ICS 65.020.01 CCS B 30 41 河南省地方标准 DB41/T 2188 2021 金银花组 织培养育 苗技术规 程 2021-10-19 发布 2022-01-18 实施 河南省市 场监督 管 理局 发 布 DB41/T 2188 2021 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规 范性 引用 文件.1 3 术 语和 定义.1 4 设 施设 备.1 5 组 织培 养.2 6 温 室驯 化.3 附录A（资 料性）培养 基成分.4 DB41/T 2188 2021 II 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标准 化工 作导则 第1 部分：标准化 文件 的结构 和起草 规则 的规 定起草。本文件 由河 南省 农业 农村 厅提出 并归 口。本文件 起草 单位：河 南科 技学院、封 丘县 金银 花产 业协会、安 阳市 农产 品质 量安全 检测 中心、河 南大学、新乡 市正 源农 业科 技有限 公司、封 丘县 尔玉 中药材 有限 公司。本文件 主要起 草人：李勇 超、杨 靖、赵 元增、王广 军、王 秀平、宋琳 琳、李 明亮、孙海燕、赵 航、李正晗、姚 自动、王 峰。DB41/T 2188 2021 1 金 银花组 织培养育 苗技术 规程 1 范围 本文件 规定 了金 银花 组织 培养育苗 的 术语 和定 义、设施设 备、组织 培养 和 温 室驯化。本文件 适用 于金 银花 组织 培养育 苗。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。LY/T 1882 2010 林 木组 织培养 育苗 技术 规程 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。3.1 金银花 忍冬科 植物 忍冬（Lonicera japonica Thunb.）。3.2 组织培 养 在无菌 条件 下，将 离 体的 植 物器官、组 织、细胞 以及 原 生质体，在 人工 培养 基和 人 工控制 的环 境中，使其再 生新 植株 的过 程和 技术。3.3 外植体 用于植 物组 织培 养的 离体 植物器 官、组织、细 胞以 及原生 质体。3.4 初代培 养 在组织 培养 过程 中,最初 建 立的外 植体 无菌 培养 阶段。3.5 继代培 养 将初代 培养 获得 的茎 段 或 愈伤组 织，通过 分离 切割 接种在 新的 培养 基中，从 而获得 大量 无菌 幼 苗 的培养阶 段。4 设施设 备 组织培 养设 施设 备 4.1 4.1.1 基本要 求 组织培 养室 选址 应环 境清 洁，远 离微 粒和 烟雾 等污 染源，水电 供应 充足，交 通运输 便利。DB41/T 2188 2021 2 组织培 养室 包括 洗涤 室、灭菌室、培 养基 配制 室、缓冲室、无 菌接 种室 和无 菌培养 室等。4.1.2 洗涤室 设备 配备自 动或 半自 动洗 瓶机、水槽、收 纳箱、量 瓶架 等。4.1.3 灭菌室 设备 配备高 压蒸 汽灭 菌锅、器 械消毒 器、紫外 线 灯、烘 干箱、微孔 过滤 器等。4.1.4 培养基 配制 室设 备 配备电 子天 平（0.0001 g,0.01 g）、酸度 计、微波 炉、冰 箱等。4.1.5 缓冲室 设备 配备衣 帽柜、风 淋装 置等。4.1.6 无菌接 种室 设备 配备超 净工 作台、器 械消 毒器、酒精 灯等。4.1.7 无菌培 养室 设备 配备培 养架、紫 外灯、臭 氧发生 器、空气 加湿 器、除湿机、时 控装置 等。温室驯 化 设 施设 备 4.2 日光温 室，配备 温 湿 度调 节装置、光 照控 制装 置、灌溉设 备、栽培 床、穴盘 等。5 组织培 养 外植体 取材 与灭 菌 5.1 5.1.1 外植体 取材 选取生 长健 壮、无 病虫 害 的金银 花当 年生 嫩枝，截 取长度 为0.5 cm 3 cm的芽段，每个 芽段 包含13个腋 芽。