ICS 65.020.01 CCS B 05 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 3284 2023 北虫草菌 种 制作技 术规程 Technology code of pratice of production for cordyceps militaris spawns 2023-12-29 发布 2024-01-29 实施 内蒙古自 治区市 场 监督管理 局 发 布 DB15/T 3284 2023 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分：标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定起草。本文件 由内 蒙古 自治 区果 蔬标准 化技 术委 员会（SAM/TC 25）归 口。本文件 起草 单位：内蒙 古 自治区 农牧 业技 术推 广中 心、内蒙 古自 治区 农牧 业 科学院、内蒙 古农 业大学、赤 峰市 敖汉 旗农 牧局、兴安 盟农 牧技 术推 广中 心。本文件 主要 起草 人：李志 平、鲍 红春、苑 兴文、肖 强、于 传宗、贺 龙、朱玉 成、王 佐、李文 彪、庞杰、李 小雷、贺 琪、贾晓 东、邓 海峰、闫 庆琦、季 祥、郑 莎、肖杰、张 娜。DB15/T 3284 2023 1 北虫草菌 种制作 技术规程 1 范围 本文件 规定 了北 虫草 菌种 生产要 求、菌种 制备、检 验、贮 存技 术。本文件 适用 于北 虫草 各级 菌种生 产。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB 5749 生活 饮用 水卫 生 标准 NY/T 528 食用 菌菌 种生 产技术 规程 NY/T 1731 食 用菌 菌种 良 好作业 规范 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。北虫草 cordyceps militaris 又名蛹 虫草、北 冬虫 夏草，隶属 于子 囊菌 门、虫 草 科、虫 草属，是一 种药、食用菌。子 实体 为棒 状或蝌蚪 状，高45 mm 50 mm，淡 黄色。菌种 spawn 生长在 适宜 基质 上具 结实 性的菌 丝培 养物，包 括母 种、原 种和 栽培 种。液体菌 种 liquid spawn 用液体 培养 基在 生物 发酵 罐等容 器中，通 过深 层培 养技术 生产 的液 体形 态食 用菌菌 种。母种 stock culture 经分离、纯 化、杂交、诱 变 等各种 方法 选育 得到 的具 有结实 性菌 丝培 养物 及其 继代培 养物，也 称 一级种。DB15/T 3284 2023 2 原种 preculture spawn 由母种 移植、扩 大培 养而 成的菌 丝体 纯培 养物，也 称为二 级种。栽培种 spawn 由原种 移植、扩 大培 养而 成的菌 丝体 纯培 养物，也 称为三 级种。4 生产要 求 技术人 员 菌种生 产的 技术 人员 是经 过培训 能够 掌握 专业 知识、制作 菌种 达到 相关 技术 要求的。场地选 择 4.2.1 选址 选择水 电和 交通 便利、通 风良好、便 于供 排水 的场 地。4.2.2 环境卫 生 要求500 m 之内 无畜 禽养 殖 场、无 垃圾 场、无污 水和 其它污 染源，远 离北 虫草 种植区，尤 其是 远 离北虫草 栽培 废弃 物晾 晒场，用水 符合GB 5749 相关 规 定。设施、设备 4.3.1 原材料 库 通风、防雨、防 潮、防虫、防鼠、防 火、防杂 菌污 染等。4.3.2 配料室、分 装室 水电便 利，通风 良好、空 间充足，配 料室 配磅 秤、天平、搅拌 机，分装 室配 分装器 等。4.3.3 灭菌室 水电安 全便 利、通风 良好、空间 充足，配有 高压 灭 菌锅或 灭菌 柜、消防 等设 施。