ICS 65.020.40 B61 DB51 四川省 地 方 标 准 DB 51/T 2632 2019 贝莱斯芽 孢杆菌对 核桃炭疽 病防控技 术规程 2019-12-17 发布 2020-01-01 实施 四 川 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB51/T 26322019I DB51/T 26322019II 目 次 前言.III 1 范围.1 2 规 范性 引用 文件.1 3 术语 和定 义.1 4 生物 防控 原则.2 5 贝莱 斯芽 孢杆 菌液 体制 剂制备 方法.3 6 贝莱 斯 芽 孢杆 菌制 剂剂 型、有 效含 量及 保存 方法.3 7 防控 技术.3 8 注意 事项.3 附录A（资 料性 附录）贝莱斯 芽孢 杆菌（Bacillus velezensis）对 核桃 炭 疽病的 防效.5 DB51/T 26322019III 前 言 本标准 按GB/T1.1-2009 标准化 工作 导则 第1 部分：标准 的结 构和 编写 的 规则起 草。本标准 由四 川省 林业 和草 原局提 出并 归口。本标准 由四 川省 市场 监督 管理局 批准。本标准 主要 起草 单位：西 华师范 大学 四 川省 林业 科 学研究 院 四川 农业 大学 会理县 林业 和草 原局 本标准 主要 起草 人：杨莉 李丕军 朱 天辉 邢文 曦 李 正武DB51/T 263220191 贝 莱斯芽 孢杆菌对 核桃炭 疽病防控 技术规 程 1 范围 本标准 规定 了贝 莱斯 芽孢 杆菌（Bacillus velezensis）制剂防 治核 桃炭 疽病（walnut anthracnose）的一般原 则和 技术 要求。本标准 适用 于四 川省 核桃 炭疽病 的生 物防 治。2 规范 性引 用文 件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 所注 日期的 版本 适用 于 本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB 6682 分 析实 验室 用水 规格和 实验 方法 GB 20287-2006 农 用微 生 物菌剂 NY/T 1114-2006 微生 物肥 料实验 用培 养基 技术 条件 3 术 语和 定义 下列术 语 和 定义 适用 于本 标准。3.1 核桃炭 疽病 walnut anthracnose 核桃最 重要 的病 害之 一，主要危 害核 桃果 实，产生 黑褐色 稍凹 陷、圆形 或不 规则形 病斑，严 重 时 使全果腐烂，干缩 脱落。3.2 核桃炭 疽病 病菌 Colletotrichum gloeosporioides 核桃炭 疽病 病菌 学名 为 Colletotrichum gloeosporioides。隶属 半知 菌亚 门（Deuteromycotina），腔 孢纲（Coelomycetes），炭疽菌属（Colletotrichum）。该 真菌分 布广、寄 主多，常 危害植 物叶、花、果、茎及嫩枝，造 成叶 斑、叶枯、花腐、果 腐、枝枯 等症 状，影 响植 物生 长发 育。该真菌 感染 核桃，主 要 引 起核桃果 实发 生炭 疽病，使 核桃果 实发 生腐 烂，导致 提前落 果。3.3 DB51/T 263220192 贝莱斯 芽孢 杆菌 Bacillus velezensis 隶属厚 壁菌 门（Firmicutes），芽 孢杆 菌纲（Bacilli），芽孢 杆菌目（Bacillales），芽 孢杆 菌科（Bacillaceae），芽孢杆 菌属（Bacillus）细 菌。该 菌株 由四 川省 林业 科学研 究院 森林 病虫 害防 治研究 所分 离获 得。3.4 植物病 害生 物防 治 Biocontrol of plant diseases 指利用 有益 微生 物和 生物 代谢产 物对 植物 病害 进行 有效防 范和 治疗。3.5 一级斜 面种 子 Primary bevel seed culture 处于休 眠状 态的 菌种，经 过斜面 活化 后，成长 为能 够迅速 生长 为合 格菌 体的 菌种。