ICS 65.020.20 CCS B05 23 黑龙江省地方标准 DB 23/T 3109 2022 大豆对菌 核病田间 抗性鉴定 技术规程 Technical specification for the resistance identification of soybean cultivars against Sclerotinia sclerotii in field 2022-03-03 发布 2022-04-02 实施 黑龙江省 市场监 督 管理局 发 布 DB 23/T 3109 2022 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标准 化工 作导则 第1 部分：标准化 文件 的结构 和起草 规则 的规 定起草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任。本文件 由黑 龙江 省农 业农 村厅提 出。本文件 起草 单位：黑 龙江 省农业 科学 院大 豆研 究所、黑龙 江省 农业 科学 院植 物保护 研究 所。本文件 主要 起草 人：王 家 军、孟庆 林、李 易初、张 瑞萍、马 立功、于佰 双、王广金、张必 弦、马 云凤、李 进荣、高 明杰、刘 秀林、王雪 扬、刘鑫 磊、王金生、任 洪雷、张 丰屹、何雯 瑾。DB 23/T 3109 2022 1 大 豆对菌 核病田间 抗性鉴 定技术规 程 1 范围 本文件 规定 了大 豆对 菌核 病田间 抗性 鉴定 技术 规程 的术语 和定 义、技术 流程、评价标 准和 技术 档 案。本文件 适用 于大 豆种 质资 源（品 种/品系）对 菌核 病 抗性 筛 选。2 规 范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB 4404.2 粮食 作物 种子 豆类 GB 5084-2005 农田 灌溉 水 质标准 农 用地 土壤 污染 风 险管控 标准（试 行）3 术 语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。3.1 菌种纯 化 挑取分 离的 大豆 菌核 病菌 的菌丝 尖端，将 其放 置于 新鲜PDA 平 板上，以 获得 新 生菌落 的方 法。3.2 活化培 养 将中、长期 低温 保存 的菌 种，重 新在 新鲜 的PDA 平 板 上培养 的过 程。3.3 马铃薯 改良 培养 基 将新鲜的 马铃薯和胡萝卜去皮，切 成1cm3小块，按1:1 比例混 匀，装入硫酸纸封口的玻 璃瓶2/3处，121 高压 灭菌20分 钟。3.4 菌种扩 繁 将活化 的菌 种接 种在 马铃 薯改良 培养 基上 暗培 养，获得大 量菌 核的 过程。3.5 鉴定圃 DB 23/T 3109 2022 2 按不同 试验 目的 和要 求设 计的，供试 大豆 材料 排布 的试验 小区。3.6 抗病性 植 物体 所具 有的 能够 减轻或 克服 病原 物致 病作 用的可 遗传 性状。3.7 严重度 发病植 株或 器官 单元 上发 病面积 或体 积占 该单 元总 面积或 总体 积的 百分 率，亦可用 分级 法表 示，即将发病 的严 重程 度由 轻到 重划分 出几 个级 别，分别 用一些 代表 值表 示，表明 病害发 生的 严重 程度。3.8 病情指 数 通过对 植株个 体发 病程度（病情 级别）数值 的综合 计算所 获得的 群体 发病程 度的数 值化描 述形 式。病情指 数计 算公 式如 下：病情指 数=各 级病 株数 相应的 发病 级别/调查总 株数 最大级 别 4 技 术流 程 4.1 选地 选择地势平坦的田块，周围设置1m 保护行。依据供试材料的数量设置若干个小区，小区内采取 垄作栽培，垄 距65cm，行 长5m，每份 材料 种3 行，株 距7cm，3 次重 复，随机 区 组排列。4.2 田间 管理 大豆种 植全 过程 采用 常规 田间管 理，其间 可防 虫、除草，但不 应施 用任 何杀 菌剂。在大 豆生 长 的 中后期，若发 生倒 伏，需及 时搭架。