ICS 71.100.70 Y 42 DB37 山东省地方标准 DB37/T 30322017 化妆品中 苯菌灵和 多菌灵的 测定 液相色谱-串联质谱 法 Determination of benomyl and carbendazim in cosmetics by liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2017-10-25 发布 2017-11-25 实施 山东省质量技术监督局 发布 DB37/T 30322017 前 言 本标准 按照GB/T 1.12009 给出 的规 则起 草。本标准 由山 东省 质量 技术 监督局 提出。本标准 由山 东省 化工 标准 化技术 委员 会归 口。本标准 起草 单位：山 东省 产品质 量检 验研 究院、山 东省食品 药品 检验 研究 院。本标准 主要 起草 人：薛 霞、周莉 莉、杨昊、卢 兰香、王艳 丽、刘桂 亮、张艳 侠。I DB37/T 30322017 化 妆品中 苯菌灵和 多菌灵 的测定 液相色 谱-串联质 谱法 1 范围 本标准 规定 了化 妆品 中苯 菌灵和 多菌 灵的 液相 色谱-串联质 谱测 定方 法。本标准 适用 于膏 霜类、乳 液和液 体化 妆品 中苯 菌灵 和多菌 灵的 测定。本标准 的检 出限 为1 g/kg。2 规范性 引用 文件 下 列 文件 对于 本文 件的 应用 是 必不 可少 的。凡是 注日 期 的引 用文 件，仅所 注日 期 的版 本适 用于本文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB/T 6682 分析 实验 室用水 规 格和 试验 方法 3 原理 试样中 加入 甲醇-盐酸 水溶液，恒 温水 浴振 荡使 苯菌灵 完 全转 化为 多菌 灵，超声 波 提取，经液-液分配除去 脂溶性 杂质，以阳 离子交 换固相 萃取 柱富集、净化 后，用 液相 色谱-串 联质谱 仪测定 和确 证，外标法定 量。4 试剂与 材料 除非另 有说 明，所有 试剂 均为分 析纯，水 为GB/T 6682规 定的 一级 水。4.1 甲醇：色谱 纯。4.2 正己烷。4.3 甲酸。4.4 氨水。4.5 盐酸。4.6 乙腈：色谱 纯。4.7 二氯甲 烷：色谱 纯。4.8 0.01 mol/L 盐酸 溶液：移取 0.9 mL 盐 酸，用水 稀释至 1 L。4.9 0.1%甲酸 甲醇 溶液：取1 mL 甲酸，用 甲醇 稀释 至1 L。4.10 0.1%甲 酸水 溶液：取 1 mL 甲酸，用 水稀 释至1 L。4.11 初始比 例流 动相：量 取 30 mL 0.1%甲 酸甲 醇溶 液（4.9）和 70 mL 0.1%甲酸 水 溶液（4.10）混合均匀。4.12 提 取 液：甲醇和 0.01 mol/L 盐酸 溶液（4.8）等 体积 混 合。4.13 0.2%甲酸 水溶 液：量取2 mL 甲酸，用 水稀 释至 1 L。4.14 5%氨水 甲醇 溶液：量 取5 mL 氨水 和95 mL 甲醇，混 匀，用 前配 制。1 DB37/T 30322017 4.15 阳离子 交换 固相 萃取 柱：混合型 阳离 子交 换固 相萃 取柱，基质 为苯 磺酸 化的 聚苯乙 烯-二乙 烯基苯高聚 物，60 mg，3 mL，或 相 当者。使 用前 依次用5 mL 甲 醇、5 mL 水进 行活化。4.16 标准物 质：多菌 灵（CAS 10605-21-7）纯 度不 低于 99.0%；苯菌 灵（CAS 107804-35-2）纯 度不低于 98.0%。4.17 多菌灵 标准 储备 溶液：称 取适量 多菌 灵标 准品，用 甲醇-0.1 mol/L 盐酸 溶液（1:9，v:v）溶解并配制 成 100 g/mL 的标准 储 备液。-18 避光 保存，有效期 6 个月。4.18 苯菌灵 工作 溶液：称取 适 量苯菌 灵标 准品，用甲 醇 溶解并 配制 成 100 g/mL 的溶液。再用 初始 比例的流 动相（4.11）逐 级稀 释 10 g/mL 和100 ng/mL 的溶 液。临用 现配。4.19 微 孔 滤膜：有 机相，孔径0.22m。5 仪器和 设备 5.1 液相色 谱-串 联四 级杆 质谱仪：配有 电喷 雾离 子源 器。5.2 固相萃 取装 置。5.3 电子分 析天 平：感量 分别 为0.1 mg 和 0.01 g。5.4 超声波 清洗 器。5.5 涡旋混 合器。5.6 离 心 机，最高 转速 不低于6000 r/min。5.7 氮气吹 干仪。5.8 恒温水 浴振 荡器。6 测定步 骤 6.1 试样处 理 6.1.1 膏霜类 化妆 品提 取 称取已 粉碎 并混 匀的 试样2 g（精确 至0.01 g）于 50 mL 具塞塑 料离 心管 中，加 入25 mL提 取 液（4.12），涡旋混 合2 min，60 下 振荡1 h，再 超声波 提取15 min。取出冷 却至 室温，6000 r/min离心10 min，准确移 取15 mL 上清 液于50 mL 离心 管中，用15 mL正 己烷萃 取，静置 分层，弃 去正己 烷相，用10 mL正己烷再萃 取一 次，重复 上述 操作，甲醇-水相 备用。6.1.2 液体、乳液 化妆 品提 取 称取已 混匀 的试 样2 g（精确 至0.01 g）于25 mL容量瓶 中，用 提取 液（4.12）定容至 刻度，摇 匀，涡旋混 合2 min，全部 转移至50 mL 具塞 塑料离 心管，以下步 骤同6.1.1“60下振 荡1 h，甲醇-水相备用”。