5.1.2 外植体 处理 将截取 的芽 段置于1%中性 洗涤剂 中浸 泡10 min，再 用自来 水冲 洗30 min。5.1.3 外植体 灭菌 在超净 工作 台内，将 处理 过的芽段 置 于无 菌培 养瓶 中，加 入2.5%次 氯酸 钠（按有效 氯计）溶液浸泡20 min，再 用 灭 菌蒸 馏水 冲洗4 次，以获 得无 菌的 外 植体用 于接 种。培养基 成分 5.2 芽段初 代培 养与 继代 培养 所需培 养基 成分 见附 录A，培养基pH 5.8。外植体 的接 种 5.3 将经过 灭菌 的芽段 置 于超 净工作 台内，无 菌接 种。DB41/T 2188 2021 3 初代培 养 5.4 外植体 接种于300 mL 650 mL培养 瓶中，每瓶 分装培 养基高度1.0 cm1.5 cm，每10 mL培 养基接种1个 芽段。置 于无 菌培 养 室中培 养20 d 30 d。培养室 设置 光照 强度2000 lx 3000 lx，光照 时间14 h/d，湿度60%，温 度25 2。继代培 养 5.5 将初代 培养 获得 的不 定芽 分割成1 cm3的 不定 芽块，按5.4 的方 法接 种培 养，扩 繁获得 大量 的不 定芽块。生根培 养 5.6 从继代 培养获 得的 不定芽 块中分 离高度 2 cm 的健 壮不定 芽，按5.4的 方法 接 种培养，其中 光照 强度设置 为3000 lx。获得 根 芽齐全 的金 银花 无菌 幼苗。6 温室驯 化 6.1 将 根芽 齐全 的无 菌幼 苗带瓶 转移 至温 室中，日 光锻炼5 d 7 d，然 后开 瓶锻炼3 d 5 d，及时加水保湿。6.2 将 锻炼 好的 幼苗 从培 养瓶中 取出，用 自来 水冲 洗根部10 min，洗净 根系 附 着的培 养基，置 于适宜浓度的农 用杀 菌剂 中，浸泡 处理，然后 定植 于珍 珠岩 基质的 穴盘 中，喷水 保湿。DB41/T 2188 2021 4 A A 附录A（资料 性）培养基 成分 金银花 组织 培养 培 养 基成 分见表A.1。表A.1 金银 花组 织培 养培 养基 成 分表 培养基 成分 初代培养基 mg/L 继代培养基 mg/L 生根培养基 mg/L 无机成分 硝酸铵 NH4NO3 1650 1650 825 硝酸钾 KNO3 1900 1900 950 磷酸二氢钾 KH2PO4 170 170 85 七水硫酸镁 MgSO4 7H2O 370 370 185 二水氯化钙 CaCl2 2H2O 440 440 220 四水硫酸锰 MnSO4 4H2O 22.3 22.3 22.3 硼酸 H3BO3 6.2 6.2 6.2 七水硫酸锌 ZnSO4 7H2O 8.6 8.6 8.6 碘化钾 KI 0.83 0.83 0.83 二水钼酸钠 Na2MoO4 2H2O 0.25 0.25 0.25 五水硫酸铜 CuSO4 5H2O 0.025 0.025 0.025 六水氯化钴 CoCl2 6H2O 0.025 0.025 0.025 乙二胺四乙酸二钠Na2EDTA 2H2O 37.3 37.3 37.3 七水硫酸亚铁 FeSO4 7H2O 27.8 27.8 27.8 维生素 肌醇 Myo-inositol 100 100 100 盐酸硫胺素 Thiamine HCl 0.1 0.1 0.1 盐酸吡哆醇 Pyridoxine HCl 0.5 0.5 0.5 烟酸 Nicotinic Acid 0.5 0.5 0.5 氨基酸 甘氨酸 Glycine 2 2 2 植物生长调 节物质 萘乙酸 NAA 0.1 0.05 0 六苄基腺嘌呤6-BA 1.0 1.0 0.1 吲哚丁酸 IBA 0 0 1.5 附加物 活性炭 Active Carbon 3000 0 0 蔗糖 Sucrose 30000 30000 30000 琼脂 Agar 4000 4000 4000