4.3 接种 4.3.1 接 种体 制备 菌核体 的制 备：先 将保 存 的菌核 表面 消毒 后置 于新 鲜的PDA 平 板上 培养，7d 后 移至新 鲜的 马铃 薯改良培养 基上，在18 20 的培 养箱 中暗 培养4 周，待产生 黑色 坚硬 菌核 后，用清水 洗出 其中 菌核，阴干，常 温 通 风处 保存 备用。子囊孢 子悬 浮液 制备：将 菌核埋 入潮 湿的 灭菌 沙中 置于4 冰箱 低温 处理，4 周后取 出置 于装 有湿 沙的发芽 盒中，20 下 黑暗 培养，待 产生 子囊 盘柄 后 添加200Lux 光照，待 子囊 盘弹 射 子囊 孢子 时，收 集 子囊孢子，并 用无 菌水 稀释 成浓度 为1.0 105个子 囊孢 子/mL，用于 喷雾 接种。4.3.2 接 种方 法 DB 23/T 3109 2022 3 田 间菌 核接 种法：按 当地 播期进 行小 区播 种，种子 质量符 合GB 4404.2 标准。播种后7d 内按 每延 长米0.5g，将菌核均匀施于试验区地表，覆土2-3cm，试验区免中耕。若遇大豆花期气候干旱，应对试验区进行 微喷 灌，保持 土壤 湿润。子囊孢 子悬 浮液 接种 法：在大豆 盛花 期对 大豆 茎秆 及花进 行喷 雾接 种，接种 时间应 选在 傍晚 或 阴 雨天，接种 量以 雾滴 均匀 分 布在茎 秆、花 上不 滑落 为 宜，接种 后对 试验 区进 行 微喷灌，灌溉 水符 合GB 5084 标准。以上两 种接 种方 法可 以任 选其一。4.4 病情 调查 4.4.1 调 查时 间 田间菌 核接 种区 于发 病盛 期进行 病情 调查；子 囊孢 子悬浮 液接 种区 于接 种 20d 后调 查病 情。并 在 收获前统 一调 查 1 次 茎秆 病 斑长度 和瘪 荚率。4.4.2 调 查方 法 选取行 中部 的植 株调 查 50 株，记 录每 株的 病级，结 果记入 表 A.1。4.4.3 大 豆菌 核病 病情 分 级指标 1 级：全 株无 症状 或茎 上 有微小 点状 病斑，植 株生 长正常；3 级：前 期叶 腋处 及侧 枝 轻度感 病，后期 主茎 上病 斑长度 小 于 3cm，瘪 荚率 低于 10；5 级：前 期主 茎及 侧枝 均生 有菌丝 并呈 水浸 状腐 烂，后 期主茎 上病 斑长 度 3cm 6cm，病斑 处苍 白，瘪荚率 为 10%30；7 级：前期 主茎 和侧 枝均 生 长大量 菌丝，呈 严重水 浸 状腐烂，后 期病 斑处苍 白，主茎内 外密 生菌 核，病斑长 度 6cm 15cm，瘪 荚率 为 30%50；9 级：前 期严 重感 病，基 本上达 到枯 死程 度，后期 主茎上 病斑 超过 15cm，病 茎内外 密生 菌核，瘪荚率 达 50 以上。5 评 价标 准 5.1 调查 数据 整理 将大豆 菌核 病的 田间 调查 数据、鉴定 圃农 事操 作及 相关情 况进 行电 子数 据登 记。计 算每 个大 豆 材 料的病情 指数，登 记到 表 A.1 中。5.2 抗病 性评 价标 准 依据大 豆材 料的 病情 指数 评价其 抗病 性，评价 标准 见表 A.2，并记录 在 表 A.1 中。5.3 重复 鉴定 初次鉴 定中 表现 为抗 病、中抗的 材料，次 年需 进行 重复鉴 定。DB 23/T 3109 2022 4 6 技 术档 案 建立大 豆菌 核病 人工 接种 鉴定技 术档 案，内容 包括 环境条 件、技术 流程、评 价标准 及试 验数 据等。DB 23/T 3109 2022 5 附录 A 资料性 大豆菌 核病 田间 调查 表 表A.1 大 豆菌 核病 病株 田 间调查 记录 表 调查时 间：供试材料编号 1 级 3 级 5 级 7 级 9 级 病情指数 抗性评价 表A.2 大 豆菌 核病 抗性 评 价标准 病情指 数 抗性评 价 10%抗病 Resistant 10.1%30.0%中抗 Moderately resistant 30.1%50.0%中感 Moderately susceptible 50.1%75.0%感病 Susceptible 75.1%100.0%高感 Highly susceptible