ICS 65.020.01 B 05 DB37 山东省 地 方 标 准 DB37/T 3852 2019 银杏培育 指南 组 培育苗 Guidebook for Ginkgo biloba cultivation Tissue culture for seedlings 2019-12-31 发布 2020-01-31 实施 山 东 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB37/T 3852 2019 I 前 言 本标准 按照GB/T 1.1 2009 给出 的规 则起 草。本标准 由山 东省 自然 资源 厅提出 并组 织实 施。本标准 由山 东省 林业 标准 化技术 委员 会归 口。本标准 起草 单位：山 东农 业大学、山 东省 林木 种质 资源中 心。本标准 主要 起草 人：孙 霞、邢 世岩、单超、鲁仪 增、孙立民、门晓 妍、张 谦、曹钟允、许楠、李影、董遥、倪召 欣。DB37/T 3852 2019 1 银 杏培育 指南 组 培育苗 1 范围 本标准 规定 了银 杏组 培育 苗的外 植体 采集 和消 毒、培养基 配制 与保 存、接种、瓶苗 培养、炼 苗 与 移栽、质 量标 准、商品 苗包 装、运 输和 档案 管理 等技 术要求。本标准 适用 于银 杏的 组培 育苗。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 所注 日期的 版本 适用 于 本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB/T 6001 育 苗技 术规 程 LY/T 1882 林 木组 织培 养 育苗技 术规 程 3 外植体 采集 和消 毒 3.1 外植体 采集 外植体 主要 包括 茎尖、茎 段和胚。选 取1 2年 生生 长健 壮、具 有品 种典 型性 状的优 良单 株，取 幼 苗外围当 年生 幼嫩 枝条，采 集时间 在3 4月；胚取 当 年种仁，种子 采集 时间 为10 月上 中旬，沙藏 贮存70 d 90 d。种核 除去 外种 皮、中种皮 和内 种皮，分 离出 种胚。3.2 外植体 消毒 3.2.1 茎尖和 茎段 茎尖和 茎段 剪去 叶片，用 肥皂水 擦洗，然 后用 自来 水冲洗 干净，无 菌操 作台 下依次 用70%酒精消毒30 s，含有 吐温20的0.1%氯化汞 消毒8 min 10 min，无菌 水冲 洗3 5次，然 后用无 菌滤 纸吸 去茎 尖和茎段表 面的 水分。3.2.2 种胚 种胚先 用肥 皂水 擦洗，然 后用自 来水 冲洗 干净，无 菌操作 台下 依次 用70%酒 精消毒30 s，含 有 吐 温20的0.1%氯化 汞消 毒6 min 8 min，无菌 水冲 洗3 5 次，然后 用无 菌滤 纸吸 去 种胚表 面的 水分。3.3 外植体 制备 3.3.1 茎尖和 茎段 在无菌 环境 下，剪取0.5 cm 1.0 cm 长的 茎尖 或1 cm2 cm 长的 茎段，每 段留1 2个 腋芽 或顶 芽，转入已 消毒 的培 养皿 中备 用。3.3.2 胚 DB37/T 3852 2019 2 将已消 毒的 种胚，转 入培 养皿中 备用。4 培养基 配制 与保 存 培养基 的配 制与 保存 执行LY/T 1882 标 准。5 接种 在无菌 状态 下，将 培养 皿 中的外 植体 用镊 子直 插式 接种于 培养 瓶中，每瓶 接 种23 个。封 口膜 要及时捆绑，并 将品 种代 号、培养基 类型、个 人编 号以 及接种 日期 标示 在瓶 上。6 瓶苗培 养 6.1 初代培 养 茎段外植 体的 初代培 养使 用芽诱导 培养 基，配 方为MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 1.5 mg/L+0.20%AC；胚外植 体的 初代 培养 使用MS 培养 基，pH 5.8 6.0。培养温 度为25 2，置于1 500 lx 2 000 lx的光照 条件 下培 养10 d15 d，光照8 h/d 12 h/d。6.2 增殖培 养 外植体 增殖35 倍后，剪 成1.0 cm 2.0 cm 带芽 小段，转入新 的增 殖培 养基 中。培 养基配 方为MS+NAA 0.10.5 mg/L+6-BA 0.1 2.0 mg/L+0.25%AC。培养条 件同 初代 培养。增 殖周期 为30 d45 d。6.3 复壮 继代培 养8 10 代后 进行 复 壮。6.4 生根培 养 选择生 长健 壮、叶色 正常，高3 cm 5 cm 的嫩 茎接 种 于生根 培养 基中，培 养基 配方为1/2MS+IBA 0.5 mg/L。培养 条件 同初 代培 养。7 炼苗与 移栽 7.1 瓶苗炼 苗 选取有 活力，生 长健 壮，叶色正 常，根数 5条，根 长0.8 cm 的组 培苗，温 室自然 光闭 口炼 苗2 3周，开口 炼苗5 d9 d，温度保 持25 3。7.2 出瓶驯 化 洗净组 培苗 残 留 的培 养基，移 栽到 无纺 布容 器中 驯 化。栽培 基质 采用 细河 沙+珍珠岩+草 炭土，其体积比为1:1:2，使 用前12 h 24 h 用0.5%0.7%的 高锰酸 钾消毒。驯 化期间 保持温 度20 30，空气湿 度70%80%，光 照强烈 时可使 用遮 光度60%70%的遮 阳网遮 阳。小 苗长出 新叶后，每7 d10 d喷 施叶 面肥 一次。7.3 移栽 DB37/T 3852 2019 3 经过25 d30 d 驯化 即可 移栽至 大田。7.4 苗期管 理 执行GB/T 6001 标准。8 质量标 准 8.1 组培苗 质量 标准 苗木粗 壮、挺 直、有活力，具原 品种特 性。苗高3 cm 5 cm，叶 片3 片，大 小协调、有层 次感、色泽正 常。根3 5条，根 长适中，长 势好。同 一批 次达标 的组 培苗 在90%以 上，且 培养 基无 污染。8.2 移栽苗 的质 量标 准 苗木健 壮、挺拔，形 态完 整，具 原品 种特 性。苗高5 cm 10 cm，地 径0.2 cm。叶片 6 片，大小协调，色泽 正常。根 系完 整、发 达。同一 批次 达标 的组培 苗在90%以上，无 检疫性 病虫 害。9 包装、运输 9.1 包装 瓶苗保 留在 培养 瓶中，出 瓶苗洗 去琼 脂后 装入 塑料 小盒，移栽 苗统 一泡 沫箱 包装。可再 加 外 包 装。9.2 运输 琼脂苗 应使 用纸 托盘 运输。装车 时切 勿倒 置。用有 蓬车辆 运输，高 温和 严寒 季节选 用 冷 藏车。运 输途中温 度保 持8 15，72 h 内到 达目 的地。移 栽苗路 途时 间不 能超 过48 h。10 档案管 理 参照GB/T 6001 执行。_