3.6 二级液 体种 子 Secondary liquid seed culture 一级斜 面种 子接 入到 有培 养液的 三角 瓶中，经 培养 得到大 量菌 体。3.7 液体发 酵 Liquid fermentation 把二级 液体 种子 接入 到有 培养液 的体 积较 大的 三角 瓶中进 行发 酵。3.8 发病率 Incidence 发病林 地、植株 和器 官等 发病的 百分 率，发病 率=病 株数/总 株数100%。3.9 病情指 数 Disease index 全面考虑 发病率 与严重 度 的 综合指 标，病 情指 数=100（各病 级果实 数 各级 代表值）/(调 查总果实数 最 高级 代表 值)。3.10 防治效 果 Control effect 防治效 果=（对照 病情 指数-处理病情指 数）/对照 病 情指数100%。4 生物 防控 原则 DB51/T 263220193 应遵循“预 防为 主，防治 结合”的原 则。减少 因施 用化学 农药 而造 成病 原菌 抗药性 的增 强，以 及 给人们的 身体 健康 和生 态环 境带来 严重 伤害。5 贝莱 斯芽 孢杆 菌液 体制 剂制备 方法 5.1 一 级斜 面种 子制 备 按常规 方法 制作 牛肉 膏蛋 白胨斜 面培 养基，接 种贝 莱斯芽 孢杆 菌后 培养 成一 级斜面 种子。5.2 二 级液 体种 子制 备 采用营 养肉 质培 养液 经高 压灭菌 后，按100 mL 液体盛于300 mL 三角瓶比例（通氧控 制）装瓶，在无菌状 态接 种上 述一 级斜 面种子，每 瓶接 种2 支斜 面 种子培 养成 贝莱 斯芽 孢杆 菌二级 液体 种子。5.3 液 体发 酵 采用营 养肉 质培 养液 经高 压灭菌 后，按 200 mL 液 体盛 于 500 mL 三角瓶比 例（通 氧控 制）装 瓶，在无菌 状态 接种 上述 二级 液体种 子，接种 量 10%(体积比)，30，180 r/min 培养成 贝莱 斯芽 孢杆 菌 液体制剂。6 贝莱 斯芽 孢杆 菌制 剂剂 型、有 效含 量及 保存 方法 贝莱斯 芽孢 杆菌 制剂 剂型 为悬浮 剂；有效 成份 为 芽 孢，含 量 为 1109 cfu/mL。瓶装制 剂贮 存于 阴凉、干 燥处，室温 保存 半年 或低 温（4）1 年半 不 影响 治 疗效果。7 防控 技术 7.1 防 治时 间及 频率 核桃炭 疽病以 预防 为主。在桃树 开花后 第三 周开始 施药，每隔15 天喷 施一次，共7 次。防 治效 果 见附录A。7.2 防 治方 法 使用背 负式 电动 喷雾 器，确保药 液均 匀覆 盖全 株果 叶，喷液 量以 均匀 喷湿 叶 片正反 面、核 桃果 实表面、有 药液 下滴 为度。结 果资料 可参 考附 录A。8 注意 事项 不能与 链霉 素等 抗生 素混 用。不可与 碱性 的农 药等 物质 混合使 用。使用本 品时 应穿 戴防 护服 和手套，避免 吸入 药液。施 药期间 不能 吃东 西和 饮水；施 药后 应及 时洗 手和洗脸。避免孕 妇和 哺乳 期妇 女接 触。DB51/T 263220194 禁止在 河塘 等水 域内 清洗 施药用 具。防止 药液 污染 水源地。属生物 类农 药，注意 防晒、防霉、防 腐，不得 与食 品和日 用品 一起 运输 和贮 存。应选择 阴天 或午 后使 用，若药后 下雨 应在 雨停 后再 次喷施 或涂 抹，按照 实际 病害严 重度 选择 浓 度 及用量。DB51/T 263220195 A A 附 录 A（资料 性附 录）贝莱斯 芽孢 杆菌（Bacillus velezensis）对核 桃炭 疽病的 防效 制剂浓度（活体与代谢物混合剂）发病率%病情指数 防治效果%稀释1000 倍 24 28.38 71.62 稀释800 倍 11 20.24 79.76 稀释600 倍 9 18.68 81.32 稀释400倍 7 13.45 86.55 稀释200 倍 5 10.55 89.45 未处理 38 51.60 _