ICS 65.020.20 CCS B 05 DB42 湖北省地方标准 DB42/T 1698 2021 辣椒疮痂 病抗性鉴 定技术规 程 Technical regulation for evaluation of pepper resistance to bacterial spot 2021-06-21 发布 2021-07-21 实施 湖 北 省 市 场 监 督 管 理 局 发 布 DB42/T 1698 2021 DB42/T 1698 2021 I 目 次 前 言.II 1 范围.1 2 规范 性引 用文 件.1 3 术语 和定 义.1 4 接种.1 5 抗性 鉴定 接种 操作.2 6 病情 调查 方法.3 7 抗病 性评 价.4 8 记载 表格.4 附录 A（资 料性）辣椒疮 痂病 病原 菌和 生理 小种.6 DB42/T 1698 2021 DB42/T 1698 2021 II 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标准 化工 作导则 第1 部分：标准化 文件 的结构 和起草 规则 的规 定起草。本文件 的某 些内 容可 能涉 及专利，本 文件 的发 布机 构不承 担识 别专 利的 责任。本文件 由 湖 北省 农业 科学 院经济 作物 研究 所 提 出。本文件 由 湖 北省 农业 农村 厅 归口。本文件 起草 单位：湖 北省 农业科 学院 经济 作物 研究 所、湖 北省 蔬菜 办公 室、华中农 业大 学。本文件 主要 起草 人：李宁、尹延 旭、王飞、高 升华、余楚 英、姚明 华、袁尚 勇、焦 春海、张 成、张余洋。本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，联系电话：027-87665821，邮 箱：。对 本文 件 的有关 修改 意见 建议 请反 馈至湖 北省 农业 科学 院经 济作物 研究 所，联系 电话：027-87380819，邮箱：。DB42/T 1698 2021 DB42/T 1698 2021 1 辣 椒疮痂 病抗性鉴 定技术 规程 1 范围 本文件 规定 了辣 椒疮 痂病 抗性鉴 定的 术语 和定 义、接种、抗性 鉴定 接种 操作、病情 调查 方法、抗 病性评价 以及 记载 表格。本文件 适用 于辣 椒疮 痂病 的抗病 性鉴 定。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。NY/T 1858.5 番茄 主要 病 害抗病 性鉴 定技 术规 程 第5部 分：番茄 抗疮 痂病 鉴 定技术 规程 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。3.1 感病对 照 disease-susceptible control 为 辣椒 品种Early Cal Wonder（ECW，感疮 痂病 品种），接 种后 的病 情指 数 DI 50。3.2 抗病对 照 disease-resistant control 为 辣椒 材料ECW-20R（含 Bs2 基 因），接 种后 的病 情 指数 DI 20。4 接种 4.1 病原物 的纯 化与 保存 4.1.1 病原物 的纯 化 采集田 间具 有典 型疮 痂病 症状的 病叶，用 常规 组织 平板稀 释法 从叶 部病 斑上 分离病 原物。分 离物 经过培养 性状、菌 体形 态特 征、生 理生 化反 应、分子 生物学 鉴定 等确 认为 黄单 胞杆菌 属细 菌 菌 株，再 进 行分离物 纯化 和致 病性 测定。4.1.2 接种体 保存 短期保 存 将新 鲜菌 落转移 到保存 培养基 斜面 上，28 下培 养48 h 后，置4 下备用。长期 保存 将新鲜菌 液加 入已 灭菌 的脱 脂牛奶 中制 成 细 菌悬 浮液，经 冷冻 干燥 抽真 空后保 存于密 闭塑 料管 中，-20 以下的 冰箱 中长 期保 存。