ICS 6 5.0 20.20 B 31 DB45 广西壮族自治区地方标准 DB 45/T 17682018 慈姑组培苗生产技术规程 Technical specification for tissue culture see dling of Sagittaria sagittifolia L.2018-05-10 发布 2018-06-10 实施广西壮族自治区质量技术监督局 发布 DB 45/T 1 76 8 20 18 I 目 次 前 言.II 1 范围.1 2 规范性引 用文件.1 3 术语和定 义.1 4 生产设备 和灭菌.1 5 生产工艺 流程.1 6 生产操作.2 7 组培苗质 量要求.3 8 生产记录 及档案建立.4 附录 A（资料 性附录）培养基及培养条件.5 DB 45/T 1 76 8 20 18 II DB 45/T 1 76 8 20 18 III 前 言 本标准按照G B/T 1.12 0 09给出的规 则起草。本标准由广西壮族自治区农业科学院提出。本标准起草单位：广西农业科学院生物技术研究所。本标准主要起草人：高美萍、江文、韦绍龙、颜梅新、张尚文、何芳练、董伟清、蒋慧萍、黄诗 宇、张驰、王艳、陈丽娟、蔡炳华、闭志强。DB 45/T 1 76 8 20 18 1 慈姑组培苗生产技术规程 1 范围 本标准规定了慈姑（S agi tt ar ia s agi tt if ol ia L.）组培苗生 产的术语和定义、生产设备和灭菌、生产工艺流程、生产操作、组培苗变异筛选及控制、组培苗质量要求、生产记录及档案建立等技术要求。本标准适用于广西境内慈姑组培苗的生产。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T 2 30 6 花卉种苗组培快繁技术规程 DB 45/T 1 65 5 芋头组培 苗生产技术规程 3 术语和定义 DB 45/T 1 65 5 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1 慈姑 sagi t tari a sagi t ti fo li a L.又称茨菰、剪刀草、燕尾草。具异形叶性,以 膨大地下球茎作蔬菜食用的泽泻科慈姑属宿根性水生 草本作物。4 生产设备和灭菌 按NY/T 2 30 6 的规定执行。5 生产工艺流程 生产工艺流程见图1。DB 45/T 1 76 8 20 18 2 培养基的 配置、保存与分装 外植体选择 采集与处理 接种 初代培养 继代培养 生根培养 炼苗 出圃 图1 组培苗生产工艺流程图 6 生产操作 6.1 培养基 6.1.1 母液的配制与保存 按DB 45/T 1 6 55的规定执 行。6.1.2 分装 加热溶解后趁热按每瓶（袋）33 mL 40 mL的量 分装至25 0 m L 的培养瓶（或 10 0 mm 120 mm 聚丙烯 培 养袋）中并封好 瓶（袋装 消毒盒）盖，经 121 20 m in 高 压蒸汽消毒,于 室温凝固，即 用，或 存 放 3 d 5 d。存 放 后 的培养基，使 用前，应 检查 有 无污染，不 得使 用有 污染 的培养基。6.2 外植体采集与处理 6.2.1 采集 宜 选用 品 种 纯正、遗传 性 状稳 定、优 质高产的 无污染母 本 园或母株。切取 生 长健 壮、无病虫害 的球 茎的 顶芽或匍匐 茎茎 尖 生 长点 作 为 外植体。6.2.2 灭菌 6.2.2.1 预处理 将 采集的球茎 顶芽或匍匐 茎茎 尖放入 加 有 0.2 0.5 洗衣粉温 水 中浸泡 30 m in，用自 来 水 冲洗23 遍，剪 取 所 需幼芽 茎 段（2 c m 3 c m），置于 接种 室中晾 5 m in 1 0 m in。