ICS 71.100.10 Y 42 DB37 山东省地方标准 DB37/T 30302017 化妆品中-羟基酸 的测定 高效液相 色谱法 Determination of-hydroxy-acid in cosmetics by high performance liquid chromatography method 2017-10-25 发布 2017-11-25 实施 山东省质量技术监督局 发布 DB37/T 30302017 前 言 本标准 按照GB/T 1.12009 给出 的规 则起 草。本标准 由山 东省 质量 技术 监督局 提出。本标准 由山 东省 化工 标准 化技术 委员 会归 口。本标准 起草 单位：山 东省 产品质 量检 验研 究院、山 东省食 品药 品检 验研 究院。本标准 主要 起草 人：张娟、霍艳 敏、刘桂 亮、张艳 侠、郑 红、公丕 学、卢兰 香、别 梅。I DB37/T 30302017 化 妆品中-羟基酸 的测定 高效液 相色谱 法范围 1 范围 本标准 规定 了高 效液 相色 谱测定 化妆 品中 酒石 酸、乙醇酸、苹 果酸、乳酸和 柠 檬酸五 种-羟 基酸的方法。本标准 适用 于护 肤膏 霜、洗面奶(膏)、润 肤乳 液、化妆水 等化妆 品中 酒 石酸、乙醇 酸、苹 果酸、乳酸和柠 檬酸 五种-羟基 酸的 测 定。本标准 检出 限：酒 石酸0.1 g/kg、乙 醇酸0.1 g/kg、苹果酸0.1 g/kg、乳酸0.12 g/kg、柠 檬酸0.12 g/kg。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日 期 的引 用文 件，仅所 注日 期 的版 本适 用于本文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB/T 6682 分析 实验 室用水 规 格和 试验 方法 3 原理 试样用水 超声 提取，经正 己烷萃 取除 杂质，以 高效 液相色 谱分 离，紫外 检测 器检测，以保 留时间定性，外标 法定 量。4 试剂和 材料 除非另 有说 明，所有 试剂 均为分 析纯，水 为GB/T 6682规定 的一 级水，其 它试 剂和材 料主 要包 括：a)甲醇：色谱 纯；b)正己烷；c)磷酸二 氢铵；d)磷酸：优级 纯；e)0.1 mol/L 磷酸 二氢 铵缓冲 溶 液：称取 11.503 g 磷酸 二 氢铵于 1000 mL 烧 杯，加水 950 mL，溶 解，用 磷酸调 pH 至2.45，转 移至1000 mL 容量 瓶，用水 定容；f)标准品：DL-酒 石 酸（CAS:133-37-9）、乙 醇 酸（CAS:79-14-1）、DL-苹 果 酸（CAS:6915-15-7）、乳酸（CAS:50-21-5）、柠 檬酸（CAS:77-92-9），纯度 99.0%；g)标准储 备溶 液：分 别准 确 称取 100 mg(精确 至0.1mg)酒石 酸、乙 醇酸、苹果 酸、乳酸、柠檬 酸于100.00 mL 容量 瓶中，用 水 溶解，定 容，配成 1 mg/mL 的 标准 储备 液，4 保存，可使 用3个月；h)标准工作溶液：将标准储备溶液配制成 200 g/mL 的混合标准溶液，用水依次稀释成 20 g/mL、50 g/mL、80 g/mL、100 g/mL 的系列 标 准溶 液，使用 前配 制；i)微孔滤 膜：水相，孔 径 0.45 m。1 DB37/T 30302017 5 仪器和 设备 仪器和 设备 主要 包括：a)高效液 相色 谱仪：具 二极 管阵列 检测 器或 紫外 检测 器；b)天 平：感量 0.01 g、0.1 mg；c)涡旋混 合器；d)超声波 清洗 器；e)离 心 机：转速 不低于 10000 r/min；f)pH 计：精度 0.01。6 分析步 骤 6.1 试样的 处理 准确称 取混 匀试 样2 g（精确 至0.01 g）于25 mL 具塞刻度管 中，加入15 mL 水，涡旋混 合1 min，超声提取15 min，用水 定容，混匀、静 置，取10 mL 上清液转 入50 mL 具塞离心 管 中，加入10 mL 正己烷萃取除杂 质，在10000 r/min 离心5 min，弃去 正己 烷层，水相 再用5 mL 正己烷萃 取一次，重 复上 述操 作，水相经 微孔 滤膜 过滤，供 高效液 相色 谱测 定。6.2 液相色 谱参考 条件 色谱参 考条 件：a)色谱柱：Atlantis T3 C18 250 mm4.6 mm(i,d)，5 m，或 性能 相当 者；b)流动相：0.1 mol/L 磷酸 二氢铵 缓冲 溶 液；c)流速：0.8 mL/min；d)柱温：35；e)进样量：50 L；f)检测波 长：紫 外检 测器 检测 波 长设为 214 nm。标样谱 图 见附录 A。6.3 测定 将标准 工作 溶液 按照 浓度 由低到 高的 顺序 进样 测定，以各 组分 峰面 积对 其浓 度绘制 标准 曲线。试样经测定，以 各组分 保留 时间 定 性，外表 法定 量。经 测定超 出标 准曲 线样 品经 适当稀 释后 再进 样分 析。6.4 结果计算 6.4.1 试样中 每种 组 分的 含量 按式（1）计算：1000=mV Cwi.(1)式中：wi 试样 中某种 组 分的含量，单位 为克 每千 克（g/kg）；C 由标 准曲 线得 到的试 样 溶液 中该组分 的质量 浓度，单 位为 微克 每毫 升（g/mL）；V 试样 溶液 的体 积，单位为 毫升（mL）；m 试样 质量，单 位为克（g）。6.4.2 计算结 果以 重复 性条 件下 获得的 两次 独立 测定 结果 的算术 平均 值表 示，保留 两位有 效数 字。2 DB37/T 30302017 7 精密度 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的绝 对差 值不得 超过 算术 平均 值的10%。3 DB37/T 30302017 A A 附 录 A（资料 性附 录）-羟基 酸标 样的 色谱 图 说明：1酒石酸；2乙醇酸；3D-苹果酸；4乳酸；5柠檬酸；6L-苹果酸。图A.1-羟 基酸 标样 的色 谱图 _ 4