如 果使 用煤、天然气加热，要 求灭 菌设 施的 出料门 与加 热灶 有隔 断设 施。4.3.4 冷却室 及接 种室 洁净、防尘。冷却 室通 风 良好，配紫 外灯；接种 室 门口设 缓冲 间或 风淋 室，配有超 净工 作台、接 种枪、高 压泵、酒 精灯、紫 外灯、防火 设备 等。4.3.5 培养室 洁净、水电 畅通、通 风良 好，配 有恒 温培 养箱 或培 养架、摇床、发 酵罐、空 调、杀 菌设 备等。4.3.6 菌种检 验室 DB15/T 3284 2023 3 水电畅 通，配有 显微 镜、pH 计、菌落 计数 器等。容器 4.4.1 母种 玻璃试 管（18 mm 180 mm 或20 mm 200 mm）或 平板 培 养皿，（90 mm 90 mm），试 管塞 带有 砂芯或者不 带砂 芯的 硅胶 塞。4.4.2 原种 耐高温 高压 的透 明洁 净摇 瓶或聚 丙烯 塑料 瓶。4.4.3 栽培种 耐高温 高压 的带 有透 气盖（膜）玻璃 瓶、聚丙 烯塑 料瓶或 不同 容积 规格 发酵 罐。原料 葡萄糖、蛋 白胨、硫 酸镁、磷酸二 氢钾 等化 学试 剂，马铃薯、小 麦、麦麩 等要 求 新鲜、干燥、无 虫、无霉变。5 菌种制 备 培养基 制备 5.1.1 母种 配方为 马玲 薯200 g(煮汁)、葡萄 糖20 g、琼脂20 g、蛋白 胨5 g、牛 肉膏0.5 g、酵 母粉5 g、磷酸二氢钾1 g、硫酸 镁0.5 g，加水 定容1000 mL，pH6.5 7.0。分 装至 试管 中，分装量 掌握 在试 管长 度 的1/4。5.1.2 原种 配方为 马玲 薯200 g(煮汁)、葡萄 糖20 g、蛋 白胨5 g、牛肉 膏0.5 g、酵 母粉5 g、磷酸 二氢 钾1 g、硫酸镁0.5 g，加 水定容1000 mL，pH6.5 7.0。将 液 体培养 基分 装至 容器 内，分装量 不超 总容 积的3/5。5.1.3 栽培种 制 备配 方和 方法 同原 种，分 装量 不超 过摇 床培 养容器 或发 酵罐 总容 积的3/5。灭菌 培养基 采用 常压 或高 压灭 菌，在 高 压121 123（0.11 MPa 0.15 MPa）条件下 灭 菌 20 min 25 min，常压100 105 灭菌 10 h 12 h，自 然冷却 到50 左右 时，取出试 管，摆放 斜面，原种和栽 培种 取出 备用。接种 5.3.1 母种 在超净 工作 台上，取 一段 消毒好 的子 实体 或培 养的 菌丝体 放入 试管 培养 基质 中间部 位，操作 过程 按照NY/T 1731 的 规定 执行。DB15/T 3284 2023 4 5.3.2 原种 每升接 入4 5块（2 mm 2 mm）母 种，迅 速置 于原 种 培养基 内，及时 盖上 瓶盖，所有 操作 按照NY/T 528的 规定 执行。5.3.3 栽培种 按栽培 培养 基体 积的2%取 原种，迅速 放入 栽培 种培 养基内，及 时盖 上瓶 盖，所有操 作按 照NY/T 528的规定 执行。培养 5.4.1 母种 将接好 的试 管置 于20 的 恒温培 养箱 中暗 培养6 d 8 d，长至4 cm 5 cm 时使 用，或 转置 于光 照强度为200 Lx 下 培养2 d 3 d转 色后 使用。5.4.2 原种和 栽培 种 置于18 22、120 r/min 150 r/min 可控 温 摇床上 或发 酵罐 中暗 培养5 d 7 d，当培 养基颜色变 为棕 色或 黄白 色，且有大 量菌 丝碎 片，不浑 浊。6 检验 取少量 培养 后的 菌种 在显 微镜上 进行 检测，无杂 菌、无异 味，有北 虫草 菌种 特 有的清 香味 即合 格后使用。7 贮存 培养好 的菌 种可 以置 于0 5 的保 鲜箱 中贮 存，母种 贮存 时间 不能 超过30 d，原种 和栽 培种贮存时 间不 能超 过10 d。