DB 45/T 1 76 8 20 18 3 6.2.2.2 球茎顶芽灭菌 在超净台上，将经预处理的慈姑球茎顶芽截取直径3 m m5 mm，长 10 mm 20 mm茎尖 段放入烧杯中，倒入75的 酒精浸没，轻轻摇晃1 m in，倒出酒精，用 无菌水冲洗外植体2 3遍。再用0.1的升汞 消 毒 10 min 1 5 m in或 2次氯 酸钠浸泡10 m in1 5 min，然后用无菌水冲洗35 遍后，沥干封存于经灭菌的 培养瓶内供接种用。6.2.2.3 匍匐茎茎尖灭菌 在超净台上，将经预处理的慈姑匍匐茎截取直径3 m m5 mm，长5 m m1 0 mm茎段尖放 入烧杯中，倒 入75的酒 精浸没，轻轻摇晃10 s3 0 s，倒出酒精，用 无菌水冲洗外植体35遍。再用0.1的 升汞消 毒8 m in1 0 min或2次 氯酸钠浸泡8 min 1 0 m in，然后用无菌水冲洗3 5遍后，沥干 封存于经灭菌的 培养瓶内供接种用。6.3 接种和增殖培养 6.3.1 初代培养（萌发培养）在无菌垫纸（或铝片）上切取经消毒处理的3 m m5 m m的外植体，接种在初代培养基上（参照附录A），培养7 d1 0 d后，选择无 污染且已萌芽的外植体再进行继代培养。6.3.2 继代培养 将经初代培养所得外植体分切成带有23个芽 点的小块，转接到继代培养基上（参照附录A）。28 d 为一个继代周期，继代次数宜控制在10代以内，增值系数宜控制在2.0 5.0以内。6.4 生根和炼苗 6.4.1 生根培养 将继代苗接种在生根培养基上（参照附录A），培养10 d1 5 d，苗高5 cm 8 c m，茎粗 壮，根系发 达，即可转移到炼苗大棚培养。6.4.2 炼苗 将组培苗转移到自然散射光下，常温（15 35）的大棚，炼苗20 d3 0 d后,及时淘 汰 具有：植株失绿、叶 片畸形扭曲、分 蘖叶片细弱，呈丛生状、匍匐茎明显过长，植 株矮小、生 根 数少等症状的 变异株，即可出圃种植。7 组培苗质量要求 组培苗无污染，植株生长形态正常无变异，质量应符合表1 的要求。表1 组培苗质量要求 指标名称 指标值 株高(cm)8.0 茎粗（cm）0.3 单株叶片数 3 生根数(条)5 DB 45/T 1 76 8 20 18 4 表 1 组培苗 质量要求（续）指标名称 指标值 根长（cm）3.0 植株叶色 浅绿色浓绿 变异率（）3.0 8 生产记录及档案建立 应建立生产记录档案，生产记录 宜 包括：母液 配制及培养基配制记录、培养基高 压蒸汽 灭菌工作记 录、员 工接种工作记录、组培 材 料继代和生根 入 出 库 记录、品 种 材 料生产档案和产 品销售 记录。DB 45/T 1 76 8 20 18 5 A A 附 录 A（资料性附录）培养基及培养条件 各类培养基及培养条件见下表A.1。表A.1 培养基及培养条件 培养基名称 成分 培养条件 初代培养基 1/2MS6-BA0.5 mg/L1.0 mg/LNAA 0.01 mg/L 0.05 mg/L蔗 糖30 g/L 温度（262），光照1 500 Lx2 000 Lx，光照 16 h 继代培养基 MS6-BA2.0 mg/L3.5 mg/L NAA0.1 mg/L0.5 mg/L蔗糖30 g/L 温度（262），光照1 500 Lx3 000 Lx，光照 12 h 生根培养基 MS6-BA0.5 mg/L1.0 mg/L NAA 0.5 mg/L 1.0 mg/L蔗糖30 g/L 温度（282），光照1 500 Lx2 000 Lx，光照 8 h B _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 中华人民共和国广西地方标准 慈姑组培苗生产技术规程 DB45/T 1768 2018 广西壮族自治区质量技术监督局统一印刷 版权专有 侵权必究