ICS 11.220 B 41 DB21 辽 宁 省 地 方 标 准 DB21/T 3052 2018 口蹄疫病 毒 A 型抗体快速检 测方法 镧系荧光 免疫层析 法 The Rapid Detection Methods for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus Type A Lanthanide Fluorescence Immunochromatographic Assay 2018-10-30 发布 2018-11-30 实施 辽 宁 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB21/T 3052 2018 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规 范性 引用 文件.1 3 原理.1 4 仪 器与 试剂.1 4.1 仪器.1 4.2 试剂.1 5 样 品采 集与 处理.2 5.1 样品 的采 集.2 5.2 样品 的处 理.2 5.3 样品 的贮 存.2 6 检 测方 法.2 6.1 样品 稀释.2 6.2 加样.2 6.3 检测.2 6.4 有效 性判 定.2 7 结 果判 定.2 附录A（规 范性 附录）样品稀 释液 的配 置.4 DB21/T 3052 2018 II 前 言 本标准 按照GB/T 1.1 给出 的规则 起草。本标准 由辽 宁省 畜牧 兽医 局提出。本标准 由辽 宁省 畜牧 兽医 局归口。本标准 起草 单位：辽 宁省 动物医 学研 究院、辽 宁省 动物疫 病预 防控 制中 心。本标准 主要 起草 人：周晨 阳、申 贯男、杨 本勇、杨 洺扬、梁乔、李 蓉、张健、孙世 宇。DB21/T 3052 2018 1 口 蹄疫病 毒 A 型抗 体快速 检测方法 镧系 荧光免疫 层析法 1 范围 本标准 规定 了以 镧系 荧光 免疫层 析法 检测 牛、羊、猪血清 中的 口蹄 疫病 毒A 型 抗体的 检测 方法。本标准 适用 于牛、羊、猪 血清中 口蹄 疫病 毒A 型抗 体 水平的 快速 检测。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 所注 日期的 版本 适用 于 本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法 NY/T 541 兽医 诊断 样品 采集、保存 与运 输技 术规 范 3 原理 采用免 疫夹心 法和 镧系荧 光免疫 层析法 相结 合技术，检测 动物血 清样 本中的 口蹄疫 病毒A 型抗 体。将镧系 纳米荧 光微 球作荧 光示踪 物标记 口蹄 疫病毒A 型重组 抗原，血清 样本抗 体与镧 系纳米 荧光 微球 标记的口 蹄疫 病毒A型 重组 抗 原接触 形成 复合 物后，继 续 与硝酸 纤维 素膜 上检 测线 包被的 口蹄 疫病 毒A 型重组抗原 发生 反应，形 成抗 原-抗体-荧 光微 球标 记抗 原免疫 复合 物，最后 用荧 光检测 仪读 取检 测 卡 上 的 荧光信号。4 仪器与 试剂 4.1 仪器 4.1.1 镧系荧 光 检 测仪：激 发波 长为 400 nm 20 nm，检 测波长 为615 nm 10 nm。4.1.2 单道可 调移 液器：10 L 100 L，0.5 L 10 L。4.1.3 分析天 平：感 量 0.0001 g。4.1.4 离心机。4.1.5 冰箱：2 8，-20。4.2 试剂 4.2.1 样品稀 释液：见 附 录 A。4.2.2 口蹄疫 病 毒A 型 抗体 荧光 免疫试 剂卡：镧 系荧 光微 球标记 的口 蹄疫 病 毒 A 型 重组抗 原和 鸡IgY埋置在 标记 物垫 内；硝酸 纤维膜 上的 测试 线（T）和 参考线（C）分 别包 被口 蹄 疫病 毒 A 型 重组 抗原 和羊DB21/T 3052 2018 2 抗鸡IgY 的IgG。（见图1）图1 口蹄疫 病 毒A 型 抗体 镧系 荧光免 疫层 析卡 示意 图 5 样品采 集与 处理 5.1 样品的 采集 应按照NY/T 541 中的 规定 进行，并 做好安 全防 护。按常规 方法 用干 燥、洁净 的离心 管或 适当 容器 采集3 mL 5 mL 血 液。5.2 样品的 处理 血液样 本用 离心 机3000 r/min离心3 min，分离 血清，血清 量不 少于500 L。5.3 样品的 贮存 血清样 本在2 8 冷 藏可保 存24 h，如需 长期 保存应 置-20 或-80。6 检测方 法 6.1 样品稀 释 将待检 血清 样本 用样 品稀 释液进 行 50 倍 稀释。6.2 加样 将 镧系 荧光 免疫 层析 卡 置 于干净 平坦 的台 面上，用 移液器 吸取 已稀 释好 的待 检样本 垂直 滴 加80 L 于加 样孔 内。6.3 检测 避光层 析15 min 20 min，30 min 内用 镧系 荧光 检 测仪检 测，读取 效价。6.4 有效性 判定 控制线（C 线）检测 到荧 光 信号，实验 结果 有效。7 结果判 定 DB21/T 3052 2018 3 效价128 时，判为 阳性；效价 64 时，判 为阴 性；效价 在 64 128 之间 时，判为 可疑。_ DB21/T 3052 2018 4 A A 附 录 A（规范 性附 录）样品稀 释液 的配 置 A.1 称取 Na2HPO4 12H2O 4.02 g A.2 称取 NaH2PO4 2H2O 0.66 g A.3 称取 NAN3 1.5 g A.4 称取 硫酸 葡聚 糖（MW:40000）1.5 g A.5 量取Tween-201 L 3.75 mL A.6 800 mL 双 蒸水 放入1 L 烧杯。A.7 A.1、A.2、A.3 同时 放入A.6 烧 杯中 搅拌 溶化。A.8 A.4 加入A.7 烧 杯中 混匀。A.9 A.5 加入A.8 烧 杯中 混匀。A.10 用双 蒸水 将A.9 烧杯 溶液定 容至1 L。A.11 混匀 后分 装，置4 备用。_ _