ICS 65.020.30 CCS B40 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 2154 2021 瘤胃保护 性氨基酸 稳定性检 验 Test method for the stability of rumen-protected amino acid 2021-04-15 发布 2021-05-15 实施 内蒙古自 治区市 场 监督管理 局 发 布 DB15/T 2154 2021 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标准 化工 作导则 第1 部分：标准化 文件 的结构 和起草 规则 的规 定起草。本文件 由内 蒙古 自治 区畜 牧业标 准化 技术 委员 会（SAM/TC 19）归口。本文件 起草 单位：内 蒙古 自治区 农牧 业科 学院、伊 金霍洛 旗文 兵农 业机 械服 务企业。本文件 主要起 草人：孙海 洲、桑 丹、金 鹿、李胜利、张春 华、张 崇志、刘和 平、王 泽平、王永 荣、韩文兵、刘 要仙、赵 晓华、王东 兵。DB15/T 2154 2021 1 瘤胃保护 性氨基 酸稳定性 检验 1 范围 本文件 规定 了瘤 胃保 护性 氨基酸 稳定 性检 验方 法。本文件 适用 于瘤 胃保 护性 氨基酸 测定。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB 5009.124 食 品安 全国 家标准 食 品中 氨基 酸的 测 定 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。3.1 RPAA 释 放率 rumen protected amino acid release rate RPAA 经 消化，被 降解 的氨 基酸含 量占RPAA 中氨 基酸 含量的 百分 比。4 试剂和 材料 4.1 试剂 4.1.1 磷酸氢 二钠（Na2HPO4）：优级纯。4.1.2 碳酸氢 钙（NaHCO3）：优 级纯。4.1.3 氯化钠（NaCl）：优 级纯。4.1.4 氯化钾（KCl）：优 级纯。4.1.5 氯化钙（CaCl2）：优级 纯。4.1.6 硫酸镁（MgSO4）：优级 纯。4.1.7 人工唾 液：将9.30 g 磷酸 氢二钠、9.80 g 碳酸 氢钙、0.47 g 氯 化钠、0.57 g 氯化钾、0.04 g 氯化钙 及0.12 g 硫 酸镁 先 溶于少 量蒸 馏水 中，再定 容至 1000 mL 水 中。4.1.8 过瘤胃 保护 性氨 基酸（RPAA）：购买 产品。4.2 材料 尼 龙 袋：选用 孔径 为50 m 的 尼龙 布，制成 长 宽 为 6 cm 10 cm 的 尼 龙袋，用 细 涤纶 线双 线缝合，袋 底部 两角 呈钝 圆形，散边 用烙 铁烫 平或 用酒 精灯烤 焦。5 仪器和 设备 DB15/T 2154 2021 2 5.1 分析天 平：感 量0.0001 g。5.2 烘箱：25 300。5.3 恒温水 浴摇 床：25 99.9。6 测定步 骤 6.1 RPAA 在人 工唾 液中 稳定 性 检验 准确称 取0.5 g RPAA，于50 mL具塞 试管 底部，加入20 mL 人工 唾液（4.1.7），盖 紧 试管塞，在39、100 转/分的恒 温水 浴摇 床 内消化2 h，4 h，8 h，12 h，16 h 和24 h 后 分别取 出，定 性滤纸 过滤，蒸 馏水冲洗3 遍，将滤渣 置于65 烘箱 中烘 干，按 照GB 5009.124 规定 的方 法测定 不 同时间 点残渣 中的 氨基酸含量，计 算氨 基酸 释放 率。6.2 RPAA 在瘤 胃液 中稳 定性 检 验 选择孔 径为50 m 的尼龙 布，用 细涤纶 线双 线缝合，制成 长宽 为6 cm 10 cm 的尼 龙袋，尼龙 袋边缘用 烙铁熨 烫使 其无散 边，用 油性笔 标号，放入 瘤胃内72 h，取出、洗净、65 烘干，备 用。准 确称取5 g RPAA 放 入尼 龙袋 内，将有 待测 样品 的样 袋交 叉夹于 一根 半软 塑料 管底 端的夹 缝中，用 橡皮 筋 缠绕固定,于 晨饲 后2 h 投入 瘘管羊 瘤胃 内，用 塑料管 上端的 尼龙 线与 瘘管 盖固 定。将待 测样 品在 瘘管 羊 瘤胃中消 化2 h，4 h，8 h，12 h，16 h 和24 h 后分 别取 出，用 中等流 速自 来水 冲洗1 min，将滤 渣置 于65 烘箱中 烘干，按照GB 5009.124 规 定的方 法测 定不同 时间点 内尼龙 袋中 残留的 氨基酸 含量，计算 氨基 酸释放率。6.3 RPAA 在十 二指 肠中 稳定 性 检验 采集绵 羊十 二指 肠液200 mL，经 四层 纱布 过滤 后取 滤 液装入250 mL 三角 瓶内，准 确称取0.5 gRPAA，放入50 mL 具塞 试管 底部，盖紧试 管塞，在39、100 转/分 恒温 水浴 摇床 内消 化2 h，4 h，8 h，12 h，16 h 和24 h 后分 别取 出，定 性滤纸 过滤，蒸 馏水 冲洗3 遍，按 照GB 5009.124 规定 的方法 测定 残渣 中的 氨基酸含 量，计算 氨基 酸释 放率。6.4 平行试 验 每试样 称取 两个 平行 样进 行测定，取 平均 值为 分析 结果。7 结果计 算 RPAA 在 人工 唾液、瘤 胃液 及十二 指肠 液中 的释 放率 按公式（1）计 算。（1）式中：RRPAA 的释 放率，单 位 为百分 比（%）；w1RPAA 中氨 基酸 含量，单位 为纳 摩尔 每毫 升（nmol/ml）；w2 消化 后残 留物 中氨 基酸的 含量，单 位为 纳摩 尔每毫 升（nmol/ml）。取两次 测定 的算 数平 均值 作为结 果，保留 到小 数点 后一位。DB15/T 2154 2021 3 在重复 条件 下同 一样 品获 得的测 定结 果的 绝对 差值 不应超 过算 术平 均值 的10%。