4.2 接种体 繁殖 和保 存 DB42/T 1698 2021 2 4.2.1 接种体 繁殖 用接种 针挑取 保存 的疮痂 病菌落，在NA 培养 基的平 板上划 线，置 于28 恒 温 培养箱 中培养36 h 48 h，选取边 缘清 晰、有 光泽、粘稠状 的单 菌落转 移到培 养基中28 恒温 震 荡培养16 h，加灭 菌蒸 馏水配制 成浓 度为21 08 cfu/mL 的 菌悬 液。5 抗性鉴 定接 种操 作 5.1 鉴定室 鉴定室 应具 备可 调节 温度、湿度 和光 照的 条件，创 造良好 的发 病环 境。5.2 设置对 照 设“ECW”辣 椒为感 病对 照 品种，“ECW-20R”辣椒 为 抗病对 照品种；接 种菌株Xcv23-1 为湖 北省辣椒 疮 痂 病 优 势 菌 株，鉴 定 为 生 理 小 种P0；辣椒-番 茄 疮 痂 病 菌 模 式 菌 株ICMP63（X.campestris pv.vesicatoria）为对 照菌 株（参见 附录A）。5.3 育苗 待鉴定 的辣椒 种子 经10%次 氯酸钠 溶液浸 种8 min 10 min，灭菌水 冲洗 干净后 置于28 的 恒温 培养箱中 催芽，露白 后播种 于育苗 穴盘中。穴 盘宜采 用50孔 穴盘，每穴 播种1 粒 种子。育苗基 质经121 高温蒸 汽灭 菌40 min。在20 30 温 室或 大棚 中 育苗，幼苗 应生 长健 壮、大小一 致。5.4 接种 5.4.1 接种时 期 在幼苗4片6片 真叶 期进 行接种。5.4.2 接种体 浓度 宜为 2 108 cfu/mL。5.4.3 鉴定设 计 鉴定材 料随 机排 列，每份 鉴定材 料重 复3 次，每 次 重复10株。5.4.4 接种方 法 5.4.4.1 注射法 接种 用去针 头的 注射 器将 菌悬 液注入 待鉴 定辣 椒的第3 片 到第4 片叶 背面，每 片叶 接 种一个 点，形成 直径为1 cm 2 cm 的 水浸 区域。以 接种 辣椒-番 茄疮 痂病 菌 模式菌 株ICMP63 为对 照，接种灭菌 水 为空 白对 照。5.4.4.2 喷雾法 接种 按照NY/T 1858.5 的方 法 执行。以喷洒 辣椒-番茄疮 痂病菌 模式菌 株ICMP63 为 对照，喷洒灭 菌水 为空白对 照。在鉴 定材 料数 量较少 情况 下宜 采用 注射 法，大 量材 料需 鉴定 情况 下宜采 用喷 雾法。5.4.5 接种后 的管 理 DB42/T 1698 2021 3 采用注 射接 种法 的，接种 后在温 度为28、相 对湿 度为75%90%、光照 强度 为30,000 lx 40,000 lx条件 下培 养。采用 喷雾 法接种 的，接种 后的 管理 参照NY/T 1858.5 的 方法 执 行。6 病情调 查方法 6.1 注射接 种法 病情 调查 6.1.1 调查时 间 接种后1 d 2 d 开始 调查。6.1.2 病情分 级 0级，观察 到的 叶片 有过 敏 坏死性 症状；1 级，观察 到 的叶片 无坏 死症 状。6.2 喷雾接 种法 病情 调查 6.2.1 调查时 间 喷雾接 种后7 d 开始 调查。6.2.2 病情分 级 参照NY/T 1858.5 的 病情 分 级，病 情分 级 的 相关 信息 见表1。表1 辣椒疮 痂病 的病 情分 级 病情级别 病情描述 0 全叶无病斑 1 病斑占叶片面积的10%3 病斑占叶片面积的11%25%5 病斑占叶片面积的26%50%7 病斑占叶片面积的51%6.2.3 病情记 载 调 查记载每一鉴定植株的病情级别，计算病情指 数（Disease index:DI），并 按 照NY/T 1858.5的方法 执行。病情分 级按 公式（1）计 算：=()100(1)式中：DI 病 情指 数；s 各病 情级 别的 代表 数值；n 各病 情级 别的 植株 数值；N 调查 总植 株数值；S 最 高病 情级 别的 代 表数值。DB42/T 1698 2021 4 7 抗病性 评价 7.1 注射接 种法 抗性 评价 0级，为抗 病；1 级，为感 病。7.2 喷雾接 种法 抗性 评价 7.2.1 抗病性 评价 标准 依据 鉴 定材 料3 次重 复的 病 情指数（DI）的平 均值确 定其抗 病水 平，划 分标 准 参照NY/T 1858.5，抗性评价 标准 的相 关信 息见 表2。