ICS 65.020.20 B 04 DB12 天津市 地 方 标 准 DB12/T 885 2019 植物提取 物中原花 青素的测 定 紫外/可见分光光度 法 Determination of polysaccharide in Lily Bulbus-UV/VIS spectrophotometry 2019-03-25 发布 2019-05-01 实施 天 津 市 市 场 监 督 管理 委 员 会 发布 DB12/T 885 2019 I 前 言 本标准 依据GB/T1.1-2009 给出的 规则 起草。本标准 由天 津市 农业 科学 院提出 并归 口。本标准 起草 单位：天 津市 农业质 量标 准与 检测 技术 研究所。本标准 主要 起草 人：刘征 辉、赵 琳琳、魏 静娜、张强、赵 云平、薛 天凯、徐 石勇、郑贵 忠。DB12/T 885 2019 1 植 物提取 物中原花 青素的 测定 紫外/可 见分光 光度法 1 范围 本标准规定了采用 紫外/可见分光光度法测定 植物提取物中 原花青素含 量 的原理、试剂材料、仪器设备、分析 步骤、分 析结 果表述 和精 密度。本标准 适用 于植 物提 取 物 中原花 青素 的测 定。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日 期的引 用文 件，仅注 日期 的 版本适 用于 本文 件。凡是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有 的修改 单）适用 于本 文件。GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法。3 原理 原花青 素本 身无 色，但 经 过用热 酸处 理后，可以 生 成深红 色的 花青 素离 子，用分光 光度 法测 定原 花青素在 水解 过程 中生 成的 花青素 离子，计 算试 样中 原花青 素含 量。4 试剂和 材料 4.1 试剂 4.1.1 甲醇（CH3OH）。4.1.2 正丁醇(CH3(CH2)2CH2OH)。4.1.3 盐酸(HCL)：纯度为 35%37%（g/g）。4.1.4 硫酸铁铵(NH4Fe(SO4)2 12H2O)。4.1.5 水（H2O）：GB/T 6682 规 定的一 级水。注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯。4.2 试剂配 制 4.2.1 盐酸-正丁醇 溶液：取正丁 醇 50 mL，于 100 mL 容量瓶中，准确 量取盐 酸 5 mL，用正丁醇定 容，摇匀，备用。4.2.2 2mol/L 盐酸溶液：准确 量取 盐酸 20 mL 于烧杯中，加 100 mL 水，摇匀，备用。4.2.3 硫酸铁铵 溶液：称取硫 酸铁 铵 2.0 g 于三角瓶中，加 2 mol/L 盐酸溶液，放 置于沸 水浴中，至其全部溶解后，取出 放置至 室温，将其转 移至 100 mL 容量 瓶中用 2 mol/L 盐酸溶液定 容至刻度。4.3 标准品 原花青 素标 准品 纯度 95%，或 经国 家认 证并 授予 标准物 质证 书的 标准 物质。DB12/T 885 2019 2 4.4 标准溶 液配 制 4.4.1 原花青 素标 准储 备液（1.0 mg/mL）：取原 花青 素标 准品 10 mg，精密 称定，置 10 mL 容 量瓶 中，加甲醇 溶解 并定 容至 刻度，即得 浓度 为1.0 mg/mL 标准储 备液，溶 液现 用现 配。4.4.2 原花青素 标准系 列工作 液：准确量 取 原花青 素储备 液0.0 mL、0.10 mL、0.25 mL、0.50 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL 分别置于 10 mL 容量瓶中，加甲醇 至刻度，摇匀，的 浓度为0 g/mL、10.0 g/mL、25.0 g/mL、50.0 g/mL、100 g/mL、150 g/mL、200 g/mL、250 g/mL 的标准系列工作溶液。5 仪器和 设备 5.1 紫外分 光光 度计，配 1 cm 比色杯，波 长范 围(110 900)nm。5.2 超声 波 提取 机。5.3 涡旋混 合仪。5.4 天平：感 量0.01mg。5.5 具盖安 瓿瓶：10 mL。5.6 封口钳。5.7 容量瓶：10 mL、50 mL、100 mL。6 分析步 骤 6.1 供试品 溶液 的制 备 取样品(10 100)mg，精 密称定，置50 mL 容 量瓶 中，加入30 mL 甲醇，超声 处 理（功 率250 W，频率50 kHz）20 min，放至 室温后，加 甲醇 至刻 度，摇匀，离心 或放 至澄 清后 取上清 液作 为供 试品 溶 液。如样品 原花青 素 含 量较高，再精 密量取 上清 液10 mL，置100 mL 容量瓶 中，加 甲醇稀 释至刻 度，摇匀，作为供 试品 溶液。6.2 测定 6.2.1 标准曲 线的 绘制 准确吸 取 原 花青 素标 准系 列工作 液各1 mL，置 于安 瓿 瓶中，精密 加入 盐酸-正 丁 醇溶液（4.2.1）6 mL，硫酸铁 铵溶液（4.2.3）0.2 mL，混匀，用封 口钳将 其密封，置沸 水中 加热40 min 后，取出，立即 置冰水中冷 却至 室温，于546 nm 波长 处测 吸光 度，显色 在1小时 内稳 定。以吸光 度为 纵坐 标，原花 青素浓 度为 横坐 标绘 制标 准曲线。6.2.2 样品溶 液的 测定 精密吸 取6.1 项下的 供试 品 溶液1 mL，置 于安 瓿瓶中，然后 按照标 准曲 线 制作 步骤执 行。以 相应 试剂为空 白。测定 样品 吸光 度，用 标准 曲线 计算 试样 中 原花 青素 的含 量。7 分析结 果表述 试样中 原花 青素 的 含 量按 式（1）计 算：DB12/T 885 2019 3 1001000 10001000 c12 V mV VX.(1)式中：X 试样 中原 花青 素的 含 量，单 位为 克每100 克（g/100g）；c 反应 混合 物中 原花 青 素的量，单 位为 微克 每毫 升（g/mL）；V 待测 样液 总体 积，单 位为毫 升（mL）；V1 样液 反应 体积，单 位为毫 升（mL）；V2 样液 反应 后总 体体 积，单 位为 毫升（mL）；m 样液 所代 表的 试样 质 量，单 位为 毫克（mg）以重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的算 术平 均值表 示，结果 保留 三位 有效数 字。测定 结 果 须扣除空 白值。8 精密度 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的绝 对差 值不得 超过 算术 平均 值的10%。_