ICS 67 X 04 DB13 河北省地方标准 DB 13/T 5189.7 2020 天然植物 提取物中 危害成分 检测 第7 部分：天然番茄 红中苯并 芘的测 定 2020-06-28 发布 2020-07-28 实施 河 北 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB13/T 5189.7 2020 I 前 言 本标准 按照GB/T 1.1-2009 给出的 规则 起草。DB13/T 5189 天然 植物 提 取物中 危害 成分 的测 定 共分12 个部 分：第1 部 分：亚硝 酸盐 的测 定；第2 部 分：二氧 化硫 的测 定；第3 部 分：正己 烷、丙酮、乙酸 乙酯、甲 醇和 乙 醇5 种有 机溶 剂残 留的 测定；第4 部 分：辣椒 提取 物中 砷、铅、镉、铬、汞 的测 定；第5 部 分：万寿 菊提 取物 中对氧 基苯 胺的 测定；第6 部 分：万寿 菊提 取物 中乙氧 基喹 啉的 测定；第7 部 分：天然 番茄 红中 苯并 芘 的测 定；第8 部 分：辣椒 提取 物中 苏丹红 的测 定；第9 部 分：辣椒 提取 物中 叔丁基 对苯 二酚 的测 定；第10 部分：辣 椒红 中赭 曲 霉毒 素 A 的 测定；第11 部分：叶 黄素 中苯 的 测定；第12 部分：甜 菊糖 苷中 邻 苯二甲 酸酯 的测 定。本部分 为DB13/T 5189的 第7部分。本标准 由河 北省 市场 监督 管理局 提出 并归 口。本标准 起草 单位：晨 光生 物科技 集团 股份 有限 公司、河北 省食 品检 验研 究院、石家 庄海 关技 术 中心、清 河食 品药 品检 验所。本标准 主要 起草 人：连运 河、杨 清山、史 国华、吉 桂珍、程远 欣、艾连 峰、张凤霞。DB13/T 5189.7 2020 1 天 然植物 提取物中 危害成 分检测 第 7 部分：天然番 茄红中 苯并 芘的 测定 1 范围 本部分 规定 了天 然番 茄红 中苯并 芘的 高效 液相 色 谱-荧 光检 测器 测定 方法。本部分 适用 于天 然番 茄红 中苯并 芘的 测定。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 注日 期的版 本适 用于 本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB/T 6682 分析 实验 室用 水规格 和试 验方 法。3 原理 试样经 溶剂 提取、凝 胶渗 透色谱 净化 后，用反 相高 效液相 色谱 分离，荧 光检 测器检 测，根据 色 谱峰的保 留时 间定 性，外标 法定量。4 试剂或 材料 警告：苯并 芘是一种已知的强致癌物质，测 定时 应特别注意安全防护。除非另 有说 明，本方 法所 用试剂 均为 分析 纯，水为GB/T 6682 规 定的 一级 水。4.1 试剂 4.1.1 环己烷（C6H12）。4.1.2 乙酸乙 酯（C4H8O2）。4.1.3 乙腈（C2H3N）：色谱 纯。4.2 试剂配 制 环己烷 乙 酸乙 酯：1+1（体积比）：量取500 mL 环 己烷与500 mL 乙 酸乙 酯混 合均匀。4.3 标准品 苯并 芘：（C20H12，CAS:50-32-8）：纯 度99%，或具 有标 准物 质证 书。4.4 标准溶 液配 制 DB13/T 5189.7 2020 2 4.4.1 苯并 芘 标准 储备 溶液（1.0 mg/L）：称取 苯并 芘 标准 物质 适量（精 确 值 0.01 mg），用乙腈 稀释 至浓 度 为1.0 mg/L，4 避光 保存，有 效期 1 年。4.4.2 苯并 芘 标准 工作 溶液（10.0 g/L）：取 苯并 芘 准储 备溶 液（1.0 mg/L）1.00 mL，用乙腈 定容 至100 mL，4 避光 保存，有 效 期1 个 月。4.4.3 标准使 用溶 液配 制：准确 量取标 准储 备液（1.0 mg/L）0.1 mL、0.5 mL、1 mL、2 mL、5 mL至100 mL 容量 瓶中，用 乙 腈定容 至刻 度，充 分摇 匀，得到浓 度 为 1 g/L、5 g/L、10 g/L、20 g/L、50 g/mL 的系 列标 准使 用液，现配 现用。