表2 辣椒疮 痂病 的抗 性评 价标 准 病情指数（DI）抗性评价 DI=0 免疫（I）0 DI10 高抗（HR）10DI 30 抗病（R）30DI 50 中抗（MR）50DI 70 感病（S）DI70 高感（HS）7.2.2 鉴定结 果的 有效 性判 别 当感病 对照 的病 情指数 DI 50，该批 次的 抗疮 痂病 鉴定结 果即 为有 效。8 记载表 格 辣椒抗 疮痂 病鉴 定结 果记 载表3、表4。表3 辣椒抗 疮痂 病鉴 定记 载表（注射 法）编号 品种/种质名称 来源 重复 序号 病情分级 抗性评价 0 1 I II III 播种时间 接种时间 接种生育期 病原物编号 生理小种类型 调查时间 技术负责人（签字）DB42/T 1698 2021 5 表4 辣椒抗 疮痂 病鉴 定记 载表（喷雾 法）编号 品种/种质 名称 来源 重复 序号 病情分级 病情 指数 平均 病指 抗性 评价 0 1 3 5 7 I II III 播种时间 接种时间 接种生育期 病原物编号 生理小种类型 调查时间 技术负责人（签字）DB42/T 1698 2021 6 A A 附录A（资料 性）辣椒疮 痂病 病原 菌和 生理 小种 A.1 学名和形态描述 A.1.1 学名 辣椒细菌 性疮 痂病病 原菌 为野油菜 黄单 胞杆菌 辣椒 斑点病致 病变 种Xanthomonas campestris pv.Vesicatoria(Doidge)Dye.。A.1.2 形态特征描述 菌体短 杆状，两 端钝 圆，大小为(1.0 1.5)m(0.6 0.7)m；单极 生 鞭毛，能游 动；菌体排列成 链状，有荚 膜、无 芽胞；革兰氏 染色 阴性，好气；在YDC 平板培 养基 上，菌落 呈圆形，凸起，黄色，黏稠；病菌 发育 温度 范围5 40,最适 温 度27 30,致 死温 度为59 10 min。A.1.3 危害部位及症状 叶片染 病，初现 许多 圆形 或不整 齐水 浸状 斑点，黑 绿色至 黄褐 色，有时 出现 轮纹，病部 具不 整 齐 隆起，呈 疮痂 状，病斑 大小0.5 mm 1.5 mm，多 时融 合 成较大 斑点，引 起叶 片脱 落；茎 蔓染 病，病斑 呈不规则条 斑或 斑块，后 木栓 化或纵 裂为 疮痂 状；果实 染病，出现 圆或 长圆 形病 斑，稍 隆起，墨绿 色，后 期木栓化。A.2 生理小种 A.2.1 采用的鉴别寄主 国际上 通用的 辣椒疮 痂病 菌鉴别 寄主谱，共 包括5个 鉴别寄 主，分 别为：Early Calwonder（ECW，感疮痂 病 品 种）、ECW-10R（含Bs1 基 因）、ECW-20R（含Bs2 基 因）、ECW-30R（含Bs3 基 因）。A.2.2 生理小种鉴定 病原菌 分离 物接 种鉴 别寄 主后，根据 鉴别 寄主 病情 级别计 算其 病害 严重 等级 从而确 定抗 性反 应，以特定的 反应 组合 划分 生理 小种（表A.1）。表A.1 辣椒疮 痂病 病原 菌生 理小 种的鉴 定 生理小种 鉴别寄主/基因型 ECW No R gene ECW-10R Bs1 gene ECW-20R Bs2 gene ECW-30R Bs3 gene 辣椒生理小种0（P0）S R R R 辣椒生理小种1（P1）S S R R 辣椒生理小种2（P2）S R R S 辣椒生理小种3（P3）S S R S 辣椒生理小种4（P4）S S S R 辣椒生理小种5（P5）S R S S 辣椒生理小种6（P6）S S S S 辣椒生理小种7（P7）S S R R DB42/T 1698 2021 7 生理小种 鉴别寄主/基因型 辣椒生理小种8（P8）S S R S 辣椒生理小种9（P9）S S S R 辣椒生理小种10（P10）S S S S 番茄生理小种1（T1）R R R R 辣椒-番茄生理小种2（PT2）S R R S 辣椒-番茄生理小种3（PT3）S S R S 辣椒-番茄生理小种4（PT4）S S S R 辣椒-番茄生理小种5（PT5）S S S S