ICS 65.020.40 CCS B 61 44 广东 省 地方标准 DB44/T 2284 2021 互叶白千 层 组培育 苗 技术规 程 Code of practice on Melaleuca alternifolia propagation via tissue culture 2021-03-06 发布 2021-06-06 实施 广东省市 场监督 管 理局 发 布 DB44/T 2284 2021 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分：标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定起草。本文件 由广 东省 林业 局 提 出、归 口并 组织 实施。本文件 起草单 位：广东省 林业科 学研究 院、广东尚 善环境 建设有 限公 司、广 东森霖 造绿有 限 公 司。本文件 主要 起草 人：张 谦、周丽华、汪迎 利、何波 祥、连辉明、蔡燕 灵、白青 松、谢佩吾、梁东 成、侯晨、尧俊、陈 春如、林 什全、邱文 霞、陈一 群、蓝燕群。DB44/T 2284 2021 1 互 叶白千 层组培育 苗技术 规程 1 范围 本文件 规定 了互 叶白 千层（Melaleuca alternifolia(Maiden&Betche)Cheel）组 织培养 育苗 技术 的 外植体、接种、瓶 苗移 植、苗木管 理、苗木 出圃 和档 案管理 等技 术要 求。本文件 适用 于互 叶白 千层 组织培 养育 苗。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB/T 6001 育 苗技 术规 程 GB/T 26514 互 叶白 千层（精）油，松油 烯-4-醇型 茶树（精）油 LY/T 1000 容 器育 苗技 术 LY/T 1770 桉 树无 性系 组 培快繁 技术 规程 LY/T 1882 林 木组 织培 养 育苗技 术规 程 DB44/T 1142 互叶 白千 层 栽培技 术规 程 DB44/T 1914 枫香 组培 育 苗技术 规程 3 术语和 定义 LY/T 1770 和LY/T 1882 界 定的术 语和 定义 适用 于本 文件。4 外植体 材料采 集 选取符 合GB/T 26514给定 的精油 质量 标准 的无 性系 中 健壮、无 病虫 害的 单株。在连 续3 d 晴好 天气后，采 集嫩 枝作 为外 植体 材料。消毒 采用超 声波 清洗 仪，用0.2%灭菌 净处 理外 植体10 min15 min，并用 无菌 水清 洗6次；再在 无菌 条件下，用 每100 ml 添加1滴（0.05 ml）吐温-80的70%酒 精溶液 浸没 外植 体材 料，轻微摇 动3 min5 min 后，用无菌 水冲 洗6 次。5 瓶苗培 育 培养基 DB44/T 2284 2021 2 采用改 良DCR 和MS 为基 本 培养基，添加 不同 的激素，分别 配置初 代培 养基、增殖培 养基和 生根 培养基，培养 基用HCl调整pH 值为5.8。培 养基 配方 参 照附录A 执行。培养条 件 培养温 度25 C30 C，相 对湿度65%70%，光 照强 度1500 lx3000 lx，每 天光 照时间12 h16 h。及时清除 污染 材料。初代培 养 在无菌 环境 下，将 消毒 好 的外植 体切 成2.0 cm2.5 cm 长的带芽茎 段，接 种在 初 代培养 基中，每瓶 接种1段；培 养6 d15 d，诱 导出芽。增殖培 养 在无菌环 境下，切割 初 代 或继代培 养诱导 的幼芽 或 丛生芽，切割成 每丛3个4 个小芽丛，按250 ml培养瓶 接种6丛8 丛芽 的方 式转接 至增 殖培 养基 中，培养15 d25 d；外殖 体培 养时间 超过3 a，或继 代培养36代40 代 后，更新 培养 材料。