6.1.3 净化 准确移 取10 mL正 己烷 萃取过 的 甲醇-水相（6.1）转 移至固 相萃取 柱（4.15）中，弃 去流出 物。依次用5 mL 0.2%甲酸 水溶 液（4.13）和5 mL甲 醇淋 洗，抽 至近 干后，用5 mL 5%氨水 甲醇 溶液（4.14）洗脱。洗脱 液于40 氮气吹 浓 缩至 近干，用1 mL初始 比 例的 流动 相（4.11）定容，涡旋 混合1 min，经微孔滤 膜（4.20）过 滤后，供液 相色 谱-串联 质谱 仪 测定。6.2 基质空 白溶 液的 制备 2 DB37/T 30322017 称取2 g（精 确至0.01g）阴 性 试样，以 下按6.1 操作，制 备基 质空 白溶 液。6.3 多菌灵 基质 标准 溶液 的制 备 准确移 取适 量多 菌灵 标准 储备液，用 基质 空白 溶液（6.3）稀释 成多 菌灵 浓度 分别 为1.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL 的基 质标 准 溶液。6.4 仪器参 考条 件 6.4.1 液相色 谱参 考条 件 参考条 件如 下：a)色谱柱：C18 柱，50 mm2.1 mm(i,d)，1.8 m，或其他 性能 相当 者；b)流动相：0.1%甲酸甲醇溶 液（A）、0.1%甲酸水溶 液（B），梯度条 件：0min3min：保持30%A，4min：线 性增至100%A，保 持至 6min，6.1min：30%A；c)流速：0.2 mL/min；d)柱温：25；e)进样体 积：10 L。6.4.2 质谱条 件参 考条 件 参见附 录A。6.4.3 空白试 验 除不加 试样 外，均按 上述 测定步 骤进 行。应确 认不 含有干 扰被 测组 分的 物质。6.5 测定 将基质 标准 溶液 和试 样溶 液在相 同的 条件 下进 样测 定，若 试样 溶液 和基 质标 准 溶液质 量色 谱图 中 与多菌灵 的保 留时 间一 致，定性定 量离 子信 噪比 均大 于3，且 定性 离子 对的 相对丰 度 偏差 符合 表1的规 定，则 可 判定 试样 中检 出多 菌灵（或 苯菌 灵）。以基 质标准 溶 液中 多菌 灵定 量离 子对 的 峰面 积对 相应 的浓度绘制标 准工 作曲 线，外标 法定量。典 型质 量色 谱图 见附录B。表1 定性相 对离 子丰 度的 最大 允许偏 差 相对离子丰度 50%20%50%10%20%10%允许的相对偏差 20%25%30%50%6.6 结果计 算 6.6.1 试样中 苯菌 灵和 多菌 灵的 含量（以多 菌灵 计）按式（1）计 算：1000c21=V mV VX.(1)式中：X 试样 中苯 菌灵 和多菌 灵 的含 量（以多 菌灵 计），单位 为毫 克每 千克（g/kg）；c 由 标准 曲线 得到 的 试样溶 液中 多菌 灵的 浓度，单位 为纳 克每 毫升(ng/mL)；V 试样 溶液 最终 定容的 体 积，单位 为毫 升（mL）；m 试样 质量，单 位为克（g）；3 DB37/T 30322017 V1 加入 提取 液总 体积，单 位为 毫升（mL）；V2 过固 相萃 取柱 的提取 液 体积，单 位为 毫升（mL）。6.6.2 以重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的算 术平 均值表 示，结果 保留 两位 有效数 字。7 精密度 在重复 性条 件获 得的 两次 独立测 定结 果的 绝对 差值 不得超 过算 术平 均值 的10%。4 DB37/T 30322017 A A 附 录 A（资料 性附 录）质谱参 考条 件 质谱参 考条 件：a)电离方 式：电喷 雾电 离，正离子；b)毛细管 电压：3500 V；c)干燥气 温度：325；d)鞘气温度：350；e)干燥气 流量：10 L/min；f)鞘气流 量：10 L/min；g)雾化气 压力：35 psi；h)喷嘴电 压：500 V；i)扫描方 式：多反 应监 测（MRM）；j)其他质 谱参 数见 表 A.1。表A.1 苯菌灵 和多 菌灵 的主 要质 谱参数 化合物 母离子（m/z）子离子（m/z）裂解电压/v 驻留时间/ms 碰撞电压/eV 苯菌灵 292.0 192.1a 100 80 5 160.0 100 80 25 多菌灵 192.1 160.0a 80 80 15 132.0 80 80 35 a 定量离子。5 DB37/T 30322017 B B 附 录 B（资料 性附 录）多菌灵 和苯 菌灵 多反 应监 测色谱 图 图B.1 苯菌灵 和多 菌灵 标样 的多 反应监 测色 谱图 _ 4x100.0.0.1+ESI MRM Frag=100.0V CID*(192.1-132.0)0419_djl-1.d 1.441 14x10246+ESI MRM Frag=100.0V CID*(192.1-160.0)0419_djl-1.d 1.441 14x10123+ESI MRM Frag=80.0V CID*(291.0-160.0)0419_bjl-2.d 5.361 14x10123+ESI MRM Frag=80.0V CID*(291.0-192.1)0419_bjl-2.d 5.361 1Counts vs.Acquisition Time(min)0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 6.5 7 7.5 8 8.56