ICS 11.120.20 C 30 DB13 河北省地方标准 DB 13/T 5127.14 2019 植入性医 疗器械 高 分子材料 浸提液中 有毒有害 物质的测 定 第14 部分：蛋白 质迁移量 可见-紫外分光 光度法 2019-12-27 发布 2020-01-28 实施 河 北 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB13/T 5127.14 2019 I 前 言 本标准 按照GB/T 1.1-2009 给出的 规则 起草。DB13/T 5127 植入 性医 疗 器械 高分 子材 料 浸提 液中有 毒有 害物 质的 测定 共 分16个 部分：第1部 分：柠檬 酸钠 和 乙二胺 四乙 酸二 钾迁 移量 原子 吸收 分光 光度 法；第2部 分：二巯 基丙 醇 迁移量 碘 量法；第3部 分：葡萄 糖迁 移 量 碘 量法；第4部 分：柠檬 酸迁 移 量 酸 碱中 和滴 定法；第5部 分：硫氰 酸胍 迁 移量 分光 光度 法；第6部 分：丙酮 迁移 量 气相 色谱 法；第7部 分：丙交 酯迁 移 量 气 相色 谱法；第8部 分：对苯 二甲 酸 迁移量 高 效液 相色 谱法；第9部 分：乙醇 迁移 量 气相 色谱 法；第10部 分：环氧 乙烷 迁移量 气 相色 谱法；第11部 分：戊 二 醛迁 移量 高效 液相 色谱 法；第12部 分：异氰 酸酯 迁移量 高 效液 相色 谱法；第13部 分：甲醛 迁移 量 气 相色 谱质 谱联 用法；第14部 分：蛋白 质迁 移量 可见-紫外 分光 光度 法；第15部 分：铅、砷、镉、铬、铜、锑、钡、铝、锌、锡 迁 移量 电 感耦 合等离 子体 质 谱 法；第16部 分：生物 负载 薄膜 过滤 法。本部分 为DB13/T 5127的第14部分。本部分 由河 北省 药品 监督 管理局 提出 并归 口。本部分 起草 单位：河 北省 医疗器 械与 药品 包装 材料 检验研 究院、石 家庄 亿生 堂医用 品有 限 公 司。本部分 主要 起 草 人：王丽、刘胜 军、刘华、高 明、刘若锦、李 素哲、杨 光。DB13/T 5127.14 2019 1 植 入性医 疗器械 高 分子材 料 浸 提液中 有毒有害 物质的 测定 第 14 部分：蛋白质 迁移量 可见-紫 外分光 光度法 1 范围 本 标 准规 定 了 植 入性 医疗器 械 高分 子 材料 浸提 液中蛋 白 质迁 移量 的 可见-紫外分 光 光度 法测 定 方法。本标准 适用 于 植 入性 医疗 器械高 分子 材料 浸提 液中 蛋白质 迁移 量 的 测定。本方法 蛋白 质 的 检出 限为0.2 mg/L。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 注日 期的版 本适 用于 本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和实 验方 法 GB/T 16886.12 医 疗器 械 生物学 评价 第12部 分：样品制 备与 参照 材料 3 方法原 理 试样经 浸提 液浸 提后，浸 提液中 蛋白 质分 子的 碱性 氨基酸（精 氨酸）和 芳香 族氨基 酸在 酸性 溶 液中与考 马斯 亮蓝G250 结合 形成蓝 色复 合物，在 一定 范围内 其颜 色深 浅与 蛋白 质浓度 呈正 比，以蛋 白 质对照品 溶液 作标 准曲 线，采用比 色法 测定 浸出 液中 蛋白质 的含 量。4 试剂与 材料 除另有 规定 外，所用 的试 剂应为 优级 纯，试验 用水 应符合GB/T 6682 规 定的 二 级水的 要求。4.1 牛血清 白蛋 白标 准品：CAS 号：9048-46-8。4.2 考马斯 亮 蓝G250：CAS 号：6104-58-1。4.3 磷酸：CAS 号：7664-38-2。4.4 乙醇：CAS 号：64-17-5。5 仪器 与 设备 5.1 酸性染 色液 的制 备：取 考 马斯亮 蓝G250（4.2）0.1g，加 乙醇（4.4）50 mL 溶 解后，加 磷酸（4.3）100 mL，加 水稀 释至1000 mL,混 匀。滤过，取 滤液，即得。本试 剂应 置棕 色瓶 内，如 有沉 淀产 生，使用前需 经过 滤。