ICS 11.220 B 41 DB37 山东省 地 方 标 准 DB37/T 4003 2020 中 和 试 验 和ELISA 试 验 比 对 实 验 室 评 价 标 准 2020-06-08 发布 2020-07-08 实施 山 东 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB37/T 4003 2020 I 前 言 本标准 按照GB/T 1.1 2009 给出 的规 则起 草。本标准 由青 岛海 关提 出、归口并 组织 实施。本标准 起草 单位：青 岛海 关技术 中心。本标准 主要 起草 人：郑小 龙、王 群、姜帆、徐 彪、朱来华。DB37/T 4003 2020 1 中 和试验 和 ELISA 试 验比对 实验室 评价标 准 1 范围 本标准 规定 了中 和试 验和ELISA 试 验比 对实 验室 评价 工作应 遵循 的基 本技 术要 求。本标准 适用 于动 物检 疫、兽医实 验室 以ELISA 试验 替 代中和 试验 进行 抗体 滴度 的测定。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 所注 日期的 版本 适用 于 本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。OIE 陆生 动物 诊断 试验 与 疫苗手 册 3 试剂 3.1 培养液：根 据不 同细 胞选 择适合 的培 养液。3.2 胎牛血 清。3.3 标准毒 株、阳性 血清、阴 性血清。3.4 敏感细 胞系：根 据不 同病 毒选择 适合 的细 胞。3.5 青霉素。3.6 链霉素。3.7 ELISA 试剂 盒。4 器材和 设备 4.1 96 孔 细胞 培养 板。4.2 二氧化 碳培 养箱。4.3 普通冰 箱和 超低 温冰 箱。4.4 可调移 液器。4.5 细胞培 养瓶。4.6 酶标仪。4.7 洗板机。5 评价总 则 5.1 应在最 佳条 件下 进行 比对 试验，即在 同一 实验 室，由同一 批检 测人 员严 格按 照标准 方法 和试 剂盒操作要 求进 行评 价。5.2 对已知 阳性 血清 同时 用中 和试验 和 ELISA 试验 进行 检测，对检 测结 果进 行比 对，确 定不 同抗 体滴度对应 的ELISA 数值 范围。DB37/T 4003 2020 2 6 实验室 评价 6.1 取已知 阳性 血清 样品 进行 中和试 验，测定 其抗 体滴 度。具 体操 作按 照OIE 陆生动 物诊 断试 验与疫苗手 册 进行。6.2 对已知 阳性 血清 进行 稀释，以获 得抗 体滴 度分 别 为1:2，1:4，1:8，1:16，1:32，1:64 的 血清样品。6.3 将每个 滴度 的已 知阳 性血 清样品 按 照ELISA 试 剂盒 说明书 进行 检测，测 定 其 OD 值，并根 据说 明 书计算最 终数 值。6.4 将已知 阳性 血清 的抗 体滴 度与 ELISA 结果 进行 比对，确定 各滴 度的 已知 阳性 血清对 应 的 ELISA 数值的范 围，并标 定阳 性对 照血清 的抗 体滴 度。6.5 根据ELISA 阳性 对照 血清 的数值 及每 个滴 度 间 ELISA 数值 的波 动范 围，调整 每次试 验抗 体滴 度所对应 的ELISA 数 值范 围，以确定 未知 样品 抗体 滴度。_