5 仪器和 设备 5.1 高效液 相色 谱仪：配 有荧 光检测 器。5.2 凝胶渗 透色 谱净 化系 统（GPC）。5.3 分析天 平：感量 为 0.1 mg 和0.01 mg。5.4 涡旋混 匀器。5.5 超声波 清洗 器。5.6 离心机。5.7 旋转蒸 发仪。6 试验步 骤 6.1 提取 称取样 品0.1 g（精确 至0.1 mg）于50 mL离 心管 中，加入环 己烷 乙 酸乙 酯混 合溶液25 mL，混 匀，超声提取10 min 后，离心5 min，转速5 000 r/min。上清液 过0.45 m有 机滤 膜 后作待 净化 液。6.2 净化 取待净 化液 于GPC 样 品管 中，进行GPC 净化，进 样量5 mL，收 集洗 脱液，于40 下旋转 蒸发 至干。残渣用2 mL 乙腈 超声 溶解，过0.45 m有 机滤 膜，供 液相色 谱检 测。凝胶渗 透色 谱净 化参 考条 件：a)凝胶渗 透色 谱净 化系 统；b)凝胶柱 规 格400 mm*25 mm（内径）；c)色谱柱 填 料Bio-Beads S-X3（38 75 m），30 g；d)流动相：环 己烷 乙 酸乙 酯：1+1（体积 比）；e)流速：5 mL/min；f)收集时 间：17 27 min（具体时 间以 实际 标样 为准）。6.3 测定 6.3.1 色谱参 考条 件 色谱参 考条 件如 下：DB13/T 5189.7 2020 3 a)色谱柱：C18，250 mm4.6 mm，5 m，或 性能 相当 者；b)流动相：乙 腈 水：88+12（体 积比），等度 洗脱；c)柱温：40 C；d)激发波 长：384 nm，发射 波长：406 nm；e)流速：1.0 mL/min；f)进样量：10 L。6.3.2 测定 分别检 测标 准使 用溶 液和 制备的 样品 液，以保 留时 间定性，外 标法 定量，色 谱图见 附录A。6.3.3 空白试 验 除不加 试样 外，均按 上述 测定条 件和 步骤 进行。7 试验结 果 试样中 苯并 芘含 量按 式（1）计算。ssA c VXAm（1）式中：X 试样 中苯 并芘 的含 量，单位 为微 克每 千克（g/kg）；A 样液 中苯 并芘 的色 谱 峰面积；sc 标准 工作 溶液 中苯 并 芘的浓 度，单位 为 微 克每 升（g/L）；V 样品的 最终 稀 释提 交，单位为 毫升（mL）；sA 标准 工作 溶 液 中苯 并 芘的色 谱峰 面积；m 试样 质量，单 位为 克（g）。计算结 果需 扣除 空白 值，计算结 果以 重复 性条 件下 获得的 两次 独 立 测定 结果 的算术 平均 值表 示，保留三 位有 效数 字。8 精密度 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测试 结果 的绝 对差 值不得 超过 算术 平均 值的10%。9 检出限 和定 量限 检出限 为10.0 g/kg，定 量限为35.0 g/kg。DB13/T 5189.7 2020 4 A A 附 录 A（资料 性附 录）高效液 相色 谱图 苯并芘 标准 溶液 色谱 图，如图A.1 所示。数 据 文 件 名:std-甜味2.lcd样品ID:std0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 min050100150200250mV检 测 器A Ex:384nm,Em:406nm 图A.1 苯并 芘标 准溶 液色谱 图 样品中 的苯并芘 检测 色 谱图，如图A.2 所示。数 据 文 件 名:YL3-0133-180628C.lcd样品ID:std01 10.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 min0255075100125150175mV检 测 器A Ex:384nm,Em:406nm 图A.2 样品 中的 苯并 芘色谱 图 _ 苯并 芘 苯并 芘