f)进样量：10 L。6.2.2 测定 分别检 测标 准使 用溶 液和 制备的 样品 液，以保 留时 间定性，外 标法 定量，色 谱图见 附录A。6.2.3 空白试 验 除不加 试样 外，均按 上述 测定条 件和 步骤 进行。7 试验结 果 试样中 赭曲 霉毒 素A 含量 按 式（1）计 算。ssA c VXAM（1）式中：X 试样 中赭 曲霉 毒素A 的 含 量，单 位为 微克 每千 克（g/kg）；A 样液 中赭 曲霉 毒素A的 色 谱峰面 积；sc 标准 工作 液中 赭曲 霉毒 素A的 浓度，单 位为 微克 每 升（g/L）；V 样品 的最 终稀 释体 积，单位毫 升（mL）；sA 标准 工作 液中 赭曲 霉毒 素A的 色谱 峰面 积；M 试样 质量，单 位为 克（g）。计算结 果需 扣除 空白 值，计算结 果以 重复 性条 件下 获得的 两次 独立 测定 结果 的算术 平均 值表 示，保留三 位有 效数 字。8 精密度 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测试 结果 的绝 对差 值不得 超过 算术 平均 值的10%。9 检出限 和定 量限 检出限 为10.0 g/kg，定 量限为30.0 g/kg。DB13/T 5189.10 2020 4 A A 附 录 A（资料 性附 录）高效液 相色 谱图 A.1 赭曲霉 毒素A标 准溶 液色 谱 图，见 图A.1 所 示。数据 文件 名:STD-OTA4.lcd0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 mi n0.02.55.07.510.012.5mV检测 器A Ex:333n m,Em:477n m 图A.1 赭曲 霉毒 素A 标准 溶 液色谱 图 A.2 样品中 的赭 曲霉 毒素A检 测 色谱图，如 图A.2 所 示。数据 文件 名:Y1-0110-190409.lcd0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 mi n0.00.51.01.52.02.5mV检测 器A Ex:333n m,Em:477n m 图A.2 样品 中的 赭曲 霉毒 素A检 测色 谱图 _ 赭曲霉 毒 素 A 赭曲霉 毒 素 A