5.2 对照品 储备 液制 备：准确 称取牛 血清 白蛋 白标 准品（4.1）50 mg（精确 到 0.1 mg）于 50 mL 容量瓶中，加 水定 容，摇匀，得到 浓度 为 1000 mg/L 的对照 品储 备液。5.3 对照品 中间 液制 备：精密 移取对 照品 储备 液（5.2）2.0 mL 于 10 mL 容量 瓶中，加水 稀释 并定 容至刻线，摇 匀，即 得 200 mg/L 的对 照品 中间 液。DB13/T 5127.14 2019 2 5.4 对照品 溶液 制备：精 密移 取对照 品中 间液（5.3）10 mL 于 100 mL 容 量瓶 中，加水稀 释并 定容 至刻线，摇匀，即 得20 mg/L 的对 照品 溶液。6 仪器 与 设备 6.1 紫外-可见 分光 光度 计。6.2 电子天 平，精 度 0.1 mg。6.3 具塞刻 度试 管：10 mL。6.4 容量瓶：50 mL。6.5 石英比 色皿，1cm 光 径。7 试液制 备 7.1 浸提试 验 7.1.1 浸提溶 液 本标准 采用 模拟 浸提 方式，以水 为浸 提介 质。7.1.2 浸提条 件 和 方法 7.1.2.1 浸提 条件 建立 在 通常可 行并 经论 证为 一个 标准 化 方法 的基 础之 上，在 多数情 况下 为产 品使 用的适当 加严 的条 件。应 在 下列之 一的 条件 下进 行浸 提：a)(371),(242)h；b)(371),(722)h；c)(502),(722)h；d)(702),(242)h；e)(1212),(10.1)h。7.1.2.2 可用 标准 表面 积 确定所 需的 浸提 介质 的 体 积。标 准表 面积 包括 样品 两面面 积 的 总和，不 包括不确定 和不 规则 面积。当 由于样 品外 形不 能确 定其 表面积 时，应使 用质 量/浸 提液体 积。见表1。表1 标 准表 面积 和浸 提液 体积 材料形态举例 厚度（mm）浸提比例（表面积或质量/体积）1 0%膜、薄片、管壁 0.5 6 cm2/mL 管壁、厚板、小型模制件 0.5 1.0 3 cm2/mL 大型模制件 1.0 3 cm2/mL 弹性密封件 1.0 1.25 cm2/mL 粉剂、球体、泡沫材料、无吸收性模制件 不规则形状固体器械 0.2 g/mL 薄膜、织物 不规则形状多 孔器械（低密度材料）0.1 g/mL 注1：现在尚无测试吸收剂 和水胶体的标准化方法，推荐以下方案：注2：测定材料浸提介质吸 收量（每0.1 g 或1.0cm2 材料所 吸收的量）；注3：在进行浸提时，对浸 提混合物按每0.1 g 或1.0 cm2 额外加入该浸提介质吸收量。DB13/T 5127.14 2019 3 7.1.2.3 对于 弹性 体、涂 层 材料、复 合材 料、多层 材料等，由 于完 整表 面与 切割表 面存 在潜 在的 浸提性能差 异，因此 应尽 量完 整地进 行浸 提。7.2 空白液 制备 以同批 浸提 介质 作为 空白 试验液。8 测定 8.1 仪器条件 波长：595 nm。8.2 工作曲 线和 样品 测定 分别精 密量 取对 照品 溶液0.0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.5 mL、1.0 mL，对照 品中 间液0.2 mL,分 别至 具塞 试管 中，各 加水至1.0 mL，再分 别加 入酸性 染色 剂5.0 mL，立 即混匀，放 置2 min 后，在595 nm 波 长处 测定 吸光 度；同 时以0 号管 作为 空白。以对 照品 溶液 浓度 与其 相对应 的吸 光度 计算 线 性回归方 程。另精密 量取 浸提 液溶 液1.0 ml，同法 测定 浸提 液。9 结果计算 浸提液 中 甲 醛蛋 白质 的 含 量按 公 式（1）计算。（1）式中：C 浸 提液 中蛋 白质 的 浓度，单位 为微 克每 毫升（mg/L）；y 浸提 液的 吸光 度；a 回归 曲线 的斜 率；b 回归 曲线 的截 距；稀 释倍 数。样品中 蛋白 质的 特定 迁移 量按公 式（2）计算。1000 ACM（2）式中：M 特 定迁 移量，mg/cm2或 mg/g；A 浸提 比例，cm2/mL 或g/mL。计算结 果以 平行 测定 值的 算术平 均值 表示，保 留三 位有效 数字。10 精密度 浸提液 中 目 标物 在重 复性 条件下 获得 的两 次独 立测 定结果 的绝 对差 值不 得超 过算术 平均 值的10%。_