ICS 11.120.20 C 30 DB13 河北省地方标准 DB 13/T 5127.16 2019 植入性医 疗器械 高 分子材料 浸提液中 有 毒有害物 质的测定 第16 部分：生物负 载 薄膜过滤 法 2019-12-27 发布 2020-01-28 实施 河 北 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB13/T 5127.16 2019 I 前 言 本标准 按照GB/T 1.1-2009 给出的 规则 起草。DB13/T 5127 植入 性医 疗 器械 高分 子材 料 浸提 液中有 毒有 害物 质的 测定 共分16个 部分：第1部 分：柠檬 酸钠 和 乙二胺 四乙 酸二 钾迁 移量 原子 吸收 分光 光度 法；第2部 分：二巯 基丙 醇 迁移量 碘量 法；第3部 分：葡萄 糖迁移量 碘 量法；第4部 分：柠檬 酸迁移量 酸 碱中 和滴 定法；第5部 分：硫氰 酸胍 迁 移量 分光 光度 法；第6部 分：丙酮 迁移 量 气相 色谱 法；第7部 分：丙交 酯迁移量 气 相色 谱法；第8部 分：对苯 二甲 酸 迁移量 高 效液 相色 谱法；第9部 分：乙醇 迁移 量 气相 色谱 法；第10部 分：环氧 乙烷 迁移量 气 相色 谱法；第11部 分：戊二 醛 迁 移量 高效 液相 色谱 法；第12部 分：异氰 酸酯 迁移量 高 效液 相色 谱法；第13部 分：甲醛 迁移 量 气 相色 谱质 谱联 用法；第14部 分：蛋白 质 迁 移量可见-紫外分 光光 度法；第15部 分：铅、砷、镉、铬、铜、锑、钡、铝、锌、锡 迁 移量 电 感耦 合等离 子体 质 谱 法；第16部 分：生物 负载 薄膜 过滤 法。本部分 为DB13/T 5127的第16部分。本部分 由河 北省 药品 监督 管理局 提出 并归 口。本部分 起草 单位：河 北省 医疗器 械与 药品 包装 材料 检验研 究院。本部分 主要 起草 人：康莉、刁立 琴、付钊、高 保栓、冯毅。DB13/T 5127.16 2019 1 植 入 性医疗器 械 高分子 材料 浸提 液中有 毒有害 物质的 测定 第 16 部分：生物负 载 薄膜过 滤法 1 范围 本标准 规定 了植 入性 医疗 器械高 分子 材料 浸提 液中 生物负 载的 测定 方法。本标准 适用 于植 入性 医疗 器械高 分子 材料 浸提 液中 生物负 载的 测定 和验 证。本标准 适用 于具 有一 定生 物负载 水平 的植 入性 医疗 器械。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 注日 期的版 本适 用于 本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB/T 19973.1 医疗 器械 的灭菌 微生 物学 方法 第1 部分：产 品上 微生 物总 数的测 定 3 方法原 理 选择适 宜的 洗脱 方法 对试 样上自 然污 染的 微生 物进 行洗脱 处理，将 洗脱 液进 行薄膜 过滤，并 对 滤膜进行 培养 计数，得 到试 样上洗 脱的 微生 物总 数。再用重 复回 收法 确定 试样 的修正 系数。最 后，通 过修正系 数对 试样 上洗 脱的 微生物 总数 进行 修正，从 而确定 试样 上的 生物 负载 水平。4 试剂 与 材料 4.1 胰酪大 豆胨 琼脂 培养 基。4.2 沙氏葡 萄糖 琼脂 培养 基。4.3 0.9%氯化 钠注 射液。5 仪器与 设备 5.1 压力蒸 汽灭 菌器。5.2 洁净工 作台。5.3 生化培 养箱。5.4 电子天 平 5.5 拍击式 无菌 均质 器。5.6 恒温振 荡器。5.7 过滤装 置。DB13/T 5127.16 2019 2 5.8 0.45 m 无 菌微 孔滤 膜。6 试验步 骤 6.1 微生物 采集 6.1.1 袋蠕动 法 该洗脱 方法 尤其 适用 于软 质、纤维 和/或吸 附性 材料，但 可能 不适 用于 能刺 破 袋的任 何材 质（如 带针或含 有坚 硬部 分的 器械）。将试样 和已 知体 积的 洗脱 液装在 一无 菌均 质袋 中，设定均 质器 的洗 脱参 数，推荐将 洗脱 参数 设 定为拍击 频率6次/秒，运行 时间60 s，启动 均质 器，使洗脱 液贯 穿试 样内 外。6.1.2 机械振 摇 法 该洗脱 方法 为通 用方 法，适用于 大多 数材料 和 样品。将试样 和已 知体 积的 洗脱 液装在 一无 菌容 器中，设 定振荡 器的 洗脱 参数，推 荐将洗 脱参 数设 定 为振摇频 率200 r/min，运 行 时间60 s，开启 振荡 器进 行振摇 洗脱。6.2 菌落总 数测 定 6.2.1 试样制 备 在 无 菌环 境下，打 开至 少5个 包 装，从每 个包 装中 取样，准确 量取3份 样品，每份10 g1 g或100 cm210 cm2（以内 外总 表面 积计），分 别为 样1、样2、样3。