ICS 65.020.01 B 15 DB23 黑龙江省地方标准 DB 23/T 24242019 马铃薯早疫病检测技术规程 2019-07-23发布 黑龙江省市场监督管理局发 布 2019-08-22实施 DB23/T 24242019I前言 本标准依据GB/T 1.1-2009 的编写规则起草。本标准由黑龙江省农业农村厅提出。本标准由黑龙江省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：黑龙江省农业科学院马铃薯研究所、中国农业大学植物保护学院。本标准主要起草人：胡林双、王晓丹、闵凡祥、高云飞、王文重、杨帅、魏琪、董学志、郭梅、盛万民、白艳菊。DB23/T 242420191马铃薯早疫病检测技术规程 1范围 本标准规定了马铃薯早疫病田间检测和室内检测。本标准适用于马铃薯植株和块茎早疫病检测。2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 7331-2003 马铃薯种薯产地检疫规程 GB 8855 新鲜水果和蔬菜的取样方法 GB 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3田间检测 3.1抽样 抽样参照 GB 7331-2003 中 5.1.1.2 规定的方法执行。3.2田间症状鉴别 田间病株和薯块症状，以肉眼观察为主(参见附录A)。4室内检测 4.1取样方法 取样方法参照 GB 8855 中规定执行。4.2实验用水 实验用水应符合 GB 6682 的规定。4.3试剂 NaClO、盐酸、75%酒精、无菌水、马铃薯葡萄糖琼脂（PDA培养基），所用试剂级别均为分析纯。4.4仪器和器具 培养箱、生物显微镜、无菌操作台、载玻片和盖玻片、培养皿、酒精灯、手术刀、灭菌锅等。4.5操作步骤 DB23/T 2424201924.5.1 直接镜检 若样品发病部位已有霉层存在，可挑取其霉层直接镜检。若无霉层，则按以下步骤进行：将待检叶片用蒸馏水清洗晾干后，放入保湿器皿中，放在 25 培养箱内培养 1 d4 d 后，挑取霉层直接镜检；将待检块茎用自来水清洗后，用 1%NaClO 溶液表面消毒 3 min5 min，再用无菌水清洗 3 次，晾干，将块茎切片或直接放入保湿器皿中，放在 25 培养箱中暗培养 3 d5 d。挑取霉层直接镜检。4.5.2 分离培养后镜检 用无菌刀片切取病健交界处的叶片或块茎病组织，面积约为 5 mm5 mm 大小，放入 75%的酒精中进行组织表面消毒 2 min，用无菌水冲洗 3 次，再用无菌滤纸将叶片表面的水分吸干，放入无菌的 PDA 培养基上。每个培养基上一般放置 34 片，在 25 下恒温培养。3 d4 d 后，在无菌条件下挑取病组织周围长出的尖端菌丝，移入PDA培养基进行纯化培养。在 25 光（光照强度大于 3000 lux，16 h）和暗（8 h）交替恒温培养 4 d 左右，挑取少量菌丝，镜检。4.6结果判定 将压好的玻片放在生物显微镜下观察病原菌形态特征，如果镜下的分生孢子形态符合茄链格孢菌的形态特征，则判定为马铃薯早疫病菌（参见附录B）。DB23/T 242420193附录A（资料性附录）马铃薯早疫病主要典型症状 A.1马铃薯早疫病叶片症状 在植株下部叶片或老叶上产生小的、近圆形、褐色至深褐色病斑，病斑可迅速扩大，其上产生黑色同心轮纹和少量黑色霉层。严重时，整个病斑相互连接，但受叶脉限制成三角形或不规则形，最后穿孔，叶片变黄，干枯，甚至脱落。见图A.1。图A.1 马铃薯早疫病叶片症状 A.2马铃薯早疫病茎部症状 叶柄受害多发生于分枝处，病斑褐色，线条形，稍凹陷，扩大后呈灰褐色长椭圆形病斑，有轮纹。见图A.2。DB23/T 242420194图A.2 马铃薯早疫病茎部症状 A.3马铃薯早疫病块茎症状 块茎被侵染后，产生暗褐色，稍凹陷，圆形或近圆形病斑，大小不等，有的病斑，直径可达 2 cm。边缘明显，皮下呈浅褐色、海绵状干腐，深度一般不超过 6 mm，在老化的病斑上，可以产生裂缝。在贮藏期间病斑可增大，块茎皱缩。见图A.3。图A.3 马铃薯早疫病块茎症状 DB23/T 242420195A A 附录B（资料性附录）茄链格孢菌 Alternaria solani 形态特征 B.1马铃薯早疫病病原茄链格孢菌形态特征 马铃薯早疫病的病原为茄链格孢Alternaria solani(E.&M.)Sorauer。茄链格孢菌属于半知菌（Deuteromycota），丝孢纲（Hyphomycetes），丛梗孢目（Moniliales），暗色孢科（Dematiaceae）。分生孢子梗单生或丛生，长不超过 110 m，宽 6 m10 m。分生孢子单生，倒棍棒形至长椭圆形，淡金黄褐色至榄褐色，具长喙，表面光滑，911 个横隔膜，0 至数个纵隔膜，150 m300 m15 m19 m。喙长等于或长于孢身，有时有分枝，喙宽 2.5 m5 m。见图B.1。图B.1 显微镜下马铃薯早疫病病原 Alternaria solani 分生孢子形态特征