ICS 65.020.20 B 04 DB12 天津市 地 方 标 准 DB12/T 884 2019 百合鳞茎 中多糖的 含量测定 紫外/可见 分光光度法 Determination of polysaccharide in Lily Bulbus-UV/VIS spectrophotometry 2019-03-15 发布 2019-05-01 实施 天 津 市 市 场 监 督 管理 委 员 会 发布 DB12/T 884 2019 I 前 言 本标准 依据GB/T1.1-2009 给出的 规则 起草。本标准 由天 津市 农业 科学 院提出 并归 口。本标准 起草 单位：天 津市 农业质 量标 准与 检测 技术 研究所。本标准 主要 起草 人：刘征 辉、魏 静娜、赵 琳琳、张强、赵 云平、薛 天凯、徐 石勇、郑贵 忠。DB12/T 884 2019 1 百 合鳞茎 中多糖的 含量测 定 紫外/可见 分光光 度法 1 范围 本标准 规定了 紫外/可见 分 光光度 法测定 百合 鳞茎中 多糖含 量的 原 理、试剂材 料、仪 器设备、分 析步骤、分析 结果 表述 和精 密度。本标准 适用 于百 合鳞 茎干 品及鲜 品中 多 糖 含量 的测 定。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日 期的引 用文 件，仅注 日期 的 版本适 用于 本文 件。凡是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有 的修改 单）适用 于本 文件。GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法。3 原理 百合样 品经 水回 流提 取后 得到的 水提 液，加 乙醇 沉 淀得百 合多 糖，百 合多 糖 加水溶 解后，用蒽 酮硫酸法在585 nm 波 长处 测定 吸光度，用 葡萄 糖做 标准 品，外 标法 定量。4 试剂和 材料 4.1 试剂 4.1.1 乙醇（C2H5OH）。4.1.2 蒽酮（C14H10O）。4.1.3 浓硫酸（H2SO4）：浓度 95%98%（g/g）。4.1.4 水（H2O）：GB/T 6682 规 定的一 级水。注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯 4.2 试剂配 制 蒽酮硫 酸溶 液（0.2%）：称取蒽 酮0.20 g，加100 mL 浓硫 酸溶 解，摇匀，即 得。现用 现配。4.3 标准品 葡萄糖 标准 品（C6H12O）：纯度98%，或经 国家 认 证并授 予标 准物 质证 书的 标准物 质。4.4 标准溶 液配 制 4.4.1 葡萄糖 标准 储备 液（1 mg/mL）：取 干燥 至恒 重的 葡 萄糖对 照 品50 mg，精密 称 定，用 水溶 解并定容 至50 mL，摇匀，即 得，4 以 下保 存。DB12/T 884 2019 2 4.4.2 葡萄糖标 准系 列工 作溶 液：精密 量取 葡萄 糖标 准储 备液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，分别置50 mL 容量 瓶中，用 水 定容，摇匀，得 浓度 为20 g/mL、40 g/mL、60 g/mL、80 g/mL、100 g/mL的标准 系列 工作 溶液。5 仪器和 设备 5.1 粉碎机。5.2 天平：感 量0.001 g 和0.0001 g。5.3 圆底烧 瓶：250 mL。5.4 水浴锅。5.5 具塞塑 料离 心管：聚 丙烯，10 mL。5.6 容量瓶：10 mL、50 mL。5.7 具塞比 色管 或刻 度试 管：10 mL。5.8 紫外/可见 分光 光度 计：配 有 1 cm 的 玻璃 或石 英比 色 杯。5.9 涡旋混 合仪。5.10 离心机：转 速6000 r/min。5.11 试验筛：40 目。6 分析步 骤 6.1 样品制 备 6.1.1 干品 采样量 要求大 于500 g，经 粉碎机 充分粉 碎均 匀，过40 目筛，均分 成两份，分 别 装入洁 净容器 内作为试样，密 封并 标明 标记，于0 4 下 冷藏 保存。6.1.2 鲜品 采样量 要求 大于500 g，于 真空干 燥箱 中50 烘干 后，按照 干品 处理 方法6.1.1 处理。6.2 样品提 取 取样品 粉末约1 g，精密 称 定，置250 mL 圆底 烧瓶中，精密 加入100 mL 水，称 定重量，水浴 加热 回流2 h，放冷，再 称定 重量，加水 补足 减失 的重 量，离心（6000 r/min，10 min），精 密吸 取上 清液1.5 mL，加 入乙醇7.5 mL，摇 匀，置4 冰 箱中 放置3 h，离心（6000 r/min，10 min），倾去 上清液，沉淀加热 水溶 解，并转 移至50 mL 容 量瓶 中，加水 稀释 至刻度，摇 匀，即得。6.3 测定 准确吸 取 样 品提 取 液 及标 准系列 工作 溶液 各1 mL，置10 mL 具塞 试管 中，分别 准确加 入0.2%蒽 酮硫酸溶液（4.2）4 mL，于涡 旋仪上 混匀，置 沸水 浴中 加热10 min，取出，冰 浴 中冷却5 min，取 出，以相应的试 剂为 空白，在585 nm 波长 处测 定吸 光度。以吸光 度为 纵坐 标，标准 系 列 工作 溶液 浓度 为横 坐标，绘制标 准曲 线，其线 性相 关 系数应 大于0.99，待测样 液的 响应 值应 在标 准曲线 线性 范围 内。7 分析结 果表述 DB12/T 884 2019 3 试样中 百合 多糖 的含 量按 式（1）计 算：1001000000523 1 m VV V cX.(1)式中：X 试样 中百 合多 糖的 含 量，单 位为 克每 一百 克（g/100g）；c 由标 准曲 线得 到的 待 测样液 显色 后的 浓度，单 位为微 克每 毫升（g/mL）；5 显色 后的 总体 积，单 位为毫 升（mL）；V3 乙醇 沉淀 后所 得百 合多糖 的溶 解体 积，单位 为毫升（mL）；V1 提取 用水 的体 积，单位为 毫升（mL）)；V2 用于 沉淀 多糖 的提 取液体 积，单位 为毫 升（mL）；m 样品 重量（减 去水 分 之后的 干燥 品重 量），单 位为克（g）；1000000 换 算系 数。计算结 果保 留三 位有 效数 字。8 精密度 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的绝 对差 值不得 超过 算术 平均 值的10%。_