6.2.2 试样洗 脱 将3份 试样 分别 放入3 个无 菌均质 袋/或无 菌容 器中，向每个 无菌 均质 袋/或无 菌 容器中 加入100 mL洗脱液，按 设定 好的 参数 对试样 分别 进行 洗脱。6.2.3 移至培 养基 对洗脱 液进 行薄 膜过 滤。将每份 试样 的洗 脱液 分别 通过薄 膜过 滤等 量完 全过 滤到两 张滤 膜上，每张滤膜 再用100 mL0.9%氯 化钠注 射液 进行 冲洗。将 滤膜菌 面朝 上分 别贴 于胰 酪大豆 胨琼 脂培 养基 平 板和沙氏 葡萄 糖琼 脂培 养基 平板上。6.2.4 培养计 数 将3个 胰酪 大豆 胨琼 脂培 养 基平板 置30 35 生化 培养箱 中培 养3 d 5 d，将3个 沙氏 葡萄 糖琼脂培养 基平 板置20 25 生化 培养 箱中 培养5 d 7 d。逐日 观察 菌落 生长 情 况，点 计菌 落数。6.2.5 结果计 算 每个试 样洗 脱的 菌落 总数 按公式（1）计 算。Xi=2（Ai+Bi）（1）式中：Xi-第i个 试样 洗脱 的菌 落 总数，CFU；Ai-第i个 试样 胰酪 大豆 胨 琼脂培 养基 平板 菌落 数，CFU；Bi-第i个 试样 沙氏 葡萄 糖 琼脂培 养基 平板 菌落 数，CFU；DB13/T 5127.16 2019 3 i=1,2,3。3个试 样洗 脱的 平均 菌落 数 按公式（2）计 算。X=（X1+X2+X3）（2）式中：X-3个 试样 洗脱 的平 均菌 落数，CFU。6.3 修正系 数测定 6.3.1 试样制 备 在 无 菌环 境下，打 开至 少5个 包 装，从每 个包 装中 取样，准确 量取3份 样品，每份10 g1 g或100 cm210 cm2（以内 外总 表面 积计），分 别为 样a、样b、样c。6.3.2 试样洗 脱 在无菌 环境 下，将3 份试 样 分别放 入3 个无 菌均 质袋/或无菌 容器 中，向每 个无 菌均质 袋/或无 菌容器中加 入100 mL 洗脱 液，按设定 好的 参数 对试 样分 别进行 重复 洗脱。每 重复 一次后，将 洗脱 液全 部 回收。6.3.3 移至培 养基 对洗脱 液进 行薄 膜过 滤。将每份 试样 的每 一次 洗脱 液分别 通过 薄膜 过滤 等量 完全过 滤到 两张 滤 膜上，每 张滤 膜再 用100 mL0.9%氯 化钠 注射 液进 行冲 洗。将 滤膜 菌面 朝上 分别 贴于胰 酪大 豆胨 琼脂 培 养基平板 和沙 氏葡 萄糖 琼脂 培养基 平板 上。用熔化 的回 收培 养基 涂在 试样表 面上，让 培养 基变 硬，然 后使 试样 在规 定的 培养 条 件下 进行 培 养。6.3.4 培养计 数 将贴有 滤膜 的胰 酪大 豆胨 琼脂培 养基 平板 及涂 有胰 酪大豆 胨琼 脂培 养基 的试 样置30 35 生化培养箱 中培 养3 d5 d，将贴有 滤膜 的沙 氏葡 萄糖 琼脂培 养基 平板 及涂 有沙 氏葡萄 糖琼 脂培 养基 的 试样置20 25 生化 培养 箱中培 养5 d7 d。逐日 观察菌 落生 长情 况，点计 菌落数。6.3.5 结果计 算 表1中 列出 了重 复处 理过 程 中经过5次 重复 洗脱 后的 一 组理想 化数 据。表1 某 产品 重复 洗脱 后测 得的菌 落数 产品 洗脱次数 琼脂覆盖 总菌落数 1 2 3 4 5 样 a na1 na2 na3 na4 na5 ma Na=na1+na2+na3+na4+na5+ma 样 b nb1 nb2 nb3 nb4 nb5 mb Nb=nb1+nb2+nb3+nb4+nb5+mb 样 c nc1 nc2 nc3 nc4 nc5 mc Nc=nc1+nc2+nc3+nc4+nc5+mc DB13/T 5127.16 2019 4 根据表1的 数据 计算 回收 率，见表2。表2 回 收率 产品回收总菌落数 第 1 次洗脱 第 1 次洗脱的回收率 第 1 次洗脱的平均回收率 样 a Na na1 Qa=na1 1 0 0%/Na Q=（Qa+Qb+Qc）/3 样 b Nb nb1 Qb=nb1 1 0 0%/Nb 样 c Nc nc1 Qc=nc1 1 0 0%/Nc 计算中 已包 括了 琼脂 覆盖 得到的 菌落 数。某些 医疗 器械可 能会 无法 应用 琼脂 覆盖。采用首 次洗 脱后 的平 均回 收率Q，修 正系 数按 公式（3）计 算。P=1/Q（3）式中：Q-平均回收率；P-修 正系 数。6.4 生物负 载的 计算 生物负 载按 公式（4）计 算。Y=（4）式中：Y-每1g/10cm2试样 上的 生物负 载，CFU/g 或CFU/10 cm2；P-修 正系 数；X-3 个试 样洗 脱的 平均 菌 落数；CFU。6.5 方法说 明 6.5.1 在某一 产品 的常 规检 验中，在试 验方 法没 有改 变的 前提下，可 以依 据已 得到 的修正 系数 进行 计算。6.5.2 试验方 法中 的洗 脱参 数可 根据产 品特 性进 行调 整。6.5.3 准确的 重复 次数 取决 于若 干因素，包括 产品 特性、构 成生物 负载 的微 生物 和初 始污染 水平。预实验可 用于 确定 重复 的次 数。_