ICS 71.100.10 Y 42 DB37 山东省地方标准 DB37/T 30372017 化妆品中 乌头碱及 其盐的测 定 液相色谱-串联质谱 法 Determination of aconitines and aconitines salts in cosmetics Liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2017-10-25 发布 2017-11-25 实施 山东省质量技术监督局 发布 DB37/T 30372017 前 言 本标准 按照GB/T 1.12009 给出 的规 则起 草。本标准 由山 东省 质量 技术 监督局 提出。本标准 由山 东省 化妆 品标 准化技 术委 员会 归口。本标准 起草 单位：山 东省 产品质 量检 验研 究院、山 东省食 品药 品检 验研 究院。本标准 主要 起草 人：周莉 莉、崔 玉花、李 丽、高勇、邹惠 玲、许世 明、张卉、祝建 华。I DB37/T 30372017 化 妆品中 乌头碱及 其盐的 测定 液 相色谱-串 联质谱 法 1 范围 本标准 规定 了化 妆品 中乌 头碱、新乌 头碱 和次 乌头 碱及其 盐的 液相 色谱-串联质 谱 测定 方法。本标准 适用 于化 妆品 中乌 头碱、新乌 头碱 和次 乌头 碱及其 盐的 定性 确证 和定 量测定。本标准 液相 色谱-串 联质 谱 法乌头 碱、新乌 头碱 和次 乌头碱 的检 出限 均为2.0 g/kg。2 原理 试样用 少量浓 氨水 溶解，乙腈提 取，冰 水浴 超声，离心，用液相 色谱-串联 质 谱法测 定，外 标法 定量。3 试剂和 材料 除另有 说明 外，所用 试剂 均为分 析纯，水 为二次 去 离子水 或重 蒸水。3.1 乙腈：色谱 纯。3.2 氨水。3.3 0.05%（v/v）氨 水溶 液：量取 0.5 mL 氨水，用 超纯水 稀 释并 定容至 1 L。3.4 乌头碱 标准 品（aconitine,CAS 号 302-27-2，C34H47NO11）：纯 度大 于等于98%。3.5 新乌头 碱标 准品（mesaconitine,CAS 号 2752-64-9，C33H45NO11）：纯度 大于 等于 98%。3.6 次乌头 碱标 准品（aconitine,CAS 号 6900-87-4，C33H45NO10）：纯 度大 于等于 98%。3.7 标 准 储备 溶液：分别 称取适 量 标准 品，用 甲醇 溶解，分别 配制 成100 g/mL 的 标 准储 备液。-18 避光保 存。3.8 混合标 准中 间溶 液（1 g/mL）：分 别准 确吸取 1.00 mL 各标 准储 备溶 液（3.7）至 100 mL 容 量瓶中，用 甲醇 稀释 至刻 度，1mL 该溶 液分 别含 1 g 的乌 头 碱、1 g 的新 乌头 碱和 1 g 的次 乌头 碱。3.9 混合标 准工 作溶 液：根据 需要，用初 始比 例的 流动 相由混 合标 准中 间溶 液（3.8）稀释 成合 适的混合标准 工作 溶液，现 用现 配。3.10 0.22 m 有机 相过 滤膜。4 仪器和 设备 4.1 液相色 谱-串联 质谱 联用 仪：配有 电喷 雾（ESI）电离源。4.2 分 析 天平：感量 0.1 mg 和0.01 g 各一 台。4.3 涡旋混 合器。4.4 超声波 提取 器。4.5 离心机，大 于3000 r/min。5 样品制 备 1 DB37/T 30372017 称取化 妆品试 样0.5 g（精确 至0.01 g）于30 mL离心管 中，加 入1 mL浓氨 水，振摇，旋涡1 min 后加入10 mL乙腈，冰水 浴超声 波 提取10 min，3000 r/min离心5 min，静置 过 滤至10 mL 刻度 管中，氮吹至管中 溶液少 于5 mL，用 乙腈定 容至5.0 mL，再用0.05%（v/v）氨 水溶 液（3.3）定 容至10.0 mL，旋涡1 min，样 液经0.22 m 滤膜过 滤后供 液相 色谱 串联质 谱测定。对 乌头碱 及其盐 含量较 高的 样品，适当稀 释后 进样。6 测定 6.1 标准工 作曲 线制 备 用相应的 空白样品 基质提 取液制备 适当的混 合标准 浓度系列，按6.2和6.3规 定测定并 制备标准 曲线。6.2 液相色 谱条 件 以下为 液相 色谱 参考 条件：a)色谱柱：C18 柱，50 mm2.1 mm(i.d.)，1.7 m，或其他 性能 相当 者；b)流动相 及洗 脱条 件见 表 1；c)流速：0.3 mL/min；d)柱温：40；e)进样量：5 L。表1 流动相 及梯 度洗 脱条 件 时间/min 流动相 A（乙腈）流动相 B（0.05%氨水）0.00 50 50 1.00 50 50 3.00 80 20 4.00 80 20 4.10 50 50 6.00 50 50 6.3 串联质 谱条 件 参见附 录A。6.4 液相色 谱 串联 质谱 测定 6.4.1 定性确 证 按照按 照液相 色谱-串联 质 谱条件 测定样 品和 标准工 作溶液，样品 中待 测物的 保留时 间与标 准溶 液中待测 物的保 留时 间偏差 在2.5%之 内。每种化 合 物的质 谱定性 离子 必须出 现，至 少应包 括一 个母 离子和两 个子 离子，而且 同 一检测 批次，对同 一化 合 物，样品 中目 标化 合物 的 两个子 离子 的相 对丰 度比 与浓度相 当的 标准 溶液 相比，其允 许偏 差不 超过 表2 规 定的范 围。2 DB37/T 30372017 表2 定性时 相对 离子 丰度 的最 大允许 偏差 相对离子丰度/%50 2050 1020 10 允许相对偏差/%20 25 30 50 6.4.2 定量测 定 按照外 标法 进行 定量 计算。