ICS 71.100.10 Y 42 DB37 山东省地方标准 DB37/T 30312017 化妆品中 斑蝥素的 测定 液相色谱-质谱/质 谱法 Determination of cantharidin in cosmeticsLC-MS/MS method 2017-10-25 发布 2017-11-25 实施 山东省质量技术监督局 发布 DB37/T 30312017 前 言 本标准 按照GB/T 1.12009 给出 的规 则起 草。本标准 由山 东省 质量 技术 监督局 提出。本标准 由山 东省 化妆 品标 准化技 术委 员会 归口。本标准 起草 单位：山 东省 产品质 量检 验研 究院、山 东省食 品药 品检 验研 究院。本标准 主要 起草 人：周莉 莉、崔 玉花、高 勇、李丽、张卉、祝 建华、邹 惠玲、许士 明。I DB37/T 30312017 化 妆品中 斑蝥素的 测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本标准 规定 了化 妆品 中斑 蝥素的 液相 色谱-质谱/质谱 测 定方 法。本标准 适用 于化 妆品 中斑 蝥素的 检测。本标准 液相 色谱-质谱/质 谱法的 检出 限为0.05 g/kg。2 原理 化妆品 中的 斑蝥 素用 甲醇 超声提 取，离心 过滤，经 正 己烷脱 脂，液相 色谱-质谱/质谱法 测定 和确 证，外标法 定量。3 试剂与 材料 除非另 有说 明，所有 试剂 均为分 析纯，水 为二 次蒸 馏水。3.1 甲醇：色谱 纯。3.2 正己烷。3.3 斑蝥素 标准 品（cantharidin，CAS 号 56-25-7，C10H12O4）：纯 度99%。3.4 斑蝥素 标准 储备 液：准确 称取适 量斑 蝥素 标准 品，用甲醇（4.1）溶 解并 定容至 刻 度，配制 成浓度为1 mg/mL 的标 准储 备液，冰箱 冷藏 保存。3.5 标准工 作溶 液：将标 准储 备液用 甲醇-水（1+9）溶 液分别 稀释 为 0.5 g/mL、1 g/mL、2 g/mL、5 g/mL、10 g/mL、25 g/mL 的 系列 标准 溶液。冰箱 冷 藏保 存。4 仪器和 设备 4.1 高效液 相色 谱-质 谱仪：配有 电 喷雾 离子 源。4.2 分析天 平：感量 分别 为 0.0001 g 和 0.01 g。4.3 超声波 清洗 器。4.4 漩涡混 合器。4.5 离心机，大 于 6000 r/min。4.6 微孔滤 膜：0.22 m 有机 相过滤 膜。5 测定步 骤 5.1 样品处 理 称取化妆 品试 样1.0 g（精确 至0.01 g）于 30 mL离心管 中，加入5 mL 甲醇 旋涡1 分 钟，超声 提取10 min，6000 r/min离心5 分钟 后取 上层清 液。残渣 加入5 mL 甲醇重 复提 取一 次，合并 上清液。加 入4 mL正己 烷，振荡萃 取20 分钟 后弃 去正 己烷层，从 下层 清液 中取1.0 mL 于10 mL 刻度 管中，用 水定容 至10 mL 刻度，旋1 DB37/T 30312017 涡混匀，过微 孔滤 膜（5.6），供 液相色 谱-质谱/质谱 仪 测定。对 斑蝥 素含量 较高的 样品，适当 稀释 后进样。5.2 测定 5.2.1 液相色 谱参 考条 件 以下为 液相 参考 条件：a)色谱柱：C18 柱，100 mm2.1 mm（i.d.），1.7 m，或相当 者；b)流动相：甲 醇-水，梯 度洗脱 程 序见表 1；表1 流动相 梯度 洗脱 程序 时间/min 甲醇/%水/%0 10 90 1 10 90 3 30 70 5 100 0 6 100 0 6.1 10 90 8 10 90 c)流速：0.3 mL/min；d)柱温：30；e)进样量：5 L。5.2.2 质谱参 考条 件 以下为 质谱 参考 条件：a)离子源：电喷 雾离 子源；b)扫描方 式：负离 子扫 描；c)毛细管 电压：3.0 kV；d)锥孔电 压：35 V；e)离子源 温度：110；f)脱溶剂 气温 度：450；g)脱溶剂 气（N2）流 量：800 L/h；h)锥孔气（N2）流 量：50 L/h；i)碰撞室 压力：3.010-3 mbar；j)扫描方 式：多反 应监 测（MRM）；m/z195/151（定 量离 子，碰 撞能量 12 eV）、195/122（碰撞能量20 eV）。5.2.3 液相色 谱串 联质 谱测 定 根据试 样中 被测 样液 的含 量情况，选 取斑 蝥素 的响 应值在 仪器 线性 响应 范围 内的浓 度进 行测 定，如超出仪 器线 性响 应范 围应 进行稀 释。在 上述 色谱条 件下斑 蝥素 的参 考保 留时 间为4.10 min，标 准溶液的多反应 监测（MRM）色 谱图参见附 录A 中的 图A.1。5.2.4 液相色 谱-质谱/质谱 确证 2 DB37/T 30312017 按照按 照液相 色谱-串联 质 谱条件 测定样 品和 标准工 作溶液，样品 中斑 蝥素的 保留时 间与标 准溶 液中斑蝥 素的保 留时 间偏差 在2.5%之 内。定量测 定 时采用 标准曲 线法 测定。定性时 应当与 浓度 相当 标准工作 溶液 的相 对丰 度一 致，相 对丰 度允 许偏 差不 超过表2规定 的范 围，则可判 断 样品 中存 在斑 蝥素。表2 定性确 证时 相对 离子 丰度 的最大 允许 偏差 相对离子丰度/%50 2050 1020 10 允许的相对偏差/%20 25 30 50 6 结果计 算和 表述 试样中 斑蝥 素的 含量 由色 谱数据 处理软 件或 按式（1）计算 获得：fm AsV c AY=1000.(1)式中：Y 试样 中斑 蝥素 的含量，单位 为克每千 克（g/kg）；A 样液 中斑 蝥素 的峰面 积；c 标准 溶液 中斑 蝥素的 浓 度，单位 为微克 每 毫升(g/mL)；V 试样 溶液 最终 定容的 体 积，单位 为毫 升（mL）；As 标准 溶液 中斑 蝥素的 峰 面积；m 试样 质量，单 位为克（g）；f 稀释 倍数。7 方法定 量限 本方法 斑蝥 素的 检出 限为0.05 g/kg。8 回收率 在添加 浓度0.05 g/kg5 g/kg范围 内，回收 率在85%105%之间，相对 标准 偏差小 于10%。9 允许差 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的绝 对差 值不得 超过 算术 平均 值的10%。3 DB37/T 30312017 A A 附 录 A（资料 性附 录）斑蝥素 标准 品多 反应 监测（MRM）色 谱图 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50%01001.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50%0100MRM of 2 Channels ES-195 151(cantharidin)5.28e44.10MRM of 2 Channels ES-195 122(cantharidin)2.98e44.10Time1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50%01001.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50%0100MRM of 2 Channels ES-195 151(cantharidin)5.28e44.10MRM of 2 Channels ES-195 122(cantharidin)2.98e44.10Time 图A.1 斑蝥素 标准 品多 反应 监测（MRM）色 谱图 _ 4