生根培 养 切割长1.5 cm2.0 cm 的继 代培养 芽，转移 至生 根培 养基中 培养7 d10 d，诱导 生根。6 瓶苗移 植 炼苗 在培养 室生 根培 养7 d10 d 后，转 移至 遮光 度为70%的大棚 内炼 苗25 d35 d。移植 6.2.1 芽苗出 瓶 炼苗室 芽苗 平均 高达3 cm 以上时，将 瓶苗 和培 养基 同时倒 出，用清 水洗 净培 养基，保持 幼根 完整，不受损 伤。选择 根系 发达、植株 挺立、生 长健 壮的 芽苗备 用。6.2.2 容器与 基质 以4 cm 10 cm 的营养袋 作 容器时，黄 心土 为基 质；以28孔（4 cm 10 cm）育 苗穴盘 作容 器时，泥炭土、珍珠岩、椰 糠和枯 枝落叶 腐熟质 按60：25：10：5比 例混合 均匀 作基质。基质 填充入 育苗 容器 中备用。芽苗 定植 前2 d，用0.5 g/L 的多菌灵 溶液 淋透 育苗基 质，消毒 完全。6.2.3 芽苗移 植 将备用 的芽 苗移 植到 准备 好的容 器中，保 持根 系舒 展。7 苗木管 理 湿度与 光照 移植后3 w4 w 内，保持 基 质持水 率在60%80%，遮 光度在70%80%；之 后揭 去遮荫 设施，保持 基质持水 率。DB44/T 2284 2021 3 施肥 待小苗 长出 新叶 后，用含 1 浓度 氮磷 钾的 复合 肥水 溶液喷 施，每2 w 喷1次；移植4 w 后，用 3 浓度氮磷 钾的 复合 肥水 溶液 喷施，每2 w 喷1次。病菌控 制 用多菌 灵1000 倍液、甲基 托布津1000 倍 液和 百菌清800 倍液 交替喷 洒苗 木，移 苗当天1 次，以后 每2 w 喷1次，共 施2次3 次。8 苗木出 圃 检疫 检疫宜 在苗 圃进 行，由植 物检疫 部门 完成，并 签发 检疫 合格 证 后方 可出 圃。检验 采取随 机抽 样方 法检 验，1000 株 以下 按10%比例 抽样 检验；1000 株以 上的，先 完成1000 株10%抽样检验，再对 超出1000 株部 分按2%比例 抽样 检验。苗木质 量 出圃前 应进 行苗 木调 查和 分级，生长 正常、无 病虫 害、无 机械 损伤、主 干粗 壮的为 合格 苗；苗 木 高35 cm 以上、地径0.45 cm 以 上的为 级 苗；苗木 高25 cm35 cm、地径0.35 cm0.45 cm 的为 级苗。出圃 选择 级苗 以上 苗木，出 圃造林。9 档案管 理 按照GB/T 6001 和LY/T 1770 的要 求执 行。DB44/T 2284 2021 4 A A 附录A（资料 性）互叶白 千层 组织 培养 的培 养基配 方 表A.1 给出 了互 叶白 千层 组 织培养 中培 养基 的配 方。表A.1 互叶白 千层 组织 培养 的培 养基配 方 培养基 成份 初代/增殖 培养 基（mg/L）生根培 养基（mg/L）KNO3 510 950 NH4NO3 600 825 KH2PO4 255 85 Ca(NO3)2 4H2O 834 CaCl2 2H2O 128 220 MgSO4 7H2O 555 185 FeSO4 7H2O 27.8 27.8 Na2-EDTA 37.3 37.3 MnSO4 4H2O 22.3 22.3 ZnSO4 7H2O 8.6 8.6 H3BO3 6.2 6.2 KI 0.83 0.83 Na2MoO4 2H2O 0.25 0.25 CuSO4 5H2O 0.025 0.025 CoCl2 6H2O 0.025 0.025 甘氨酸 2.0 2.0 VB1 0.1 0.1 VB6 0.5 0.5 VB3 0.5 0.5 肌醇 100 100 VC 2 2 L-半胱 氨酸 5 5 PVPK30 500 500 蔗糖 30,000 15,000 6-BA 0.52.5 KT 0.52.5 IBA 1.02.0 NAA 0.050.1 0.050.5