在上述 色谱 条件 下，乌 头碱、新乌头 碱和 次乌 头碱 参考 保留时 间约 为1.99 min、1.28 min 和2.84 min。标准 溶液 的液 相色 谱-电 喷雾质 量色 谱图 参见 附录B 中的图B.1。6.5 结果计 算 利用数 据处 理系 统计 算或 按式（1）计算 试样 中乌 头 碱或新 乌头 碱或 次乌 头碱 含量：10001000=mV cX.(1)式中：X 试 样中 被测 组分 的含量，单位 为微克每 千克（g/kg）；c 由 标准 曲线 得到 的被测 组 分溶 液浓 度，单 位为 纳克每 毫升(ng/mL)；V 试样 溶液 最终 定容 的 体积，单位 为毫 升（mL）；m 试 样质 量，单位 为克（g）。7 方法检 出限 本方法 乌头 碱、新乌 头碱 和次乌 头碱 的检 出限 均为2.0 g/kg。8 回收率 在添加 浓度2.0 g/kg200.0 g/kg范围 内，回收率在85%105%之 间，相对 标准 偏差 小于10%。9 允许差 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的绝 对差 值不得 超过 算术 平均 值的10%。3 DB37/T 30372017 A A 附 录 A（资料 性附 录）质谱参 考条 件 以下为 质谱 参考 条件：a)电离方 式：电喷 雾电 离，正离子。b)毛细管 电压：3.0 kV。c)离子源 温度：110。d)脱溶剂 气温 度：380。e)脱溶剂 气（N2）流 量：600 L/h。f)锥孔气（N2）流 量：50 L/h。g)碰撞室 压力：3.010-3 mbar。h)扫描方 式：多反 应监 测（MRM）。i)母离子、子 离子、锥 孔电 压及碰 撞能 量见 表A.1。表A.1 母离子、子 离子、锥 孔电 压及碰 撞能 量 待测物 保留时间/min 母离子（m/z）锥孔电压/V 子离子（m/z）碰撞能量/eV 乌头碱 1.99 646 45 367.9 45 586.1a 35 新乌头碱 1.28 632 45 354 45 572a 35 次乌头碱 2.84 616 45 524 40 556a 35 a 为定量离子。4 DB37/T 30372017 B B 附 录 B（资料 性附 录）标准品 液相 色谱 电 喷雾 质量色 谱图 图B.1 乌头碱、新 乌头 碱和 次乌 头碱混 合标 准溶 液的 液相 色谱 电喷 雾质 量色 谱图 _ Time1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50%01001.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50%01001.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50%01001.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50%01001.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50%01001.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50%01003:MRM of 2 Channels ES+616 556(hypaconitine)3.54e52.843:MRM of 2 Channels ES+616 524(hypaconitine)1.82e52.842:MRM of 2 Channels ES+646 586.1(aconitine)8.61e51.992:MRM of 2 Channels ES+646 367.9(aconitine)1.63e51.991:MRM of 2 Channels ES+632 572(mesaconitine)9.45e51.281:MRM of 2 Channels ES+632 354(mesaconitine)2.04e51.28Time1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50%01001.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50%01001.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50%01001.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50%01001.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50%01001.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50%01003:MRM of 2 Channels ES+616 556(hypaconitine)3.54e52.843:MRM of 2 Channels ES+616 524(hypaconitine)1.82e52.842:MRM of 2 Channels ES+646 586.1(aconitine)8.61e51.992:MRM of 2 Channels ES+646 367.9(aconitine)1.63e51.991:MRM of 2 Channels ES+632 572(mesaconitine)9.45e51.281:MRM of 2 Channels ES+632 354(mesaconitine)2.04e51.285